文摘
本研究的目的是确定哪些支气管肺泡灌洗液(BALF)和血清参数反映新诊断肺结节病的严重程度。
七十四年以前未经治疗的肉质的患者分为三组:10洛夫格伦综合征患者,51稳定疾病患者和13进展疾病患者需要全身性类固醇治疗。
总BALF细胞计数,百分比的肺泡淋巴细胞和淋巴细胞CD4 / CD8比率并没有与疾病严重程度有关。有趣的是,BALF中性粒细胞的百分比显著增加(5.2±1.1%)和嗜酸性粒细胞(1.7±0.6%)在结节患者疾病进展。这两种类型的细胞百分比升高是唯一BALF参数关联到一个更频繁的全身性类固醇治疗的必要性。本协会之间的比例升高BALF中性粒细胞和类固醇治疗中观察到先进的必要性以及早期结节病(放射类型I和II)。血清可溶性白介素2受体和neopterin应承担的水平明显升高在疾病进展而稳定的疾病或洛夫格伦综合征。
目前的结果表明,增加中性粒细胞的百分比(> 3.0%)和嗜酸性粒细胞(> 1%)在支气管肺泡灌洗液新诊断肺结节病的风险明显高于类固醇治疗的必要性和可能有用的进行性疾病的标记。此外,血清学参数研究,只有血清可溶性白介素2受体和neopterin应承担的水平与疾病严重程度有关。
本研究支持,在某种程度上,通过从德国研究委员会资助,德国波恩(没有。μ692 - 3/3)。
结节病是一个系统性的来历不明的肉芽肿性疾病。与获得的细胞免疫的研究进行支气管肺泡灌洗(BAL)大大改善其免疫发病机理的知识1- - - - - -3。肺结节病的典型特点是增加的百分比BAL流体(BALF)淋巴细胞T辅助细胞在肺应承担的积累,导致增加BALF淋巴细胞CD4 / CD8比率。
尽管频繁使用落下帷幕,在确立诊断,共识尚未取得哪些细胞车厢的BALF反映新诊断肺结节病的严重程度。自1980年代以来,一些研究分析的角色的百分比BALF淋巴细胞和CD4 / CD8比值与多样化的执行结果4- - - - - -7。然而,自1990年代末以来,已经有越来越多的证据表明,中性牙槽炎可能发挥重要作用在结节病的结果。在最近的一项研究中,增加释放促炎症趋化因子(如。白介素8 (IL)检测,一个强有力的嗜中性粒细胞趋化因子)BALF细胞结节病、特发性肺纤维化发展了8。在相同的研究中,BALF中性粒细胞的百分比明显高于在疾病进展而稳定的疾病。有趣的是,Drentet al。9最近在一项研究证明,肉质的患者,26日BALF中中性粒细胞的数量区分经历了自发缓解的患者和那些更严重的疾病。
几个血清组件用作标记在结节病的疾病活动10。最常用的指标是血清血管紧张素转换酶(ACE),可溶性IL 2受体(sIL-2R)和neopterin。尽管这些标记水平与疾病的发病机制密切相关,可用证据不足的,他们适合评估结节病的严重性。
本研究的目的是调查,在一个大的肉质的病人(n = 74), BALF和血清学参数反映新诊断结节病的严重性和进步的疾病的可能有用的标记。
方法
研究人群
结节病的诊断成立于74年新诊断患者肺结节病依照最近所描述的标准11。所有的患者纳入本研究曾治疗类固醇;在所有患者中,noncaseating肉芽肿被transbronchial识别和/或支气管活检。BAL和组织学进行了确认通过相同的支气管镜的过程在最初的陈述。支气管镜检查的时间点被认为是诊断的时间点。微生物分析BALF的阴性细菌,分枝杆菌和真菌在所有的病人。
74肉质的病人分配到三组:10个新诊断结节患者古典洛夫格伦综合征(bihilar腺病、关节炎的症状和结节性红斑)没有指示全身性类固醇治疗的诊断或在接下来的6个月(洛夫格伦综合征组);51患者肺功能显示,没有证据表明恶化参数诊断的时候或在接下来的6个月,没有肺外表现需要全身性类固醇治疗(稳定疾病组);明确证据显示13名患者疾病进展(肺功能参数)大幅下降或肺外表现要求时间内的诊断或治疗后6个月(进展疾病组)。这些13个病人中只有一个是治疗严重系统性疾病与多个肺外表现结节病(皮肤、眼睛、肝脏和严重的症状)。这个病人放射型结节病;组织学证据的肺参与是由支气管粘膜活检。其他12名患者由于治疗有明确证据的肺结节病。明显下降的定义用于检测肺功能参数Hunninghake最近所描述的一样et al。12。总之,肺活量(TLC)和肺一氧化碳(的扩散能力DL,有限公司下降10%),从基线被认为是重要的。肺活量(VC)和在一秒用力呼气量(FEV1下降15%),从基线被认为是重要的。
对照组由48个人接受支气管镜检查诊断原因和回顾性免费任何感染,炎症或恶性肺部疾病。微生物分析BALF的阴性细菌,分枝杆菌和真菌。Transbronchial活检并不是表现在控制人口,因为间隙的胸片披露任何证据或其他异常。对照组年龄相仿,也有类似的吸烟者和非吸烟者的比例为结节病组。控制人口的BALF特点列于表1⇓。细胞总数的增加和肺泡巨噬细胞数量和淋巴细胞比例减少吸烟者比非吸烟者被观察到。中性粒细胞的百分比没有显著差异,而中性粒细胞总数在吸烟者高(0.11±0.05×104与0.05±0.01×104细胞·毫升−1),但这种差异没有达到意义。这些观测结果符合大型多中心研究的结果在健康个体执行13。
肺功能和动脉氧张力测量和胸部x线摄影
FEV1、VC、TLC和FEV1/ VC测量使用人体体积描记仪(主屏幕的身体;Jaeger维尔茨堡,德国)DL,有限公司由次呼吸方法决定。值表示为比例的预测价值。所有的肺功能测试进行根据欧洲呼吸协会的建议188bet官网地址14。动脉氧张力(P啊,一个2)测量静止没有补充氧气。
胸部x线摄影在执行后/前和横向投影。三个不同的有经验的读者分类根据radiographical射线照片类型的结节病(0-IV)。
支气管肺泡灌洗和支气管肺泡灌洗液细胞的准备
落下帷幕进行支气管镜检查,如前所述1。总之,300毫升无菌生理盐水(0.9%氯化钠)被灌输进海豆芽或中叶段25毫升整除。每个整除马上吸气,恢复整除汇集。微分细胞计数测定使用cytospin≥400细胞的准备(cytospin II;美国宾夕法尼亚州Shandon仪器,Sewickley)。百分比的cytospin准备建立阈值附近的细胞群,≥800个细胞数。对于immunoperoxidase染色15,细胞被固定在聚l lysine-coated应承担的幻灯片(Bio-Rad,慕尼黑,德国)和开发与过氧化物酶/ antiperoxidase技术使用单克隆抗体针对CD4、CD8, IL-2R(邻位的诊断系统、Neckargemund德国)和人类白细胞抗原博士(德国海德堡,正欲)。知情同意是来自所有参与这项研究。
建立支气管肺泡灌洗液的阈值参数
大群48控制被用来建立平衡微分单元的阈值。自平衡细胞的百分比遵循非参数分布,控制人口的95被选为阈值的百分比BAL淋巴细胞,中性粒细胞和嗜酸性粒细胞。第95百分位是淋巴细胞占11.3%,2.5%的中性粒细胞,嗜酸性粒细胞为1.0%和3.3球淋巴细胞CD4 / CD8比率。出于实际的原因,淋巴细胞值> 15%,> 3.0%的中性粒细胞,嗜酸性粒细胞> 1.0%,CD4 / CD8比值> 3.5被认为是升高的。依照这些阈值建立一个大型多中心研究的结果在健康个体执行13。
血清学参数
血清ACE, neopterin和sIL-2R水平测定使用商用设备,如前所述6。地理C反应蛋白(CRP)浓度是衡量一个免疫学方法使用兔子反人类的CRP (DAKO A / S,斯特鲁普、丹麦)和一个ELAN分析器(埃普多夫,汉堡,德国)。正常范围是0 - 0.50 mg·dL−1。正常的范围都是根据制造商的建议使用测试。
统计分析
数据表示为±sem。比较使用Mann-Whitney U量进行测试。组之间的差异与卡方测试评估。不同参数之间的相关性用斯皮尔曼等级相关系数的测定。一个p值< 0.05被认为是重要的。
结果
研究人口的临床特点
研究人群的临床特点列于表2⇓。结节病的平均年龄组(n = 74)和控制(n = 48)没有显著差异。在肉质的子组根据疾病严重程度,洛夫格伦综合征患者略小于那些稳定的疾病(33.1±2.8与38.7±1.6岁;p = ns),但明显比那些年轻进步疾病(33.1±2.8与52.7±4.2岁;p < 0.005)。稳定的疾病患者也明显比那些年轻进步疾病(p < 0.005)。
吸烟者的百分比是对照组的23.1和25.4在结节病组。没有一个肉质的进行性疾病患者抽烟。
控制的c反应蛋白水平(0.48±0.11 mg·dL−1)是在正常范围内。结节病组的CRP水平(1.43±0.30 mg·dL−1)高(p < 0.01)。这种差异是由于高度显著增加洛夫格伦综合征组CRP水平(6.0±1.3 mg·dL−1;p < 0.0001与控制和稳定的疾病患者(0.73±0.15 mg·dL−1);p < 0.001与患者疾病进展(0.84±0.19 mg·dL−1))。患者的CRP水平稳定或进展疾病与控制之间没有显著性差异。CRP水平没有相关性和BALF中性粒细胞百分比(ρ= 0.26;p = ns)。
VC、TLC和DL,有限公司的结节病组明显低于对照组(p < 0.05),但仍在正常范围内。FEV1/风险比结节病和对照组之间没有差别。洛夫格伦综合征组的肺功能参数没有差别的控制,而VC和TLC的稳定疾病患者明显低于对照组,但仍在正常范围内。VC和DL,有限公司肉质的的进展疾病患者明显低于控制和肉质的洛夫格伦综合征患者或稳定的疾病(表2⇑)。FEV1/风险比结节病子组之间没有显著差异。
P啊,一个2没有显著差异之间的控制和整个结节病组(n = 74)。的P啊,一个2肉质的洛夫格伦综合征患者或稳定的疾病没有明显不同于控制,而P啊,一个2肉质的进步患者疾病的患者明显低于控制和肉质的洛夫格伦综合征或稳定的疾病(如表2⇑)。
分析支气管肺泡灌洗液参数
BALF淋巴细胞的比例是结节病组比对照组显著升高(15.9±1.4与4.6±0.6%;p < 0.0001)。在所有结节病子组,BALF淋巴细胞的比例显著高于控制,而肉质的子组之间没有显著差异获得(图1所示⇓)。CD4 / CD8比值显著增加在所有结节病结节病组和子组相比,控制。观察CD4 / CD8比率最高的洛夫格伦综合征组(6.0±1.3)但这个水平没有明显高于稳定或患者疾病进展。中性粒细胞的百分比是无关紧要的结节病组高于控制(1.6±0.3与0.8±0.1%)。高度显著增加的百分比BALF中性粒细胞在肉质的疾病进展的患者相比,控制(5.2±1.1与0.8±0.1%;相比,p = 0.0005),以及洛夫格伦综合征或稳定疾病患者(分别p < 0.05和p < 0.0005)。BALF嗜酸性粒细胞的百分比略升高结节病组与控制(0.4±0.1与0.1±0.1%;p < 0.05)。高度显著增加BALF嗜酸性粒细胞的百分比在肉质的疾病进展的患者相比,控制(1.7±0.5与0.1±0.1%;相比p < 0.0001),以及洛夫格伦综合征或稳定疾病患者(分别p < 0.01和p < 0.0005)。
![图1. -](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/21/3/407/F1.medium.gif)
中性粒细胞百分比)的淋巴细胞,b)和c)嗜酸性粒细胞,和d) CD4 / CD8比值在支气管肺泡灌洗液(BALF)控制(c),整个结节病组(S;n = 74)和结节病子组(LS:洛夫格伦综合征;SD:稳定的疾病;根据疾病严重程度PD:疾病进展)。竖线代表sem。*:p < 0.05;#:p < 0.005;¶:p < 0.0005与控制;+:p < 0.05;§:p < 0.0005与疾病进展。
类似的结果在分析BALF细胞(数据的绝对数量和重要性水平给出了表2⇑)。之间的观察高度显著正相关BALF中性粒细胞和嗜酸性粒细胞的百分比(p < 0.0001;ρ= 0.54)和绝对数量之间的细胞类型(p < 0.0001;ρ= 0.55)在结节病组(n = 74)。这种正相关关系更明显的子群的肉质的患者疾病进展(n = 13)(中性粒细胞和嗜酸性粒细胞的百分比:p < 0.005;ρ= 0.93;中性粒细胞和嗜酸性粒细胞的绝对数字:p < 0.05;ρ= 0.69)。
吸烟习惯的影响在支气管肺泡灌洗液参数在结节病
总细胞数显著低于不吸烟者比吸烟者(n = 59) (n = 15) (10.2±0.9×104与17.9±2.0×104细胞·毫升−1;p < 0.0005)。淋巴细胞的比例明显高于不吸烟者比吸烟者(17.9±2.0与8.6±2.1%;p < 0.005),而没有获得比较淋巴细胞的绝对数字差异(p = 0.5)。不吸烟者和吸烟者之间没有显著差异得到比较CD4 / CD8比率(p = 0.9),中性粒细胞百分比(p = 0.17)或绝对中性粒细胞的数量(p = 0.9)。(0.55±0.16百分比与0.02±0.20;p < 0.05)和嗜酸性粒细胞的绝对数量(0.065±0.021×104与0.002±0.002×104细胞·毫升−1;p < 0.05)在不吸烟者比吸烟者略高。
比例的支气管肺泡灌洗液中性粒细胞和radiographical结节病的类型
BALF中性粒细胞的百分比之间的关系,radiographical全身性类固醇治疗结节病和必要性是显示在图2⇓。只有一个61肉质的病人没有迹象的治疗有一个BALF中性粒细胞百分比升高(> 3.0%)。相比之下,九13表明患者全身性类固醇治疗的BALF中性粒细胞比例升高。BALF中中性粒细胞百分比升高与必要性全身性类固醇治疗在晚期患者不仅结节病(放射类型III和IV)而且肉质的患者早期(放射类型I和II)。
结节病的影像学类型之间的关系,比例的支气管肺泡灌洗液(BALF)中性粒细胞和必要性全身性类固醇疗法(○:没有治疗(n = 61);•:治疗(n = 13))。═:正常范围的上限。
的支气管肺泡灌洗液参数表明类固醇治疗的风险更高必要性?
21肉质的患者BALF淋巴细胞百分比升高(> 15%)。六的21个患者BALF淋巴球增多和七个53没有BALF淋巴球增多(p = ns)需要皮质类固醇治疗。16个病人显示CD4 / CD8比值升高(> 3.5)。三个16患者和10的58没有CD4 / CD8比值升高需要治疗的患者(p = ns)。十个病人显示BALF的百分比增加中性粒细胞(> 3.0%)。九个十和四个患者的64例没有BALF中性粒细胞百分比的增加表现出明确的适应症类固醇治疗(p < 0.0001)(图2所示⇑)。9名患者BALF嗜酸性粒细胞比例增加(> 1.0%)。六的九个和7个患者65名患者没有BALF嗜酸性粒细胞的百分比增加需要治疗类固醇(p < 0.01)。
血清学分析参数
意味着血清ACE水平,sIL-2R和neopterin略升高结节病组(图3所示⇓)。洛夫格伦组血清ACE水平显著降低,而血清ACE水平之间没有区别肉质的稳定或患者疾病进展。sIL-2R的血清和neopterin在肉质的进行性疾病患者明显高于稳定的疾病或洛夫格伦综合征患者。
血清水平的疾病活动的调查血清学标志物在肉质的子组。血清血管紧张素转换酶(ACE), b)可溶性白介素2受体(sIL-2R)和c) neopterin (S:整个结节病组(n = 74);LS:洛夫格伦综合征;SD:稳定的疾病;帕金森病:疾病进展)。竖线代表sem。═:正常范围的上限。*:p < 0.05与稳定的疾病和疾病进展;#:p < 0.05与洛夫格伦综合征和稳定的疾病。
讨论
本研究的目的是评估的最常用的BALF和血清学参数反映新诊断结节病的严重程度。群体的74年以前未经治疗的患者中,可以证明中性粒细胞和嗜酸性粒细胞的百分比BALF肉质的患者明显升高需要全身性类固醇治疗。有趣的是,高架BALF中性粒细胞的百分比之间的关系的必要性和类固醇治疗患者中观察到的不仅是先进的结节病(放射类型III和IV)早期患者也(放射类型I和II)。尽管BALF淋巴细胞的比例和BALF淋巴细胞CD4 / CD8比率可能有助于建立一个结节病的诊断11,他们没有反映疾病的严重程度。目前的结果表明,增加的百分比BAL中性粒细胞(> 3.0%)和嗜酸性粒细胞(> 1.0%)反映结节病的严重程度和可能有用的进行性疾病的标记。此外,血清学参数研究,只有sIL-2R neopterin水平反映疾病的严重程度,而最常用的参数,血清ACE水平,没有帮助。
BALF细胞分析的实用预测结节病的病程和预后仍然是有争议的。自1980年代以来,大多数研究人员都集中他们的兴趣在淋巴细胞牙槽炎的强度和CD4 / CD8比值与多样化的结果。一些作者发现BALF淋巴细胞比例高预测功能恶化16,而其他人证明高淋巴细胞计数和CD4 / CD8比值可能预示着疾病的缓解5,17。在其他的研究中,无论是BALF淋巴细胞的比例还是CD4 / CD8比率预测价值4,6。在目前的研究中,百分比和绝对数量的淋巴细胞CD4 / CD8比率反映疾病的严重程度或表明类固醇治疗的必要性的风险更高。
灌输卷用于平衡是至关重要的,因为它影响微分细胞计数。众所周知,嗜中性粒细胞和上皮细胞的数量和金额的碎片起源于支气管获得较高的减少体积18。此外,它已经表明,异常的细胞群BALF因间质性肺疾病更引人注目的大体积时使用19。因此,300毫升灌输卷是用于BAL减少可能的污染从支气管液,并确保在微分细胞计数观察到的变化反映在肺泡炎症过程。
在考虑BALF中性粒细胞的百分比时,吸烟应该解决的作用。在目前的研究人群,没有明显差异的BALF中性粒细胞百分比不吸烟者和吸烟者在控制或结节病人口。控制人口的结果符合从大型多中心观察研究在健康个体执行13。此外,没有一个肉质的患者必须接受类固醇是烟民。该研究的主要发现,即。显著增加BALF中性粒细胞的百分比只有在疾病进展和BALF淋巴细胞的比例没有显著差异或CD4 / CD8比值肉质的子组,类似当比较肉质的子群控制吸烟者和吸烟者肉质的子群不吸烟者控制不吸烟者(数据未显示)。因此,BALF中性粒细胞的海拔肉质的患者疾病进展并不是因为吸烟的影响。
分析BALF细胞因子水平已大大改进知识关于结节病的免疫发病机理2,3。车et al。20.证明含量严重超标BALF中IL 8应承担的结节病、特发性肺纤维化患者。在最近的一项研究中,结果表明:培养BALF细胞结节和特发性肺纤维化患者进行性疾病释放更多的促炎症趋化因子,如。比从患者BALF细胞IL 8,应承担的稳定的疾病8。在相同的研究中,BALF中性粒细胞的百分比明显高于比稳定的疾病在疾病进展。由于地理IL 8是一个强有力的嗜中性粒细胞趋化因子,观察到的增加水平的促炎症趋化因子可以解释观察到的积累BALF中性粒细胞在疾病进展。因此,中性牙槽炎在结节病似乎反映了一个重要的持续的炎症过程。
有趣的是,Drentet al。9最近在BALF证明中性粒细胞的数量可以用来区分病人自发缓解,那些表现出更严重的疾病。这些作者指出,他们的研究结果进行解释时应特别谨慎,由于小尺寸的肉质的组(n = 26)。事实上,目前的研究取得了类似的结果在一个几乎是三倍大的人口进一步支持的重要性中性牙槽炎结节病疾病严重程度的关键指标。因此,BALF中细胞因子分析8,20.,Drent的结果et al。9本文提供的数据强烈证实,在某种程度上解释,罗斯的研究从1980年代初et al。21,他描述了一个更高比例的患者中性粒细胞在14个先进的结节病,和林et al。22建议,BALF中性粒细胞可以用来评估疾病的活动。在罗斯的研究et al。21患者,放射III型结节病被划分先进的结节病。虽然BALF中性粒细胞的百分比往往会增加辐射类型在当前队列,一个协会之间的中性粒细胞比例升高BALF和全身性类固醇治疗的必要性肉质的患者早期(放射类型I和II)也观察(图。2⇑)。
关于疾病的血清学参数活动调查,只有sIL-2R和neopterin水平反映结节病的严重程度。都显著升高的疾病进展而稳定的疾病(图。3⇑)。血清ACE水平,被认为反映了肉芽肿负担,不稳定或结节病进展患者之间也有明显的差异。有趣的是,血清ACE水平明显下降的肉质的洛夫格伦综合征患者。以及各种其他的研究6,23,24、血清ACE水平糟糕的预测价值在结节病。这可能是由于血清ACE浓度的非凡的高可变性的健康,这是由许多因素引起的。最重要的因素,负责∼25%的变异,是一个删除/插入ACE基因的多态性基因内区1625,26。质疑genotype-corrected正常的值可以增加血清ACE水平的作用作为一个标记在结节病的疾病活动仍有待进一步的研究阐明的。T细胞的激活和激活单核细胞/巨噬细胞系统结节病的免疫发病机理中起着重要的作用3。量T细胞激活可以通过测量估计sIL-2R水平和激活单核细胞/巨噬细胞系统的评估neopterin水平。目前的数据支持的有用性这两个血清学参数评估结节病严重程度。
本研究的另一个有趣的发现结节病的血清CRP水平的担忧。CRP水平大幅提高肉质的观察洛夫格伦综合征患者。这增加并不是由于细菌感染临床体征缺席以来,微生物文化BALF的消极和CRP水平没有相关性和BALF中性粒细胞百分比。稳定或进展疾病患者的CRP水平没有显著差异的控制。c反应蛋白是一种急性期蛋白质和水平升高在各种炎症过程。在结节病,患者CRP水平升高最近描述了宪法的症状27。由于洛夫格伦综合征患者是已知最好的预后,人们很容易推测,一个有效的急性期反应可能有利于克服结节病的还不清楚原因。因此,高疾病活动表现相关的疾病预后良好,而low-but-persisting慢性疾病活动,如。反映在增加百分比BALF的中性粒细胞和嗜酸性粒细胞,似乎与贫穷相关的结果。
中性粒细胞的百分比的增加(> 3.0%)和BALF中嗜酸性粒细胞(> 1.0%)当然是不足以建立一个诊断结节病,因为有大量的间质性肺疾病引起相似或更高百分比的BALF中这些细胞。然而,目前的结果表明,增加的百分比BALF中性粒细胞和嗜酸性粒细胞在结节病和不是一个罕见的发现反映了一个持续的炎症过程,这可能导致肺实质的逐步丧失。
总之,目前的研究表明,低程度的中性粒细胞和嗜酸性牙槽炎反映新诊断结节病的严重程度。此外,这两种类型的细胞百分比升高是唯一参数的支气管肺泡灌洗液来预测更高风险的系统性类固醇治疗的必要性。因此,中性粒细胞和嗜酸性粒细胞可能扮演重要的角色在结节病的炎症过程和结果。目前的结果提供了强有力的证据表明这些细胞类型的百分比增加支气管肺泡灌洗液可能有用的标记在新诊断肺结节病的疾病。进一步的研究来阐明这些细胞的精确作用在结节病的免疫发病机理是必要的。尽管淋巴细胞牙槽炎伴有增加CD4 / CD8比值有助于建立一个诊断结节病,它不反映疾病的严重程度。此外,目前的数据表明,血清可溶性白介素2受体和neopterin应承担的评估水平可能是有用的参数在临床实践中提供洞察结节病的免疫过程影响疾病的严重程度。
确认
作者欣然承认联合国Husmann的娴熟的技术援助,美国罗斯和Schone。
- 收到了2001年7月17日。
- 接受2002年11月4日。
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