摘要gydF4y2Ba
炎症和蛋白水解过程在囊性纤维化(CF)肺部疾病的进展中起重要作用。本研究的目的是描述CF患者与对照组相比的支气管肺泡灌洗液(BALF)蛋白模式,并评估表面活性剂蛋白A (SP-A)是否存在蛋白水解降解,SP-A是肺部重要的先天宿主防御成分。gydF4y2Ba
采用双向凝胶电泳法分离17例临床稳定型CF患者和8例健康儿童的balf。银染色显示BALF蛋白,Western印迹检测SP-A亚型。gydF4y2Ba
在CF中,低分子量≤20kd的BALF蛋白比对照组丰富。在CF中发现了不同的蛋白质,而这些蛋白质在对照组和gydF4y2Ba反之亦然gydF4y2Ba。在17例CF balf中有15例存在SP-A降解,但在对照组中没有,相反,在所有对照组和17例CF患者中的4例中均观察到聚合异构体。gydF4y2Ba
囊性纤维化患者肺表面活性剂蛋白A的蛋白水解损伤和正常支气管肺泡灌洗液蛋白的显著改变。鉴定改变的支气管肺泡灌洗液蛋白可能为致病机制提供新的见解,并为治疗提供新的靶点。gydF4y2Ba
该项目得到了Wilhelm Sander Stiftung (Gr 93.002.1/2)的资助。gydF4y2Ba
囊性纤维化(CF)是一种由CF跨膜传导调节因子(CFTR)基因突变引起的致死性遗传性疾病,可导致外分泌腺分泌异常和气道慢性炎症。活化中性粒细胞的大量涌入和高水平的蛋白水解酶在CF肺病的进展中起主要作用,并发生在生命早期gydF4y2Ba1gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba。CF患者的气道易受各种微生物感染,最明显的是gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba,gydF4y2Ba金黄色葡萄球菌gydF4y2Ba和gydF4y2BaHaemophilis流感嗜血杆菌gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
支气管肺泡灌洗液(BALF)蛋白是检测和表征与气道疾病相关的生化改变的潜在来源。在健康受试者中,BALF蛋白主要被鉴定为血清蛋白gydF4y2Ba4gydF4y2Ba,gydF4y2Ba5gydF4y2Ba。鼻液或BALF蛋白质组(在特定隔室中表达的一组蛋白质)的改变迄今已被报道用于有限数量的呼吸系统疾病,不包括CFgydF4y2Ba5gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba8gydF4y2Ba。本研究分析了CF患者与对照组之间BALF蛋白组的差异。此外,亲水表面活性剂相关蛋白A (SP-A)在宿主空间防御中起着核心作用gydF4y2Ba9gydF4y2Ba被重点关注。gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba研究证实了SP-A在肺部先天免疫系统中的重要作用,表明其对gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2BaSP-A敲除小鼠中存在B组链球菌gydF4y2Ba10gydF4y2Ba。人SP-A是一种由18条多肽链组成的糖蛋白,每条多肽链分子量约为34 kD,等电点4.2-4.9。SP-A与多种细菌、病毒和真菌相互作用,包括CF相关病原体asgydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba,gydF4y2Ba金黄色葡萄球菌gydF4y2Ba,gydF4y2Bah .流感gydF4y2Ba9gydF4y2Ba和gydF4y2Ba来自烟曲霉属真菌gydF4y2Ba11gydF4y2Ba并增强吞噬细胞对这些生物的吸收gydF4y2Ba12gydF4y2Ba。肺中必须有足够数量的功能性SP-A来维持宿主的防御。在先前的研究中,已证实CF中SP-A的BALF浓度发生了变化gydF4y2Ba13gydF4y2Ba,gydF4y2Ba14gydF4y2Ba。基于gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba研究gydF4y2Ba15gydF4y2Ba,gydF4y2Ba16gydF4y2Ba, SP-A很可能发生降解gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba这可能导致CF中宿主防御功能受损。gydF4y2Ba
使用高分辨率二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE), 17名CF患者与8名健康儿童相比,出现了BALF蛋白质组和SP-A的改变。gydF4y2Ba
材料与方法gydF4y2Ba
患者人群gydF4y2Ba
BALF来自8名健康儿童和17名CF患者。健康受试者在参加本研究前2个月内无慢性呼吸道疾病或上、下呼吸道感染史。这些儿童正在接受非肺部疾病的选择性手术。经书面知情同意后,术前在全身麻醉和气管插管下行BAL。gydF4y2Ba
17例CF患者临床病情稳定,治疗方法无变化。随机选择CF门诊患者(表1)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。该病的典型临床表现和所有CF患者的汗液试验阳性证实了诊断。在遗传分析中,17例CF患者中有6例为ΔF508纯合子,8例为杂合子,3例为其他罕见突变。在评估时,没有受试者出现肺部疾病的急性加重。BAL手术在局部麻醉下进行。研究方案由机构审查委员会批准,并在研究前获得所有儿童和年龄较大儿童家长的书面知情同意。gydF4y2Ba
囊性纤维化患者与健康对照者的临床特点gydF4y2Ba
支气管肺泡灌洗gydF4y2Ba
在柔性支气管镜下行右中叶BAL,用量为3 mL·kggydF4y2Ba−1gydF4y2Ba如前所详细描述的0.9% NaClgydF4y2Ba13gydF4y2Ba。为了进一步分析,BALF通过一层松散的无菌纱布过滤,并在200×下离心gydF4y2BaggydF4y2BaBAL后立即在4°C下放置10分钟。为了避免gydF4y2Ba体外gydF4y2Ba降解蛋白质,等分BALF上清立即在-70°C冷冻直至检测。使用细胞自旋BALF制剂评估细胞差异,并用标准技术评估细菌学。gydF4y2Ba
中性粒细胞弹性酶活性的测定gydF4y2Ba
用特定底物分光光度法测定中性粒细胞弹性酶(NE)活性gydF4y2BaNgydF4y2Ba-如前所述的- ala - ala - ala -p-硝基苯胺(弹性蛋白产品公司,欧文斯维尔,密苏里州,美国)gydF4y2Ba13gydF4y2Ba,gydF4y2Ba15gydF4y2Ba。测定在96孔板上进行。在自动记录分光光度计(Anthos HT III, Anthos Labtech Instruments,萨尔茨堡,奥地利)上连续测量吸收变化5min。通过比较从BALF样品中获得的值与同时运行的标准值(875 U·mg)来确定NE活性gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba,弹性蛋白产品公司,欧文斯维尔,密苏里,美国)。所有样本一式三份进行评估。gydF4y2Ba
二维电泳gydF4y2Ba
加入Pefabloc蛋白酶抑制剂(Merck, Darmstadt, Germany)后,在4°C(管道切断1 kD)下广泛透析脱盐灌洗液等分液。冻干前评估蛋白质含量,在还原和变性条件下,根据GÖrg通过水平高分辨率双向电泳分离总蛋白为80µg的样品gydF4y2Ba17gydF4y2Ba。在初步实验中,显示了凝胶上蛋白质斑点的位置和丰度的高再现性。凝胶是银色的gydF4y2Ba18gydF4y2Ba或将蛋白质转移到硝化纤维素膜上(Amersham Pharmacia Biotech, Uppsala, Sweden)进行半干Western印迹。人SP-A特异性多克隆抗体鉴定SP-A (1:5000;Byk Gulden,康斯坦茨,德国)。从肺泡蛋白沉积症患者中分离纯化的人SP-A作为标准。Clara细胞蛋白(兔抗人尿蛋白1)、白蛋白和αgydF4y2Ba1gydF4y2Ba蛋白酶抑制剂(αgydF4y2Ba1gydF4y2Ba-PI)也用特异性抗体鉴定(Dako, Glostrup, Denmark)。增强化学发光试验(Amersham Life Science, Amersham, Buckinghamshire, UK)使用辣根过氧化物酶偶联山羊抗兔多克隆免疫球蛋白(Ig)-G (1:10 000;BioRad, Hercules, CA, USA)作为第二抗体进行检测。gydF4y2Ba
用计算密度计(Fluor-S MultiImager, Melanie 2.1软件(BioRad, Richmond, CA, USA))扫描染银的凝胶和印迹。为了找到凝胶之间对应的蛋白点,将每组(CF和对照组)的所有银色染色凝胶堆叠,并根据分子量、等电点标准和每个凝胶中存在的15个手工选择的标记进行匹配。用Melanie 2.1软件创建了两个“合成凝胶”,一个用于CF,一个用于对照。这些凝胶只含有每组的特征蛋白点,这些蛋白点在每组所有凝胶中检测到的比例≥85%gydF4y2Ba19gydF4y2Ba。这些合成凝胶与另一组的凝胶(gydF4y2Ba如。gydF4y2BaCFgydF4y2Ba与gydF4y2Ba对照)来识别蛋白质斑点模式的差异。通过测量斑点的相对体积(Vol%)来直接定量银染色凝胶中的蛋白质或进行Western blot分析。体积%的计算方法是将单个点的体积除以凝胶中所有点的体积之和乘以100。点的体积定义为∑I (x,y),其中I (x,y)定义为点p (x,y)的强度,p (x,y)是点的一部分。I (x,y)是由软件计算依赖于斑点相对于银染色性质的饱和度gydF4y2Ba19gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
统计分析gydF4y2Ba
结果表示为n个独立测定的平均值±sem。对连续变量进行非配对双尾t检验,对频率进行卡方检验,通过计算Pearson相关系数进行相关分析。gydF4y2Ba
结果gydF4y2Ba
CF组BALF的总细胞数和分化细胞数与对照BALF有显著差异(表1)gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba)表现出众所周知的中性粒细胞为主的炎症gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba。在17例CF患者的游离BALF上清液中,有14例存在游离NE,而对照组中没有(CF 10.4±2.8 U·mL)gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)。弹性酶活性与BALFs中中性粒细胞计数相关(r=0.6;p = 0.014)。CF的BALF中总蛋白含量高于对照组(CF 314±46µg·mL)gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba;对照105±32µg·mLgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba;P =0.007),与细胞总数相关(r=0.75;P =0.0006),中性粒细胞计数(r=0.77;p=0.0006), BALF中NE活性(r=0.71;p = 0.0014)。gydF4y2Ba
支气管肺泡灌洗蛋白质组gydF4y2Ba
所有CF患者和对照组的BALF蛋白均通过2D-PAGE分离并银染色。CF BALF蛋白显示与对照组有较大差异(表2)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba,图1gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。在对照组中,白蛋白是BALF中最丰富的单一蛋白(估计占总银染色蛋白体积%的26.3±3%)。人血清白蛋白抗体的Western blot分析显示,白蛋白在CF - BALF中不常见。未发现白蛋白的蛋白水解片段。而在CF中,BALF αgydF4y2Ba1gydF4y2Ba-PI是最主要的蛋白(9.3±1.9 Vol%),但在对照组中不常见(表2)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba,图1gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。α的体积百分比gydF4y2Ba1gydF4y2Ba-PI与NE (U·mL)活性相关gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba) (r=0.75;p < 0.0005)。与对照组相比,CF中银染色凝胶上的低分子量(LMW)蛋白更丰富(图1)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。因此,在每个凝胶中任意创建两组相对于高(bbb20 kD)或低(≤20 kD)分子量的蛋白质。在CF BALF中,≤20kd的LMW蛋白斑点占可见斑点的40%,与对照BALF相比,近50%的总蛋白(以总银染色蛋白的Vol%估计)升高了3 - 7倍(表2)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba;图1gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。LMW蛋白体积%≤20kd与BALF中性粒细胞计数呈正相关(r=0.6;p = 0.015)。与NE活性、1秒用力呼气量(FEV)无显著相关性gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)、BAL年龄或总蛋白质含量。BALF细菌培养阳性的CF患者(n=10)在LMW≤20kd处的斑点明显多于未见细菌学结果的患者(43.2±2.1%)gydF4y2Ba与gydF4y2Ba凝胶上斑点总数的35.3±2.8%;p = 0.025)。gydF4y2Ba
a)健康儿童和b)囊性纤维化(CF)患者的支气管肺泡灌洗液(BALF)蛋白具有代表性的高分辨率二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE)模式,显示中度人中性粒细胞弹性酶活性(3.9 U·mL)gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)。分离蛋白用银染色法检测。在线性固定pH梯度pH 3-10的还原条件下进行2 D-PAGE,然后进行12%的SDS-PAGE。该图包含扫描凝胶,呈现为未经处理的图像,除了使用图形处理程序的整体对比度。鉴定的蛋白质用数字表示。1:表面活性剂蛋白A*;2:白蛋白*;3:免疫球蛋白A α链;4:免疫球蛋白G重链*;5:免疫球蛋白G轻链κ,λ*; 6: α1-PI+gydF4y2Ba。通过*:与Swiss-2D PAGE数据库中的主血浆模式比较鉴定蛋白质;gydF4y2Ba+gydF4y2Ba:免疫印迹法。gydF4y2Ba
高分辨率二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE)分离银染色蛋白的分析gydF4y2Ba
在CF - BALF中发现了一些蛋白质,但在对照组和对照组中没有gydF4y2Ba反之亦然gydF4y2Ba。为了在凝胶上定位这些蛋白,使用Melanie 2.1软件包(Biorad, Richmond, CA, USA)gydF4y2Ba19gydF4y2Ba。制备了两种合成凝胶(图2)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba),一个用于对照组,包含所有斑点在8个对照凝胶(67个斑点)中≥7个存在,另一个用于CF,包含这些蛋白质斑点在17个CF凝胶(76个斑点)中≥15个存在。然后,将这两种合成凝胶与另一组的所有天然银染色凝胶进行匹配。CF组有19个独特的蛋白点,其中14个位于LMW≤20kd(图2)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。相比之下,8个对照凝胶中有7个以上存在14个高分子量的蛋白点,而CF凝胶中没有(图2)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
由Melanie 2.1软件创建的两种合成2d凝胶只包含每组的特征蛋白点:a)囊性纤维化(CF)和b)对照组。扫描后,用软件分析每个支气管肺泡灌洗液(BALF)的银染凝胶,将8个对照凝胶中≥7个存在的斑点复制到对照合成凝胶中,将17个CF凝胶中≥15个存在的斑点复制到CF合成凝胶中。两种合成凝胶中的每一种都与另一组的所有银色染色凝胶相匹配,以发现一组具有特征而另一组不存在的蛋白质斑点。独特的特征性蛋白斑点,另一组凝胶中没有相应的蛋白斑点,用箭头表示。1:表面活性剂蛋白A;2:白蛋白;3:免疫球蛋白A α链;4:免疫球蛋白G重链;5:免疫球蛋白G轻链κ,λ;6:αgydF4y2Ba1gydF4y2Ba-π。gydF4y2Ba
表面活性剂蛋白A的分析gydF4y2Ba
虽然在CF和对照组之间,BALF中SP-A的量没有显著变化,但SP-A的质变明显。在pH 4-5.5的固定化pH梯度(IPG)条带上,用2D-PAGE在还原条件下分离了40000 g BALF颗粒中富集的SP-A。这些凝胶的银染色显示,CF组(n=3)和对照组(n=2)均有16-18个单蛋白点的特征链,分子量为31-35 kD,等电点为4.2-4.9(图3)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。在CF中发现了分子量为~ 14-24 kD、pH为4.5-5.1的额外蛋白点。平行运行的相同BALF样品的2D-PAGE凝胶进行Western blotting,结果表明,这些低分子量蛋白点与SP-A的多克隆抗体具有免疫反应性,高分子量蛋白点也是如此。在IPG pH 3 - 10上对所有天然BALF上清进行系统的Western blot分析表明,17例CF患者中有15例存在不同数量的LMW降解产物,但8例对照组中没有(表3)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba,图4gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。相比之下,SP-A的聚合形式在所有对照中都被观察到,但在17例CF患者中只有4例被观察到。这些SP-A聚合物的分子量从~ 60 kD到100 ~ 100 kD不等,即使添加越来越多的还原剂也不能被还原(数据未显示)。SP-A降解产物的体积%与BALF细胞总数相关(r=0.5;p=0.045),但对NE活性或中性粒细胞计数无显著影响。BALF细菌培养阳性的CF患者(n=10)对SP-A的降解高于未发现细菌学结果的CF患者,但差异无统计学意义(16.2±4.3)gydF4y2Ba与gydF4y2Ba总SP-A的7.4±2.3 Vol%;p = 0.13)。gydF4y2Ba
a)分子量标准;b)健康儿童表面活性剂蛋白A (SP-A);c)囊性纤维化(CF)患者的SP-A。40000 ×后SP-A与支气管肺泡灌洗液(BALF)颗粒相关gydF4y2BaggydF4y2Ba在还原条件下,用高分辨率二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE)(线性固定pH梯度pH 4-5.5)分离离心,银染色检测。SP-A的存在通过Western blotting与人SP-A的多克隆抗体在相同的凝胶平行运行中得到证实。gydF4y2Ba
经(2D-PAGE)分离的支气管肺泡灌洗液(BALF)表面活性剂蛋白A (SP-A)的免疫化学染色模式,固定化pH梯度pH 3-10线性。用人SP-A多克隆抗体对硝基纤维素印迹进行探针检测,化学发光法检测。a)一维分离分离人SP-A作为标准;b)两个代表性对照对象的BALF蛋白的二维分离SP-A;c) 4例代表性CF患者的二维分离SP-A在BALF中表现出不同的人白细胞弹性酶(HLE)活性;I:患者0.9 U·mLgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba及活动;II:患者3.5 U·mLgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba及活动;III:患者3.9 U·mLgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba及活动;静脉:患者18.6 U·mLgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba及活动;a: SP-A的二聚形式,MW ~66 ~ 100kd;b: SP-A单体形态~30 - 36kd, pI 4.2-4.9;c: SP-A的降解产物MW ~14 ~ 24kd。gydF4y2Ba
表面活性剂蛋白A (SP-A)的高分辨率二维聚丙烯酰胺凝胶电泳分析gydF4y2Ba
讨论gydF4y2Ba
本研究表明,与健康对照者相比,具有临床稳定疾病的CF青少年的总体BALF蛋白模式和SP-A质的改变存在显著差异。除了总蛋白含量升高外,CF患者的BALF蛋白模式与对照组有显著差异,后者显示出众所周知的与人血清蛋白质组的一致性gydF4y2Ba4gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba7gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
CF BAL和痰中多种蛋白酶升高,可能在肺部疾病的进展中起作用。其中NE是最丰富的活性中性粒细胞蛋白酶之一。因此,在本研究中,这些发现与作为中性粒细胞衍生蛋白水解酶的共同代表的BALF中NE的活性相关。gydF4y2Ba
为了更好地描述BALF中蛋白质组的改变,根据低(≤20kd)和高(> 20kd)分子量任意创建了两组不同的蛋白质。LMW(≤20kd)蛋白在CF BALF中的优势可能至少部分是由于降解结构、防御、细菌或炎症蛋白的积累。这与作者先前报告的数据一致,其中8周吸入αgydF4y2Ba1gydF4y2BaCF患者的-PI导致这些≤20kd的LMW蛋白的数量和体积%显著减少gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba。在CF中发现了不同的蛋白质,这些蛋白质在对照组和对照组中不存在gydF4y2Ba反之亦然gydF4y2Ba。这些蛋白需要在未来的研究中确定,因为它们可以量化CF肺病中参与炎症和蛋白水解过程的各种成分的相对丰度。本研究的主要目的是建立CF的整体蛋白质模式,并定位潜在的靶点进行测序和蛋白质鉴定。gydF4y2Ba
与先前的αgydF4y2Ba1gydF4y2Ba- CF痰中α的体积百分比gydF4y2Ba1gydF4y2BaCF - BALF组总蛋白pi明显高于对照组gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba21gydF4y2Ba。等于α的体积百分比gydF4y2Ba1gydF4y2Ba-PI与BALF、α的NE活性密切相关gydF4y2Ba1gydF4y2Ba-PI必须通过蛋白水解或氧化而失活gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba21gydF4y2Ba。后者明显占主导地位,因为没有α的降解产物gydF4y2Ba1gydF4y2BaWestern blot分析发现-PI(数据未显示)。gydF4y2Ba
除了CF BALF蛋白模式的改变外,SP-A也发生了质的变化。在大多数CF患者的balf中,SP-A被降解为LMW产物。在CF - BALF中不存在更高的分子形式,但在所有对照中都存在。使用高分辨率2D-PAGE详细描述对照和CF患者BALF的人SP-A异构体。SP-A同分异构体主链的分子量和pI在CF中没有改变,也与文献报道一致gydF4y2Ba22gydF4y2Ba,gydF4y2Ba23gydF4y2Ba。贝克gydF4y2Ba等gydF4y2Ba。gydF4y2Ba24gydF4y2Ba和柯南道尔gydF4y2Ba等gydF4y2Ba。gydF4y2Ba25gydF4y2Ba先前描述了急性呼吸窘迫综合征患者BALF中SP-A的定性损害gydF4y2Ba25gydF4y2Ba肺泡蛋白沉积症gydF4y2Ba25gydF4y2Ba与对照组相比。两者都发现SP-A的聚合形式和异构体形式之间的分布发生了变化,但没有SP-A的LMW产物(MW <24 kD)。经Western blotting证实,这些分子量为~ 14-24 kD的SP-A蛋白水解片段存在于大多数CF患者中,但没有出现在对照组中。由于SP-A降解产物的体积百分比与BALF中细胞总数相关,SP-A很可能被细胞相关的蛋白水解酶如NE或其他蛋白酶如Cathepsin G或B和胶原酶破坏。gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba研究表明,大鼠和狗的SP-A可以被NE切割gydF4y2Ba13gydF4y2Ba,gydF4y2Ba14gydF4y2Ba和胶原酶gydF4y2Ba26gydF4y2Ba产生21 kD (NE)或20-23 kD的蛋白水解片段,pI为4.2-4.8(胶原酶)。在这些研究中,表面活性剂在表面吸附中的生物物理功能在暴露于上述蛋白酶后受到损害。因此,CF中表面活性剂的生物物理功能受损可能部分与SP-A蛋白水解受损有关。SP-A受损可能会导致宿主防御特性的丧失,但必须在未来的研究中加以证明。gydF4y2Ba
SP-A的高分子组装(> 60kd)在对照组的所有balf中都发现,但在CF中几乎没有。这些形式的SP-A可能是二聚体和低聚物gydF4y2Ba25gydF4y2Ba但目前尚不清楚它们是如何产生的,以及它们的确切功能角色是什么。以前曾报道CF合并严重肺部疾病患者BALF中SP-A的定量降低gydF4y2Ba13gydF4y2Ba,gydF4y2Ba14gydF4y2Ba而在无症状CF婴儿中,SP-A没有改变,感染后SP-A上调gydF4y2Ba27gydF4y2Ba。SP-A的减少与晚期疾病可能是由于SP-A的合成减少或过度的蛋白水解降解。在后一种情况下,生成的片段必须足够小,不能在酶联免疫吸附试验(ELISA)中被特异性抗体检测到。在本研究中观察到的14 - 24kd蛋白水解片段在ELISA测试中仍然具有反应性,使用的抗体与Western blot相同。因此,ELISA会高估完整SP-A的总量。gydF4y2Ba
有趣的是,在CF BALF中没有发现细菌或真菌的情况下,观察到LMW蛋白、SP-A片段和NE活性升高。这表明在CF肺中,炎症和随后的肺蛋白损伤可以独立于细菌发现而发生。gydF4y2Ba
由此得出结论,表面活性剂蛋白- a的蛋白水解损伤和其他支气管肺泡灌洗液蛋白的改变可能是由中性粒细胞主导的炎症引起的,并可能导致囊性纤维化患者从肺部清除特定病原体的能力降低。在对各种临床条件下表达的蛋白进行鉴定和表征后,可以通过蛋白质组显示的变化来监测旨在减少炎症和空气中蛋白水解活性的治疗干预。gydF4y2Ba
- 收到了gydF4y2Ba2000年8月30日。gydF4y2Ba
- 接受gydF4y2Ba2000年12月8日。gydF4y2Ba
- ©ERS期刊有限公司gydF4y2Ba
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