摘要GydF4y2Ba
由于尚不清楚的原因,随着阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAS),若干心血管疾病的患病率增加了患者。血管紧张素转换酶(ACE)异常涉及各种心血管疾病的发病机制。在该研究中,在OSAS患者和健康对照中测定血浆ACE活性和ACE基因的插入(I)/缺失(D)多态性的分布。GydF4y2Ba
共有63例OSAS患者(平均值±sem 54.5±2.5)呼吸暂停/低通气·hGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba)研究对象为32名健康受试者。为避免潜在的混杂因素,排除使用ACE抑制剂或持续气道正压治疗的患者,以及未在清晨采集血样的对照组。分光光度法测定46例OSAS患者和25例对照组的ACE活性。采用聚合酶链反应检测44例患者和32例对照组的I/D ACE多态性。GydF4y2Ba
OSAS患者的ACE活性较高(53.9±2.5 IU·L.GydF4y2Ba-1GydF4y2Ba)而不是健康的对照(42.4±3.1 IU·L.GydF4y2Ba-1GydF4y2Bap<0.01)。这与动脉高血压的存在无关。OSAS患者DD、II和ID基因型的频率分布(分别为30%、16%、54%)与健康受试者的频率分布(分别为31%、28%、41%,p=0.356)无显著差异。GydF4y2Ba
这些结果表明,在未处理的OSAS患者中,ACE血浆活性增加。这种增加的活性可能有助于这些患者心血管疾病的发病机制。GydF4y2Ba
这项工作部分得到了ABEMAR、FUCAP 1995、卫生调查基金会(FIS 96/1718)、加泰罗尼亚和巴勒阿雷斯科学院(1995)和Carcoos Metálicos的支持GydF4y2Ba
患有阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAS)的患者中增加了几种心血管疾病,包括动脉高血压,急性心肌梗死和中风的患病率GydF4y2Ba1.GydF4y2Ba–GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba.然而,这种关联的机制尚不清楚GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba,GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba.GydF4y2Ba
血管紧张素转换酶(ACE)是一种锌金属肽酶,其主要功能是将血管紧张素I转化为血管紧张素II(一种血管活性肽)并使缓激肽失活GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba.由于其对血管间调的影响和动脉粥样硬化斑块的形成,ACE生产的改变涉及各种心血管疾病的发病机制GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba,GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba。OSAS患者的ACE代谢潜在异常以前没有报道过。因此,本研究试图比较患有和不患有动脉高血压的OSAS患者以及健康受试者的血浆ACE活性。同样,因为一些心血管疾病与插入物的存在有关ACE基因n(I)/缺失(D)多态性GydF4y2Ba8.GydF4y2Ba–GydF4y2Ba12.GydF4y2Ba,也确定了这种特定基因型在这些个体中的患病率。GydF4y2Ba
方法GydF4y2Ba
学科与伦理GydF4y2Ba
OSAS患者从医院大学杜塔的睡眠单位招募。男性受试者,65岁的年龄小,日期嗜睡和每小时睡眠每小时的呼吸症(AHIEA-HIPOPNEA指数(AHI))> 20时患者。AHI评分由全多种性摄影(Ultrasom Nicolett,Wisconsin,USA)建立,包括记录Oronasal Flow(热电偶),胸腹部运动(应变仪),心电图,次粒电谱,电依云图,脑电图(CGydF4y2Ba4.GydF4y2Ba-一种GydF4y2Ba1.GydF4y2Ba, CGydF4y2Ba3.GydF4y2Ba-一种GydF4y2Ba2.GydF4y2Ba)经皮GydF4y2BasGydF4y2BaA,O.GydF4y2Ba2.GydF4y2Ba(美国Criticare系统公司)。排除患有结节病或任何其他慢性疾病(如慢性阻塞性肺疾病(COPD)、糖尿病、肝硬化、甲状腺功能不全、类风湿性关节炎、慢性肾功能衰竭和/或精神疾病)的研究患者。OSAS患者根据是否存在动脉高血压进行分组。动脉高血压被定义为需要抗高血压治疗或有收缩压(SBP)≥140 毫米汞柱或舒张压(DBP)>90 毫米汞柱。GydF4y2Ba
作为对照组,健康、不吸烟、不肥胖的志愿者的性别和年龄匹配(±5岁)。没有人有心血管疾病或糖尿病的个人或家族病史,也没有人接受任何类型的药物治疗。在这些个体中,阻塞性睡眠呼吸暂停综合征在临床上被Kapuniai标准排除GydF4y2Ba等GydF4y2Ba.GydF4y2Ba13.GydF4y2Ba。没有人报告习惯性打鼾或白天过度嗜睡。所有参与者在充分了解研究性质后签署了知情同意书。这项调查得到了Son Dureta大学医院伦理委员会的批准。GydF4y2Ba
测量GydF4y2Ba
通过使用输卵管前静脉进行静脉穿刺获得血样,并将血样收集在不含抗凝剂(用于ACE活性)和乙二胺四乙酸(EDTA)(用于脱氧核糖核酸(DNA)分析)的试管中。GydF4y2Ba
血浆血管紧张素转化酶活性GydF4y2Ba
取样后,立即被离心(Jouan,Cr422,Saint-Herbleain,法国),在1,750×GydF4y2BaGGydF4y2Ba15分钟后,血清保存在-80°C,直到检测。根据制造商的指示,使用商业分光光度ACE分析系统(SIGMA Diagnostics®,St Louis, USA)测定ACE活性。本方法是将合成的三肽底物N-[3-(2-呋喃基)丙烯酰基]-l-苯丙基甘氨酸(FA-PGG)水解为呋喃丙烯酰基苯丙氨酸(FAP)和甘氨酸。通过将样品反应速率与ACE参比反应速率进行比较,确定ACE活性。GydF4y2Ba
基因组DNA的提取和扩增GydF4y2Ba
按照标准方案从白细胞中提取DNAGydF4y2Ba14.GydF4y2Ba.将样品保存在-80℃直至分析。使用ACE基因的Intron16(DNA片段)的聚合酶链反应(PCR)鉴定I和D等位基因。PCR条件是由Rigat发布的条件GydF4y2Ba等GydF4y2Ba.GydF4y2Ba15.GydF4y2Ba:10 pmol每个引物,感测oligo 5'ctggagaccactcccatc cttttct 3',并在最终体积为50μl的终体体积中,含有3 mm mgcl的含量为5.毫升GydF4y2Ba2.GydF4y2Ba,50mM KCl,10mM Tris-HCl pH 8.4,5%二甲基硫氧化物(DMSO),每种脱氧核糖核苷的0.5mm,三磷酸(DNTP)和1单位的Taq聚合酶(Pharmacia。乌普萨拉,瑞典)。将DNA扩增30个循环,在94℃下变性1分钟,在58℃下退火1分钟,并使用PCR术语(Umnigen,Hybaid,UK)在72℃下延伸2分钟。通过电泳通过电泳在2%琼脂糖凝胶上分离PCR产物,并通过溴化乙锭染色鉴定。PCR产物是在不存在插入的情况下的190个碱基对(BP)片段,并且在插入存在下的490bp片段(图1GydF4y2Ba⇓GydF4y2Ba)。GydF4y2Ba
![图。1。-GydF4y2Ba](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/17/4/728/F1.medium.gif)
代表性琼脂糖凝胶显示聚合酶链反应(PCR)对应于不同血管紧张素转化酶(ACE)基因型(DD:190 BP,DI:190/490 BP,II:490 BP)的不同血管紧张素转换酶(DNA)的脱氧核糖核酸(DNA)的扩增片段。M:DNA分子量标记。GydF4y2Ba
统计分析GydF4y2Ba
在笔者的实验室中,健康受试者ACE活性的平均值±sd值为40±10 IU·LGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba.考虑到这个值,并接受一个α错误0.05,β错误0.1,10%缺失的数据,需要考虑潜在的混杂因素如动脉高血压的存在,它是计算出45群患者和25控制需要。结果显示为平均值±扫描电镜。由于数据为正态分布(Kolgomorov-Smirnov检验),因此采用参数统计(ANOVA, t检验)来评估连续变量的差异显著性。基因型分布比较采用卡方检验。用spearman秩检验探讨兴趣变量之间的相关性。p值<0.05被认为有统计学意义。GydF4y2Ba
结果GydF4y2Ba
研究人群GydF4y2Ba
共研究了63名OSAS患者和32名健康对照者。桌子 1.GydF4y2Ba⇓GydF4y2Ba显示出他们的主要临床特征。OSAS患者肥胖较高,血压高于对照受试者。所有患者均具有严重的OSA,平均AHI为54.5±2.5小时GydF4y2Ba−1.GydF4y2Ba以及频繁和严重的动脉去饱和(平均夜间GydF4y2BasGydF4y2BaA,O.GydF4y2Ba2.GydF4y2Ba,92.5±0.6%;意思是最低的GydF4y2BasGydF4y2BaA,O.GydF4y2Ba2.GydF4y2Ba睡眠时63.8±3.0%)。30名患者吸烟,23名患者患有全身性高血压,2名患者过去患有急性心肌梗死。GydF4y2Ba
阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAS)患者和健康受试者的平均±sem年龄、体重指数(BMI)、收缩压(SBP)和舒张压(DBP)GydF4y2Ba
ACE活性和基因型分布并未在所有个体中进行调查。前者是在46名OSAS患者和25名对照组中确定的。在本分析中,排除了3名接受ACE抑制剂治疗的患者,以及14名接受持续气道正压(CPAP)治疗的患者和7名对照受试者(因为他们的血样是在晚上采集的,以避免对ACE活性的潜在昼夜节律影响)。使用除ACE抑制剂(n=3)、组胺H以外的抗高血压药物治疗的患者GydF4y2Ba2.GydF4y2Ba不排除拮抗剂(n=2)和茶碱(n=1)。另一方面,在44例患者(19例由于技术原因未进行分析)和32例对照组中确定了ACE多态性的分布。GydF4y2Ba
血管紧张素转换酶活性GydF4y2Ba
图2GydF4y2Ba⇓GydF4y2Ba显示了健康对照组和OSAS患者(根据是否存在动脉高血压分组)血清中ACE活性的值。尽管存在大量分散,但健康受试者的ACE活性较低(42.4±3.1 IU·L)GydF4y2Ba-1GydF4y2Ba)而不是在OSA的患者中(53.9±2.5 IU·L.GydF4y2Ba-1GydF4y2Ba,P <0.01),无论存在(54.3±3.6 IU·L.GydF4y2Ba-1GydF4y2Ba或缺失(53.5±3.4 IU·L)GydF4y2Ba-1GydF4y2Ba动脉性高血压(p<0.05)。同样,OSAS患者的ACE活性不受是否主动吸烟的影响(54.1±3.1 IU·L)GydF4y2Ba-1GydF4y2Ba(n=30)GydF4y2Ba相对GydF4y2Ba53.5±4.3 IU·LGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba(n=16),p=0.92)。在OSAS患者中,ACE活性与几个相关的临床或生物学变量之间没有显著相关性(年龄,r= -0.008,p=0.96;体重指数(BMI),r=0.141,p=0.36;AHI,r= -0.021,p=0.89;SBP r= -0.099,p=0.52;DBP,r= -0.088,p=0.56)。GydF4y2Ba
![图2.-GydF4y2Ba](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/17/4/728/F2.medium.gif)
血管紧张素转化酶(ACE)活性的个体和平均值(杆)对照组和阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAS)患者的患者,根据动脉高血压的存在或不存在进行分组。***:P <0.001GydF4y2Ba相对GydF4y2Ba控制主题;高血压和非高压性患者之间没有统计学意义。GydF4y2Ba
基因型分布和等位基因频率GydF4y2Ba
表2.GydF4y2Ba⇓GydF4y2Ba显示了在OSAS患者(n=44)和健康受试者(n=32)中DD、II和ID基因型的频率分布。两组之间未发现显著差异(p=0.356)。桌子 2.GydF4y2Ba⇓GydF4y2Ba还呈现这些个体中的等位基因分布(I / D),在OSAS患者和对照受试者之间没有显着差异(P = 0.293)。GydF4y2Ba
阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAS)患者和健康受试者的基因型和等位基因频率分布GydF4y2Ba
讨论GydF4y2Ba
为了提交人的知识,这是第一次研究奥斯塔斯患者患者的研究。结果表明:1)与健康受试者相比,OSA的ACE活性显着增加(图2GydF4y2Ba⇑GydF4y2Ba); 2) 这些差异与动脉高血压的存在无关(图。 2.GydF4y2Ba⇑GydF4y2Ba)及;3) OSAS患者的ACE基因型分布似乎与健康受试者的ACE基因型分布并无差异(表1) 2.GydF4y2Ba⇑GydF4y2Ba)。GydF4y2Ba
未经治疗的OSAS患者的心血管疾病患病率高于普通人群GydF4y2Ba1.GydF4y2Ba,GydF4y2Ba2.GydF4y2Ba,GydF4y2Ba16.GydF4y2Ba–GydF4y2Ba18.GydF4y2Ba.这种关联背后的机制尚不清楚GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba,GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba,GydF4y2Ba19.GydF4y2Ba–GydF4y2Ba23.GydF4y2Ba.血管紧张素转换酶产生的干扰与各种心血管疾病的发病机制有关GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba,GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba.在这项研究中,假设ACE扰动也可能发生在OSAS患者中。结果支持这一假设,因为奥斯患者的ACE活性高于健康受试者(图2GydF4y2Ba⇑GydF4y2Ba)此外,分析排除了动脉高血压作为潜在的混杂因素,因为OSAS患者和健康受试者之间的差异仍然存在,无论其是否存在(图。 2.GydF4y2Ba⇑GydF4y2Ba)。几种潜在机制可能有助于解释这些观察结果。首先,不同的基因型分布可能导致不同的ACE活动水平GydF4y2Ba24.GydF4y2Ba.目前的结果似乎排除了这种可能性,因为在osa患者和健康受试者之间没有发现不同的分布或等位基因频率(表2)GydF4y2Ba⇑GydF4y2Ba)。然而,应该承认为此目的研究的样本的大小可能受到限制。因此,将需要进一步研究来确认或反驳这种可能性。其次,正如预期的那样GydF4y2Ba25.GydF4y2Ba,患者比健康受试者更肥胖(表1) 1.GydF4y2Ba⇑GydF4y2Ba)这不太可能解释目前的发现,因为肥胖本身似乎并不影响ACE活动GydF4y2Ba26.GydF4y2Ba,GydF4y2Ba27.GydF4y2Ba最后,可以想象,无论特定个体中存在ACE基因的特定多态性如何,OSAS患者每次呼吸暂停发作期间发生的缺氧/复氧发作都可以刺激血管紧张素转换酶的合成内皮细胞GydF4y2Ba28.GydF4y2Ba,GydF4y2Ba29.GydF4y2Ba.如果是这样,较高的ACE活性将有可能危及内皮功能和血管结构GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba并有助于OSAS患者报告的心血管疾病患病率增加GydF4y2Ba2.GydF4y2Ba,GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba.而在OSAS患者中,AHI与ACE活性无明显相关性。这可能是由于本文研究的患者(所有患者均患有严重的阻塞性睡眠呼吸暂停综合症)疾病严重程度范围较窄所致。因此,为了证实或驳斥这一潜在的机制,还需要进一步的研究来确定病情较轻患者的ACE活性,以及探讨CPAP治疗对osaas患者ACE活性的影响。GydF4y2Ba
总之,该研究表明,未经处理的阻塞性睡眠呼吸暂停综合征患者血管紧张素转化酶的血浆活性增加。这可能在这些患者中经常发生的心血管疾病的发病机制中发挥作用。GydF4y2Ba
致谢GydF4y2Ba
作者衷心感谢自愿参与本研究的患者以及Xavier Buskets博士(UNI)的有益评论和建议。GydF4y2Ba
- 已收到GydF4y2Ba2000年6月6日。GydF4y2Ba
- 认可的GydF4y2Ba2000年12月22日。GydF4y2Ba
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