文摘
血管系统,强有力的血管舒张药的合成一氧化氮(NO)是由既定的严格监管的表达内皮没有合酶(以挪士)。以挪士是由Ca的活动2 +/钙调蛋白和各种seryl / threonyl蛋白激酶。是不为人熟知的酪氨酰残基磷酸化和去磷酸化的重要性。因此酪氨酸磷酸酶的作用分离大鼠肺动脉调制的语气已经评估。由原钒酸钠抑制酪氨酸磷酸酶(位,1×10−6米)明显:1)增加phenylephrine-induced血管收缩和2)减少endothelium-dependent放松乙酰胆碱,但没有影响endothelium-independent放松没有捐助,硝普酸钠。phenylephrine-precontracted肺动脉环,位(1×10−71×10−5M)没有影响血管张力显著但放松环用NO-synthase抑制剂预处理,Nω检测硝基l应承担arginine-methyl酯(l量名称)。SOV-induced放松的l高叫然而,废除了格列本脲。
总之,抑制酪氨酸磷酸酶改变肺血管张力增加血管收缩剂对去甲肾上腺素和乙酰胆碱减少endothelium-dependent放松。此外,酪氨酸磷酸酶抑制剂,原钒酸钠,表现出原始血管舒张药性质时只观察一氧化氮合成被抑制。因此一个新的通路包括一氧化氮的抑制作用在glibenclamide-sensitive扩散性的松弛因子,可能发挥重要作用的肺血管张力的控制。
肺血管张力是由多种调制endothelium-derived放松的因素包括环前列腺素、一氧化氮(NO)1,2,endothelium-derived超极化因子(EDHF)2,3。没有是一种最有效的已知血管舒张药日期。它的合成是由细胞内自由钙严格监管2 +和Ca2 +/钙调蛋白复杂,反过来刺激内皮的本构同种型没有合酶(以挪士)。另外,磷酸化seryl和threonyl残留物通过各种seryl / threonyl激酶也被认为调节以挪士活动4,5。
剪切应力的主要生理因素调节肺血管在健康和疾病。底层机制很可能涉及到从肺内皮细胞合成和释放的。最近的证据表明,内皮的产量没有增加响应通过酪氨酸磷酸化剪切应力通过在体循环calcium-independent通路4,6。或者矛盾的研究表明,酪氨酸的磷酸化以挪士也可能降低其活动7。是否变更酪氨酰残基磷酸化和去磷酸化的以挪士影响肺动脉的活动还有待调查。
在不同血管床,EDHF原因通过血管平滑肌超极化弛豫3。的身份EDHF仍在争论。早期的证据表明,三磷酸腺苷(ATP)端依赖钾(K三磷酸腺苷由EDHF)通道被激活8- - - - - -10进一步,而最近的证据表明,EDHF酶是细胞色素P量450的产品11,12导致放松通过激活大电导calcium-activated钾(KCa)通道11- - - - - -13。EDHF在肺血管的生理作用还不明朗,虽然有间接的证据表明EDHF过渡肺循环可能发挥重要作用14。
本研究的目的是为了进一步阐明酪氨酸磷酸化的作用没有肺循环和EDHF信号通路。作者有更多的专门研究原钒酸钠的影响(),酪氨酸磷酸酶抑制剂,这已经证明通过酪氨酸phosphorylation-dependent机制激活NOS在体循环4,15。发现位显著改变肺血管张力降低NO-mediated EDHF肺血管舒张和增加血管舒张药的影响。
材料和方法
男性Sprague-Dawley老鼠(250 - 275 g)麻醉与硫喷妥钠(80 mg·公斤腹腔内−1)。肺动脉(PA)立即解剖,放置在寒冷的克雷布斯解决方案:118年氯化钠,氯化钾5.9,MgSO41.2,CaCl22.5,不2PCO41.2、葡萄糖5.6 NaHCO325.5 (nM)。血管周围组织的动脉被清洗,切成环长2.5毫米。两个钢丝钩之间的环被停职。其中一个钩子是固定在一个孤立的器官支持含20毫升的柠檬酸溶液保持在37°C和加油95%的氧的混合物(O2(CO)和5%二氧化碳2)。每个血管段被设定为一个休息的张力最优长度发展从0.7 - -1.0 g。戒指被允许平衡60分钟。平衡后,进行了三项研究。
实验研究
与去甲肾上腺素收缩后(1×10−71×10−6米)获得稳定的张力,高原挑战了戒指增加乙酰胆碱的浓度(1×10−71×10−5米)。硝普酸钠,无供体(1×10−4M),添加结束时最大限度地放松肺血管平滑肌的实验。PA环分为两组,一组服用(1×10−6米)15分钟,而另一组服用溶剂(蒸馏水)和担任控制。位第一次增加了前15分钟收缩苯肾上腺素研究的影响位phenylephrine-induced收缩。
在另一组实验中,位添加苯肾上腺素收缩是高原后,孵化与位然后持续了15分钟前endothelium-dependent放松乙酰胆碱(1×10−71×10−5米)和endothelium-independent放松没有捐助,硝普酸钠(1×10−4米),进行评估。
在第三组实验,浓度增加的影响(1×10−71×10−5米)phenylephrine-precontracted肺血管环进行评估。五环被分为三组:1)治疗;2)处理Nω地理检测硝基l精氨酸甲酯(l量名称)应承担(1×10−3米);和3)治疗l名称(1×10−3米)和格列本脲(1×10−5米)。
药物
所有药物都购自σ(圣Quentin-Fallavier法国)。位、去氧肾上腺素、乙酰胆碱、硝普酸钠和l的名字,在蒸馏水溶解,而格列本脲是溶解在二甲亚砜,本身没有影响的语气孤立肺血管。
数据分析
收缩的大小由去甲肾上腺素在mg(平均±sem)表示,n是肺血管环的数量。放松和收缩被表示为减少或增加的百分比在高原的语气precontraction获得与去甲肾上腺素(1×10−6米)。每组的均值±sem实验数据被用来构造各种药理物质的量效曲线。使用非参数统计分析进行Wilcoxon符号秩检验比较结果在环和无内皮挑战各种抑制剂或受体激动剂及其控制。值被认为是统计学意义,p < 0.05。
结果
原钒酸钠增加phenylephrine-induced收缩
(1×10−6米),本身没有收缩影响基底语气但显著增加收缩的大小在所有PA环(n = 10)针对苯肾上腺素(1×10−7米)(614±78毫克与745±90毫克;p < 0.001)和1×10−6米(767±102毫克与960±123毫克;p < 0.0001)。
在没有内皮的PA戒指,位(1×10−6米),也显著影响收缩对去甲肾上腺素的反应,增加最大张力从851±168毫克到1010±193毫克(分别为控制和治疗环;p < 0.01)。
原钒酸钠减少endothelium-dependent放松乙酰胆碱
预约在PA戒指与去甲肾上腺素(1×10−6米)预处理与位(1×10−6米)显著降低endothelium-dependent放松乙酰胆碱(最大放松48±9%治疗PA戒指与在控制75±8%,p < 0.05)(图1所示⇓)。
![图1. -](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/19/3/525/F1.medium.gif)
影响原钒酸钠()acetylcholine-induced放松。累积量效曲线的乙酰胆碱是由环使用位和控制环。放松了的百分比precontraction与去甲肾上腺素(1×10−6米)。数据被表示为±sem。n = 8。•:控制;○:位(1×10−6米)。
Endothelium-dependent放松针对原钒酸钠
浓度增加(1×10−71×10−5米)没有明显放松与PA戒指订婚的影响苯肾上腺素(1×10−6米)(图2所示⇓)。然而,预处理与l量名称(1×10−3米)放松PA环引起的挑战(21±5%浓度的增加与为1×10 3±2%−7米,28±7%与为1×10 5±3%−6M和30±8%与为1×10 6±4%−5米,p < 0.05)。L必经NAME-induced endothelium-dependent放松位完全废除,格列本脲(1×10−5米)(图2所示⇓)。
影响原钒酸钠()肺动脉环与内皮的存在:└:Nω检测硝基l应承担的必经arginine-methyl酯(l必经的名字)(1×10−3M, n = 8);□:l的结合量名称(1×10−3米)和格列本脲(1×10−5M, n = 7);
:控制,n = 8。放松在回应(1×10−71×10−6和1×10−5米)从precontraction百分数表示到苯肾上腺素(1×10−6米)。数据被表示为n的均值±sem实验。*:p < 0.05;* *:p < 0.01。
在没有内皮的PA戒指,位(1×10−71×10−5米)同样未能产生任何放松的去甲肾上腺素与PA戒指订婚的影响(1×10−6米)。但是,与PA与内皮戒指,l必经的名字和格列本脲显著改变缺乏vasorelaxant影响位PA戒指没有内皮(图3所示⇓)。
影响原钒酸钠()肺动脉环没有内皮的存在:└:Nω检测硝基l应承担的必经arginine-methyl酯(l必经的名字)(1×10−3米);□:l的结合量名称(1×10−3米)和格列本脲(1×10−5米);
:控制。回应(1×10−71×10−6和1×10−5米)从precontraction百分数表示到苯肾上腺素(1×10−6米)。而血管舒张血管收缩是由积极的价值由负值表示。n = 4。数据被表示为n的均值±sem实验。
原钒酸钠对endothelium-independent放松硝普酸钠
预约在PA戒指与去甲肾上腺素(1×10−6米),(1×10−6米)没有影响endothelium-independent放松没有供体硝普酸钠。
讨论
它已经表明,抑制酪氨酸磷酸酶的位显著改变肺血管张力增加血管收缩剂苯肾上腺素和减少endothelium-dependent血管舒张药对乙酰胆碱的反应。随着增加血管收缩剂苯肾上腺素反应也出现在PA戒指没有内皮,位最好的procontractile效应解释为肺血管平滑肌的直接行动,而不是假定的释放endothelial-derived血管收缩剂。
先前报道在体循环,抑制酪氨酸磷酸酶的位显著增加血管收缩剂对去甲肾上腺素的反应16,17。这个观察是一致的这一事实的酪氨酰残基磷酸化酪氨酸激酶是涉及的机制导致血管平滑肌的收缩18- - - - - -22。发生血管收缩的肌球蛋白轻链的活化激酶(MLCK),反过来,磷酸化肌球蛋白轻链,从而形成actin-myosin十字桥导致血管平滑肌收缩23。强有力的酪氨酸激酶抑制剂,染料木素24氟化钠显著抑制收缩反应,一个直接的G蛋白激活剂,在大鼠主动脉16。位,酪氨酸磷酸酶的选择性抑制剂,通过维护的酪氨酸残基磷酸化25- - - - - -30.的活动,可能会增加G蛋白质从而有利于血管收缩。相比之下,染料木黄酮和对MLCK没有显著的影响17,蛋白激酶C16,24和蛋白激酶24活动。染料木素的抑制作用在calcium-free agonist-induced收缩仍然存在介质16。此外,钙通道阻断剂维拉帕米对agonist-induced收缩的增强作用没有影响phenylarsine氧化酪氨酸磷酸酶抑制剂31日。这表明钙释放细胞内的商店而不是钙流入可能至少部分调解酪氨酸激酶的血管收缩的效果。
乙酰胆碱引起血管舒张通过激活以挪士并没有释放。目前的研究提供了间接的证据表明以挪士通过抑制酪氨酸磷酸化的抑制作用可能占位acetylcholine-induced放松。
先前的报道表明,tyrosine-phosphatase抑制剂,位和phenylarsine氧化,造成endothelium-dependent猪冠状动脉血管舒张,分别在兔颈动脉4,15。在这项研究中,只有适度endothelium-dependent的鼠肺动脉血管舒张反应浓度的增加被发现。预处理与l必经的名字,然而,大大增加了血管舒张反应位,这是完全由格列本脲减毒。这表明没有施加一个抑制作用glibenclamide-sensitive血管舒张药,可以激活位。vasorelaxing因素最有可能来源于内皮作为PA戒指,没有内皮抑制后未能放松针对位没有合成,l的名字。格列本脲只有抑制l必经NAME-induced vasorelaxing响应与内皮PA戒指,作者认为假定的endothelial-derived放松的因素涉及本研究是EDHF(年代)。迄今为止EDHF的释放,乙酰胆碱引起的,见过之后才以挪士和抑制环氧酶3,11。在冠状动脉,EDHF可能通过K的开放Ca渠道而不是K三磷酸腺苷渠道11,12。在目前的研究中,动词居尾的血管舒张效应,只有在l的存在量的名字,表明没有合成抑制倾向于释放的血管舒张药对格列本脲物质敏感。这种补偿机制可能发挥重要作用在血管疾病的特点是损伤的合成和/或释放。
总之,它已被证明,抑制酪氨酸磷酸酶增加vasocontractile回应去甲肾上腺素和乙酰胆碱减少endothelium-dependent放松。令人惊讶的是,原钒酸钠也会引起血管舒张,这可能是由于释放endothelium-derived超极化因子,影响期间只能观察到抑制一氧化氮合成。
- 收到了2001年9月12日。
- 接受2001年11月22日。
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