摘要
肺炎仍然是人类免疫缺陷病毒(HIV)感染患者的一个主要问题,尽管进行了广泛的调查,但在许多病例中病因仍然未知。通过聚合酶链反应在来自72名HIV感染患者的91份支气管肺泡灌洗液(BAL)样本中测定了8种人类疱疹病毒的流行率,其中91例疑似肺炎。疱疹病毒的存在与临床和免疫学结果有关,并且将HIV感染患者中疱疹病毒的流行率与50名健康、免疫能力强的个体的BAL液中的流行率进行比较。
Epstein-Barr病毒,巨细胞病毒和人疱疹病毒-8(HHV8)占HIV感染患者的5.5%,36%和5.5%的Bal流体样本。没有疱疹病毒在来自健康的免疫活性个体的Bal流体中可检测到。疱疹病毒主要发生在CD4 +数量<200×10的患者中6. L-1.所有感染疱疹病毒的患者在没有进行特殊抗病毒治疗的情况下痊愈。两名HHV8患者被诊断为卡波西肉瘤。
结论是,巨细胞病毒,Epstemgalovirus和人疱疹病毒-8经常以严重免疫的肺症状的严重免疫接种的人免疫缺陷病毒感染患者在支气管肺泡灌洗液中频繁存在。在受健康,免疫活性腺的支气管肺泡灌洗液中,疱疹病毒不存在。除了人疱疹病毒-8,目前的结果表明,疱疹病毒在人类免疫缺陷病毒感染患者的肺症状发育中不会发挥严重致病作用。
这项工作得到了丹麦肺协会、AIDS和奥胡斯大学研究基金会的资助。
肺部感染仍然是人类免疫缺陷病毒1 (HIV)感染晚期发病和死亡的主要原因之一。尽管肺部感染的有力证据和使用了非常广泛的微生物方案,但从艾滋病毒感染/获得性免疫缺陷综合征(艾滋病)患者的大量支气管肺泡灌洗(BAL)液样本中未检出病原体1.这可能是由于感染了没有常规调查的病原体,例如巨细胞病毒(CMV)以外的疱疹病毒。
在有肺部症状的HIV感染患者的BAL液样本中,已检测到高达72%的CMV2,但它作为主要肺病原体的作用受到质疑3.-5..1994年张等.6.在Kaposi的Sarcoma(KS)的元素中证明了人疱疹病毒-8(HHV8),并于1995年由HHV8与肺部KS协会的第一报告等.7..关于其余六种人类疱疹病毒、单纯疱疹病毒1型和2型(HSV-1和HSV-2)、eb病毒(EBV)、水痘带状疱疹病毒(VZV)和人类疱疹病毒6型和7型(HHV6和HHV7)的流行率和意义的研究数量非常有限。
本研究的目的是使用聚合酶链式反应(PCR):1)以确定来自艾滋病毒感染患者的患者患有令人患肺炎的八种人疱疹病毒的患病率;2)将Herpesvirus脱氧核糖核酸(DNA)的存在涉及临床和免疫发现;3)比较HIV感染患者BAL流体中HERPESVIRUS DNA的患病率与肺炎患者健康,免疫活性患者的患病率。
材料和方法
人类免疫缺陷病毒感染患者的样本
来自艾滋病毒阳性患者的BAL流体样本在1992年1月至1998年1月至1998年1月至1998年1月在1998年至8月,在传染病,Aarhus大学医院,丹麦,丹麦连续地纳入了患有疑似肺炎。在研究支气管镜检查Bal液体后立即进行细菌和细菌Pneumocystis carinii.将残留的BAL液存档并回顾性用于疱疹病毒PCR。
由于胸部射线照片上的肺渗透和/或咳嗽和/或休息降低的动脉氧气张力,怀疑肺炎(P.啊,一个2⪕10 (千帕)。从72名患者中获得91次肺炎发作的91份BAL液样本。58名患者接受了一次BAL,9名患者接受了两次BAL,5名患者接受了三次BAL。两次以上肺炎发作间隔至少4.5个月。患者的中位年龄为36岁 年(范围23-71)。CD4+计数中位数为45×106. L-1(范围0-1,194×106. L-1).72例患者中有13例在支气管镜检查后6个月内死亡。其他患者特征见表1⇓.
来自免疫活性个体的样本
本文研究了1991年1月至1997年12月在丹麦奥胡斯奥胡斯大学医院呼吸科的另一个项目中,50名健康、免疫活性个体接受连续纤维支气管镜检查的BAL液。
每个人只进行一次支气管镜检查。46名(92%)为男性,4名(8%)为女性。这些人的平均年龄为31岁 年(范围19-65)。
支气管肺泡灌洗
在这两个研究群体中,BAL均按照标准技术进行,方法是滴注三份60%的等分液 mL 0.9%氯化钠,预热至37°C,注入肺部放射异常区域。在健康的、免疫活性的患者和HIV感染的弥漫性或不浸润的患者中,在中叶和/或舌上进行灌洗。未获得经支气管活检。BAL液立即储存在实验室−80°C,直到分析。
样品制备和聚合酶链式反应扩增人疱疹病毒
根据制造商根据制造商提取300μLBAL流体,用于纯乙烯®DNA隔离套件(GENTRA SYSTEM INC.,MINNEAPOLIS,MN,USA)的描述。每第三个样品后提取水。通过PCR用于基因甘油醛-3-磷酸 - 脱氢酶(GAPDH)的PCR确认提取的DNA的完整性8..为了控制PCR阴性样品的非特异性抑制,将PCR阴性样品的1µL与PCR阳性样品的1µL混合,进行重复PCR。
如前所述,对八种疱疹病毒HSV-1和-2、VZV、EBV、CMV、HHV6、HHV7和HHV8中的每一种进行PCR9..
A 10 在含有0.5%的2%琼脂糖凝胶中,通过电泳分析微升等分的PCR产物 微克·毫升-1溴化乙锭并在紫外(UV)光下可视化。重复阳性对照的次优敏感性的测定。通过所有PCR阳性样品,对原始BAL流体的另一种等分试样进行DNA重新提取,以排除交叉污染。如果PCR运行中的连续样品是阳性的,则在单独的测定中重复它们。DNA提取,在三个单独的实验室中进行PCR反应和扩增的混合。PCR测定的检测限<10个基因组拷贝。
其他微生物检查
BAL液中细菌培养在丹麦奥胡斯奥胡斯大学医学院临床微生物学系进行。分枝杆菌的培养是在丹麦哥本哈根的Statens血清研究所进行的。P. Carinii使用免疫荧光法或GOMIO-甲胺胺银染法在寄生虫学实验室和丹麦奥胡斯奥胡斯大学医院病理科进行检测。
未检查来自健康、免疫活性个体的BAL液中的细菌或细菌P. Carinii.
统计分析
每个集发作都被测试好像它代表了一个新患者。通过差异比率和Chi平方测试评估单变量分析。显着性水平为5%。
伦理
该研究得到了当地伦理委员会的批准。
结果
人类疱疹病毒1-8型的检测
通过PCR,在来自艾滋病毒感染患者的40(44%)的BAL流体样品中检测到疱疹病毒;eBV在5(5.5%),CMV中33(36%),HHV8为5(5.5%)。没有检测到HSV-1和-2,VZV,HHV6和HHV7。在44个样品中获得最终的微生物诊断。在其中24中,与其他微生物同时检测到疱疹病毒(表2⇓),其中16种疱疹病毒是唯一被检测到的微生物,31种(34%)没有发现微生物。
在CD4+计数<200×10的患者中,三种疱疹病毒EBV、CMV和HHV8的发生率较高6. L-1(72例患者中39例对4/19的患者(p < 0.043)。在>5年、BAL 6个月内死亡、存在艾滋病诊断标准或在支气管镜检查时接受抗逆转录病毒治疗之间,可证实的疱疹病毒和已知的hiv感染之间没有关联。8例患者在支气管镜检查时给予阿昔洛韦治疗。其中7例CD4+计数<200×106. L-1,但只有一名患者检测到疱疹病毒。BAL液中的疱疹病毒(es)患者均无口腔炎迹象。八种人类疱疹病毒均未在健康、具有免疫能力的个体的BAL液中检测到。
从hiv感染患者或健康、免疫能力强的人的BAL液体样本中,没有一个显示出PCR抑制。
讨论
发现了三种HerpesvirusesEBV,CMV和HHV8的PCR普遍普遍,从艾滋病毒感染患者患有疑似肺炎的44%的Bal流体样品中发生,而没有疱疹病毒在来自健康的免疫活性个体的Bal流体中可以检测到任何疱疹病毒.
在CD4+计数较低的患者中存在疱疹病毒与其他研究一致,其中CMV和HHV8在严重免疫功能低下的患者中出现的频率更高,而HHV6和HHV7等疱疹病毒主要见于CD4+计数较高的患者或未感染HIV的个人10那11.
在艾滋病毒感染的患者中,CMV感染/再激活主要表现为视网膜炎和/或胃肠疾病(胃肠炎,结肠炎,胃炎和肝炎),据报道> 90%的艾滋病患者在他们的过程中会产生CMV感染疾病12. 33例(36%)BAL液标本中发现CMV。这种高发病率与先前的研究一致,在先前的研究中,高达72%的肺症状HIV感染患者的BAL液样本中检测到CMV2.从大多数研究得出的结论是,巨细胞病毒不是肺炎发病的主要病原体13那14.因此,与具有致病性诱导的免疫抑制(移植后)的患者相比,CMV肺炎在艾滋病毒感染患者中罕见15. 然而,在一些研究中,CMV被报道为HIV感染患者的主要肺部病原体3.那5..汉森等.4.已经表明,在艾滋病毒感染患者肺症状中通过PCR或培养检测CMV,可以鉴定高风险的患者,以便于CMV病的发展。CMV不太可能是群组中呼吸系统症状的主要病原体,因为33例CMV恢复而没有特异性抗CMV处理。此外,在6个月内没有在CMV和死亡的存在之间发现相关性。
HHV8于1994年被确认,自那以后,几项研究表明HHV8是KS的病原体6.那7.那16. 在五名丹麦HIV感染患者的BAL液样本中发现HHV8。其中两个符合支气管镜检查时KS的临床标准。其余三名患者均为丹麦出生的白种人,在死亡前均未出现KS临床症状。然而,没有对胸部进行磁共振成像或计算机断层扫描。正如之前已经证明的那样,在KS发生之前,HHV8 DNA可在外周血单个核细胞中检测到17BAL液中的HHV8 DNA可能表明存在亚临床KS。
据报道,在包括儿童在内的具有免疫能力的个体中,由于EBV感染引起的呼吸道症状和慢性间质性肺病18,但有关EBV与艾滋病患者肺部疾病的研究相对较少。EBV似乎与艾滋病相关非霍奇金淋巴瘤(NHL)的发展有关19.秒针等.20.得出结论,EBV的原发性感染或再活化可能是艾滋病患者的发病率和死亡率的报价。在本研究中,EBV和CMV在两个BAL流体样品中发生在一起,并且它们是eBV,它们是这三种流体中唯一可观的微生物。这些患者没有放射线浸润,但它们发烧并减少了P.啊,一个2(⪕10 kPa)。这三名患者未经治疗就康复了。其余两名EBV患者经治疗后痊愈(肺炎支原体).
在接受预防性阿昔洛韦治疗的患者中,疱疹病毒的患病率较低。这一发现与Lucht的一项研究不符等.11.然而,在这两种研究中,接受Acyclovir的患者的数量对于明确的结论来说太小。
HSV-1和-2,VZV, HHV6和HHV7在hiv感染者和免疫能力强的个体中均未被证实。以前在免疫缺陷患者(40%为艾滋病患者)的BAL液和复杂呼吸道感染患者的BAL液中发现HSV-121那22.HSV-1在BAL液中的恢复作用尚不清楚,因为不可能区分活动性疾病和无症状的病毒脱落。HHV6和HHV7在hiv感染中的作用尚不清楚。尽管HHV6和HHV7主要见于CD4+计数高的患者,或未感染艾滋病毒的个人10那11在美国,有人认为同时感染HIV和HHV6可能有助于增强免疫抑制23.免疫活性腺中HHV6和HHV7的患病率较高,可以解释CD4 +细胞是这些病毒的主动病毒复制的主要部位24. 从一名患有继发性水痘肺炎的HIV-1感染成人患者的BAL液样本中仅报告过一次VZV25.
HSV-1,EBV,CMV,HHV6和HHV7中的唾液中的无症状,已知健康,免疫功能性的个体发生11那26但在本研究中,这些病毒在灌洗时获得的细胞相关液体未发现。
据作者所知,这是第一次调查BAL液对HIV感染患者以及健康、免疫能力强的个体中的所有八种人类疱疹病毒的研究。结论是,人类疱疹病毒CMV、EBV和HHV8经常存在于具有肺部症状的HIV感染患者的BAL液中,并且在严重免疫功能低下患者中出现的频率显著增加。在健康、有免疫力的个体的BAL液中,疱疹病毒不存在。
除人类疱疹病毒-8外,结果表明,疱疹病毒在人类免疫缺陷病毒感染患者肺部症状的发展中不起严重的致病作用。
致谢
作者感谢E. Madsen,研究实验室,传染病,Marselisborg医院,奥胡斯大学医院,为她提供了优秀的技术援助和对该项目的热情态度。
- 收到了2000年10月18日。
- 公认二○○一年二月十三日。
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