文摘gydF4y2Ba
平衡pro和抗炎细胞因子的分泌是必不可少的在限制在呼吸道感染肺部炎症。提出,在急性感染gydF4y2Ba衣原体肺炎gydF4y2Ba,单核细胞在慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者缺乏机会弥补炎性分泌足量的抗炎细胞因子的免疫反应。gydF4y2Ba
肺泡巨噬细胞(AMs)和外周血单核细胞(PBMCs)从8 COPD患者和8名健康对照组感染了gydF4y2Bac .肺炎gydF4y2Ba为了确定白介素(IL)高1β在地理IL 1受体拮抗剂(IL 1应承担的ra)和IL 8的表达和信使核糖核酸的水平。gydF4y2Ba
分泌的IL 1β显著提高AMs(6)和PBMCs从慢性阻塞性肺病患者感染后(4倍)gydF4y2Bac .肺炎gydF4y2Ba。与对照组相比,释放它的抗炎与IL 1 ra应承担的是减少inCOPD病人,导致一个明显高于IL 1β/ IL 1 ra比率gydF4y2BaC.pneumoniaegydF4y2BaAMs和PBMCs来华的慢性阻塞性肺病患者。gydF4y2Ba
慢性阻塞性肺疾病患者单核细胞减少平衡造成的促炎症免疫反应的能力gydF4y2Ba衣原体肺炎gydF4y2Ba感染比健康对照组。这些发现表明,在急性恶化细胞内病原体,慢性阻塞性肺疾病患者倾向于肺部炎性变化。gydF4y2Ba
慢性阻塞性肺疾病(COPD)是在工业化国家的第四大死因。细菌感染的确切作用在COPD的发病机制是正在进行的争论的主题。大约一半的急性发作是由细菌引起的。除了gydF4y2Ba肺炎链球菌,流感嗜血杆菌gydF4y2Ba和gydF4y2Ba莫拉克斯氏菌属复活gydF4y2Ba专性细胞内的细菌gydF4y2Ba衣原体肺炎gydF4y2Ba与5 - 10%的慢性阻塞性肺病患者急性发作gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba2gydF4y2Ba。gydF4y2Bac .肺炎gydF4y2Ba已经成为建立的事业上、下呼吸道感染的急性发作,而其协会在慢性阻塞性肺病withpersistent炎症较不确定gydF4y2Ba3gydF4y2Ba。血清学研究关联的证据gydF4y2Bac .肺炎gydF4y2Ba特殊免疫球蛋白G和IgM (Ig)水平在慢性阻塞性肺病急性加重患者是有限的由于IgG-seropositivity在成人中发病率较高gydF4y2Ba4gydF4y2Ba。尽管如此,gydF4y2BaC.pneumoniaegydF4y2BaIgA更频繁和更高浓度在慢性阻塞性肺病急性加重患者无病的控制gydF4y2Ba5gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
识别后的细菌病原体,一代的呼吸道炎症的发生涉及到协调支持和抗炎细胞因子的表达。促炎细胞因子如白介素(IL)量1β和肿瘤坏死因子(TNF)α是主要由肺泡巨噬细胞分泌(AMs),代表第一道防线对肺病原体在宿主反应gydF4y2Ba6gydF4y2Ba,已知有效的触发一个有效的免疫反应gydF4y2Ba7gydF4y2Ba。除了地理的有利影响IL 1β和肿瘤坏死因子α在促进炎症细胞积累和刺激中性粒细胞的抗菌能力gydF4y2Ba8gydF4y2Ba,职业之间的不平衡和抗炎细胞因子在肺舱可能导致气道壁改造和纤维化的小航空公司。IL量之间的关系的重要性1β,肿瘤坏死因子α和抗炎同行地理IL 1受体拮抗剂(IL 1应承担的ra)和可溶性肿瘤坏死因子受体我一直好于肺结节病等疾病gydF4y2Ba9gydF4y2Ba和肺结核gydF4y2Ba10gydF4y2Ba。到目前为止,数据有关细菌病原体的影响之间的平衡pro -抗炎细胞因子在慢性阻塞性肺病患者缺乏。为了区分本地和系统性异常主机响应gydF4y2BaC.pneumoniaegydF4y2Ba感染,释放IL 1β和IL 1 ra AMs和外周血单核细胞(PBMCs)慢性阻塞性肺病患者和健康志愿者评估。gydF4y2Ba
方法gydF4y2Ba
主题gydF4y2Ba
为gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba实验中,PBMCs和AMs隔绝COPD病人fibreoptic支气管镜检查外围孤立肺结节的诊断评价。所有慢性阻塞性肺病患者和控制(健康男性志愿者)没有临床和实验室的迹象急性感染的支气管镜检查。慢性阻塞性肺病的诊断是根据美国胸科学会的指导方针gydF4y2Ba11gydF4y2Ba。肺量测定法(BodyScope;Ganshorn Medizin Niederlauer,德国)进行坐姿,和在一秒用力呼气量(FEVgydF4y2Ba1gydF4y2Ba)、用力肺活量测量。在同一时间点,静脉血液从病人和志愿者从肘脉分为四个10毫升含有乙二胺的管子tetra-acetic酸(Sarstedt, Numbrecht,德国)。gydF4y2Ba
协议是医科大学的伦理委员会批准的吕贝克(01 - 084)。所有的志愿者给书面知情同意。gydF4y2Ba
落下帷幕gydF4y2Ba
支气管肺泡灌洗(BAL)如前所述gydF4y2Ba12gydF4y2Ba。总之,fibreoptic支气管镜是嵌入正确的中部叶。总共200毫升磷酸盐等渗盐水(pH值7.4,25°C)顺序是灌输,轻轻吸气。返回液体的量> 60%的注入总额在所有病人和志愿者。整除保留了进一步的微生物测试。冷冻BAL流体(BALF)紧张通过一层粗纱布和离心机在400×15分钟gydF4y2BaggydF4y2Ba在4°C细胞恢复。与生理盐水洗涤步骤后,采用无血清细胞颗粒是resuspended罗斯威尔公园纪念研究所(RPMI) 1640中(σ,Taufkirchen,德国)和调整1×10 AM密度gydF4y2Ba6gydF4y2Ba细胞·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
c .肺炎gydF4y2Ba嵌套PCR使用BAL液体gydF4y2Ba
BALF基因组分析gydF4y2Bac .肺炎gydF4y2Ba脱氧核糖核酸(DNA)使用嵌套式聚合酶链反应(PCR)协议gydF4y2Ba13gydF4y2Ba。简单地说,从BALF DNA纯化gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba蛋白酶K消化和cetyltrimethylammonium溴化治疗。嵌套PCR当时执行使用特有的HL 1 /人力资源优先1一对引物和应承担的1/2,收益率的嵌套引物对128个碱基对的产物。非放射性进行DNA杂交利用寡核苷酸HM量1 3′标签与digoxigenin-deoxyuridine三磷酸(勃林格曼海姆,曼海姆,德国)作为调查。gydF4y2Ba
孤立的人类PBMCsgydF4y2Ba
隔离PBMCs是由密度离心的血液稀释在pyrogen-free盐水1:2 Histopaque(σ)。PBMCs在盐水洗两次,resuspended RPMI 1640年中期和调整为1×10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba细胞·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba作为AMs的描述。gydF4y2Ba
的文化gydF4y2Bac .肺炎gydF4y2Ba
肺部gydF4y2Bac .肺炎gydF4y2Ba应变CWL量029(美国类型文化集合(写明ATCC)虚拟现实地理1310)是生长在消息灵通的2层如前所述gydF4y2Ba14gydF4y2Ba。简而言之,使之喉上皮细胞(写明ATCC CLL玫瑰还是2、23)生长在组织培养板在鹰基本媒介(σ)含10%胎牛血清(Biochrom公斤,柏林,德国),l谷氨酰胺(表达载体、韭菜、荷兰;2毫米),不必要的氨基酸(英杰公司)、庆大霉素(σ;10 mg·LgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba),万古霉素(σ;50 mg·LgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)和两性霉素B(σ;2 mg·LgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)。汇合的单层膜被感染gydF4y2Bac .肺炎gydF4y2Ba和经济增长中被一个不需抗生素的培养基所取代。gydF4y2Ba
AMs和PBMCs的感染gydF4y2Bac .肺炎gydF4y2Ba
AMs和PBMCs被播种到six-well板块(表达载体)测定信使核糖核酸(mRNA)表达式(4、12、24和48 h);覆盖插入到板允许单核细胞粘附,促进染色程序。2 h后,不依从人口和新鲜培养基包含删除gydF4y2BaC.pneumoniaegydF4y2Ba(50%组织培养感染剂量= 1×10gydF4y2Ba−2.7gydF4y2Ba稀释/ 1×10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba夹杂物形成单位·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)补充道。浮在表面的细胞因子被用于测量并存储在−70°C。gydF4y2Ba
实时聚合酶链反应gydF4y2Ba
总核糖核酸(RNA)从AMs和PBMCs COPD患者被隔离使用NucleoSpin RNA II工具包(Macherey-Nagel, Duren,德国)。提取RNA wasreverse转录给互补DNA用随机引物和逆转录酶根据制造商的协议(第一链PCR设备;罗氏公司,德国曼海姆)。使用LightCycler PCR扩增和量化了检测系统(罗氏分子生化药剂,曼海姆,德国)。引物设计包含最小的内部结构,并利用计算机软件兼容的熔化温度。引物的序列如下:提出地理地理甘油醛3磷酸脱氢酶(GAPDH): 5′TCTGCCCCCTCTGCTGATGCCCCC应承担的还是3′;反向GAPDH: 5′必经CCATCACGCCACAGTTTCCCGGAG量3′;提出地理IL 1β:5′必经CTGATGGCCCTAAACAGATGAAG量3′;反向地理IL 1β:5′必经GGTCGGAGATTCGTAGCAGCTGGAT量3′;向前IL 1应承担的ra: 5′必经GGAATCCATGGAGGGAAGAT量3′; and reverse IL‐1RA: 5′‐CCTTCGTCAGGCATATTGGT‐3′. The PCR product was monitored in real-time by measuring the increase in fluorescence caused by the binding of SYBR Green I Dye (Roche Molecular Biochemicals) to double-stranded DNA.
细胞因子浓度的确定gydF4y2Ba
地理地理浓度IL 1β,IL 1 ra和IL 8测定细胞上清液通过酶联免疫吸附试验检测极限为3.9,31.2和16个pg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba分别(Biosource国际打击士气、钙、美国;本德MedSystems,维也纳,奥地利;和研发系统,明尼阿波利斯,美国)。gydF4y2Ba
荧光显微镜gydF4y2Ba
双色荧光检测(现场/死®工具;MolecularProbes,尤金,或者美国)被用来确定的可行性gydF4y2Bac .肺炎gydF4y2Ba和PBMCs 48 h。绿色荧光显示可行的细胞高度膜渗透染料(Syto 9)标签与完整的等离子体膜细胞。相比之下,红色荧光核酸染色(碘化propidium)标签只有细胞破坏细胞膜。gydF4y2Bac .肺炎gydF4y2Ba来华PBMCs和AMs被播种在无菌玻璃盖玻片和孵化与荧光染料(在施用稀释)45分钟在黑暗中。染料溶液被移除,细胞被固定在1%多聚甲醛10分钟和存储−4°C。使用荧光素感染率weredetermined isothiocyanate-conjugated antichlamydial抗体(Dako,汉堡,德国)。gydF4y2Ba
统计分析gydF4y2Ba
统计分析、非参数测试研究中使用。作为最大IL 1β分泌gydF4y2BaC.pneumoniaegydF4y2Ba来华PBMCs检测24小时后,这一次被任命为样本的统计分析从COPD患者和健康对照组(Mann-Whitney U量测试)。一个p < 0.05被认为是显著的。gydF4y2Ba
结果gydF4y2Ba
研究对象gydF4y2Ba
受试者的临床特点如表1所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba。慢性阻塞性肺病病人和志愿者都是男性吸烟者的累积香烟消费≥6 pack-yrs。所有的慢性阻塞性肺病患者接受全身性类固醇或抗生素治疗的研究。没有潜在的病原微生物与BALF和PCR阴性gydF4y2Bac .肺炎gydF4y2Ba在慢性阻塞性肺病患者和健康对照组纳入研究。gydF4y2Ba
感染率和可行性gydF4y2Bac .肺炎gydF4y2BaAMs和PBMCs来华的gydF4y2Ba
Inclusion-forming的尸体gydF4y2Bac .肺炎gydF4y2Ba观察24和48 h后感染AMs和PBMCs(图1 a和b吗gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba),表明细胞内感染。单核细胞在慢性阻塞性肺病患者和健康志愿者,感染率从65±10%在AMs 73±8% PBMCs两组之间没有差异。可行的gydF4y2BaC.pneumoniaegydF4y2Ba可以发现在可行的AMs(图1 c和dgydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)和PBMCs 48 h与生活/死染色。gydF4y2Ba
表达IL 1β和IL 1受体拮抗剂gydF4y2Bac .肺炎gydF4y2BaAMs和PBMCs来华的慢性阻塞性肺病患者gydF4y2Ba
为了评估赞成的时间进程和抗炎细胞因子的生产在AMs和PBMCs COPD患者中,IL 1β和IL 1 ra表达式和mRNA水平测定4、12、24和48 h后衣原体感染的子群6个病人。水平的IL 1βmRNA显著提高4倍AMs和PBMCs 4 h后感染gydF4y2Bac .肺炎gydF4y2Ba。分泌IL 1βAMs应承担的衣原体感染后24 h达到最大水平不断降低48 h(图2gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。相比之下,感染gydF4y2Bac .肺炎gydF4y2Ba并没有导致增强IL 1 ra应承担的mRNA水平。没有显著差异释放IL 1 ragydF4y2Bac .肺炎gydF4y2Ba来华的和未感染AMs(图2 bgydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)和PBMCs 24 h。gydF4y2Ba
地理IL 1β/ IL - 1受体拮抗剂应承担的比例gydF4y2Bac .肺炎gydF4y2BaAMs和PBMCs来华的COPD患者和健康志愿者gydF4y2Ba
感染的AMs和PBMCs慢性阻塞性肺病患者gydF4y2BaC.pneumoniaegydF4y2Ba导致增加的分泌IL 1β。与健康对照组相比,最大增幅2.5折应承担在PBMCs AMs, 2.3折,从类似的基线水平。引人注目的是,增强释放的抗炎与IL 1 ra缺席preactivated AMs和PBMCs COPD患者衣原体感染后(图3所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。相比之下,单核细胞健康志愿者拥有能力功能平衡促炎症免疫反应,分泌大量增加IL 1 ra (106.8±40.6gydF4y2Ba与gydF4y2Ba69.0±38.7 ng·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2BaAMs和16.9±6.0gydF4y2Ba与gydF4y2Ba5.8±4.2 ng·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba从PBMCs;衣原体感染后,p < 0.05)。gydF4y2Ba
综上所述,IL检测1β/ IL 1 ra应承担的比例(×1000)在AMs(和PBMCs)慢性阻塞性肺病患者显著增加从6.3±2.9,27.1±4.1 (170.6±65.2,511.4±196.5 PBMCs)作为回应gydF4y2Bac .肺炎gydF4y2Ba感染。在对照组,感染的AMsgydF4y2Bac .肺炎gydF4y2Ba不明显影响IL 1β/ IL 1应承担应承担的拉比(4.6±2.5吗gydF4y2Ba与gydF4y2Ba7.3±1.2),而有下降的趋势gydF4y2BaC.pneumoniaegydF4y2Ba来华PBMCs (186.6±92.7gydF4y2Ba与gydF4y2Ba85.4±20.6)。gydF4y2Ba
释放IL 8的gydF4y2Bac .肺炎gydF4y2BaAMs来华的COPD患者和健康志愿者gydF4y2Ba
在两组中,感染的AMsgydF4y2Bac .肺炎gydF4y2Ba增加了一个4.5折IL 8分泌。与其他细胞因子,基底地理IL 8水平如果AMs COPD患者对照组相比均有显著提高(283.0±112.0gydF4y2Ba与gydF4y2Ba6.5±2.3 ng·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba;p < 0.05)。地理的可诱导性IL 8 AMs在两组相似,分泌物感染慢性阻塞性肺病患者的AMsgydF4y2BaC.pneumoniaegydF4y2Ba导致显著增强IL 8水平(1324.4±498.3gydF4y2Ba与gydF4y2Ba43.9±14.9 ng·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba;p < 0.05)。gydF4y2Ba
讨论gydF4y2Ba
5到百分之十的慢性阻塞性肺病急性加重患者相关gydF4y2Bac .肺炎gydF4y2Ba感染gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,gydF4y2Ba15gydF4y2Ba。在慢性阻塞性肺病急性加重,肺室代表一个网站的局部炎症,AMs发挥关键作用的宿主防御细菌病原体gydF4y2Ba16gydF4y2Ba。最初,gydF4y2Bac .肺炎gydF4y2Ba感染AMs,导致增强分泌的促炎细胞因子IL 1β和肿瘤坏死因子αgydF4y2Ba17gydF4y2Ba。除了在传染性疾病有益的促炎细胞因子分泌的影响,他们的一些生物活性可能导致结构组织损伤是否缺乏足够的抗炎免疫反应gydF4y2Ba18gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
之间的关系在当前的研究中,释放IL 1β及其应承担的抗炎与IL 1拉了gydF4y2Bac .肺炎gydF4y2BaAMs和来华PBMCs为了评估的角色平衡细胞内病原体的免疫反应在慢性阻塞性肺病患者的呼吸道感染。感染的AMs和PBMCs慢性阻塞性肺病患者gydF4y2Bac .肺炎gydF4y2Ba导致一个主要thepro-inflammatory增加细胞因子IL 1β在剂量和时间的方式。有趣的是,这一增长明显比对照组明显在慢性阻塞性肺病,从类似的基线水平。gydF4y2Ba
促炎细胞因子分泌的模式gydF4y2Bac .肺炎gydF4y2BaAMs和来华PBMCs从健康的人被描述gydF4y2Ba17gydF4y2Ba,gydF4y2Ba19gydF4y2Ba关于抗炎细胞因子的释放,而数据缺乏。gydF4y2Ba
人们普遍认为地理IL 1类风湿性关节炎是一个成功的抑制剂ofIL 1β生物活性gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba21gydF4y2Ba。平衡的免疫反应的重要性已经详细描述了至于IL 1β应承担的规定和IL - 1 ra,竞争性块绑定的IL 1α和IL 1β应承担不诱导细胞的信号gydF4y2Ba22gydF4y2Ba。活跃的肺结核患者,大量坏死腔的特点是升高IL 1β/ BALF中IL 1 ra应承担的比率,导致假设一个失衡IL 1β/ IL 1类风湿性关节炎会导致严重的组织损伤gydF4y2Ba10gydF4y2Ba。目前的结果表明,AMs和PBMCs健康志愿者有一个更大的能力来平衡IL 1β活动增加产量的IL 1 ra。即使在老年患者细胞因子水平可能不同,似乎不太可能在这个年龄更大的患者群是决定性的地理发现不匹配的IL 1β,IL - 1 ra分泌。地理人口研究显示增加产量的IL 1 ra在老年人血液单核细胞,而IL 1β水平保持不变,其老化gydF4y2Ba23gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
PBMCs和AMs报道中扮演重要角色的规定的全身和局部炎症反应,高的表达IL 1 ra的水平gydF4y2Ba24gydF4y2Ba。乔斯gydF4y2Ba等人。gydF4y2Ba25gydF4y2Ba表明,IL 1β应承担的多态性和IL - 1 ra基因与吸烟者的肺功能下降的速率,表明遗传易感性增强对肺组织损伤的易感性。缺乏足够的IL 1 ra应承担的COPD患者的分泌物可以解释持续的炎症反应与胞内病原体,急性发作,干扰IL 1β检测相关的粘附分子表达和IL 8代,导致增强中性粒细胞招募和激活gydF4y2Ba26gydF4y2Ba。显著增强IL 8水平被发现gydF4y2Bac .肺炎gydF4y2Ba和如果AMs来华的慢性阻塞性肺病患者在目前的研究中。增加痰水平的IL 8与提高中性粒细胞激活先前报告在慢性阻塞性肺病急性加重患者gydF4y2Ba27gydF4y2Ba,gydF4y2Ba28gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
的精确作用在患有慢性阻塞性肺疾病急性加重组织破坏和FEVgydF4y2Ba1gydF4y2Ba衰退仍然是争论的主题。刘易斯gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba在人口的一项研究中发现,FEV血单核细胞数量增加与减少gydF4y2Ba1gydF4y2Ba单核细胞和组织的巨噬细胞,表明核心作用在COPD的发病机制。目前作者的知识,当前数据是第一个证明的不平衡支持和抗炎细胞因子的释放炎性细胞的慢性阻塞性肺病患者在感染细胞内病原体。目前结果显示可能的病理生理机制保持肺部炎症过程,自平衡抗炎细胞因子反应是不可或缺的限制炎症肺的隔间。还需要进一步的研究来评估职业和抗炎细胞因子的平衡BALF中慢性阻塞性肺病急性加重患者关于急性或持续的对他们的地位gydF4y2Bac .肺炎gydF4y2Ba感染,澄清是否患者持续恶化率就越高gydF4y2Bac .肺炎gydF4y2Ba感染gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba是相关的gydF4y2Ba离体的gydF4y2Ba观察细胞因子不匹配。患者的gydF4y2BaC.pneumoniaegydF4y2BaDNA检测阳性肺炎没有潜在的肺病,地理平衡分泌IL 1β,IL - 1 ra在BALF(未公开的数据)。gydF4y2Ba
最后,目前的研究表明失衡在赞成和抗炎细胞因子的释放反应gydF4y2Ba衣原体肺炎gydF4y2Ba并不局限于肺部感染,因为它也可以检测到受感染的血液单核细胞在慢性阻塞性肺疾病患者。这个发现可能表明遗传差异调节炎症反应的细胞内病原体在慢性阻塞性肺疾病是同样重要的环境因素,主要影响航空公司。gydF4y2Ba
- 收到了gydF4y2Ba2003年1月21日。gydF4y2Ba
- 接受gydF4y2Ba2003年3月13日。gydF4y2Ba
- ©人期刊有限公司gydF4y2Ba
引用gydF4y2Ba
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