在这个问题的欧洲呼吸杂志,范Hoydoncket al。1报告研究氧化应激生物标志物的再现性,如过氧化氢(H2O2)和8 isoprostane (F的一员2量isoprostane类)在nonconcentrated呼出的气息凝结(EBC)获得健康的男性吸烟者。他们的研究的目的是确定是否这些生物标记物可以被测量在不同天的集合地,使肺疾病的易感人群的识别和监控疾病的严重性。作者收集了EBC样品在1周内三个时间点(0天,3或4天,第七天)从每个健康的吸烟者。他们的主要研究结果:1)H2O2和8 isoprostane被发现只有47%和36%的EBC样本,分别;2)只有三个12吸烟者已经检测到8 isoprostane浓度在所有三次(平均4.6 pg·毫升−1;范围3.9 - -7.7 pg·毫升−1),而H2O2没有检测到所有三次的吸烟者在1周;和3)8 isoprostane和H2O2浓度低于检测在许多的极限(< 3.9 pg·毫升样品−18 isoprostane和0.31µM上2O2)。他们得出的结论是,H的水平2O2不能反复评估,8 isoprostane EBCof健康的吸烟者,因为他们的低浓度和/或缺乏敏感性和特异性的可用的化验。另一个主要因素可能影响再现性包括内部和inter-individual可变性,采样时间和水蒸气稀释了呼吸道飞沫的可变性2。在这项研究中所描述的结果并不令人惊讶,许多调查人员强调类似的问题有关的这些生物标志物EBC的再现性的变化3,4。这些生物标志物的变化在再现性可能是由于方法论问题采样、存储和分析技术的EBC。其他混杂因素的变化将包括吸烟、食用酒精、咖啡因和饮食富含抗氧化剂。
收集过程中,储存条件和分析H2O28必经isoprostanes EBC是有争议的2。在这项研究中,范Haydoncket al。1试图阐明氧化应激生物标记的差异与再现性EBC获得健康的非吸烟者。通过使用一个商用设备(EcoScreen;Erich Jaeger GmbH, Hoechberg,德国),他们收集了∼1毫升的EBC的对象在一个正常的呼吸频率,穿着noseclip, 15分钟。之前调查人员与不同的设计各种自制的冷凝设备使用,发现不同数量(1 - 3毫升)的EBC后15分钟2。现在使用EcoScreen,收集EBC标准化在许多顶尖的实验室,这将不再是一个混杂因素EBC的生物标志物的变化。
F2量isoprostanes稳定产品的非酶的脂质过氧化作用能被探测到的花生四烯酸的生物液体。测量isoprostanes潜在的缺点是,它们在室温下不稳定或冰和迅速降低体外。代理,如脂质过氧化作用抑制剂和金属螯合剂,可以添加之前冻结稳定F2isoprostanes。然而,H2O2蒸发容易由于其高度不稳定的性质。它也知道H的浓度2O2减少几天后存储在−70°C,因此EBC应该迅速冻结在−70°C,或者最好,立即化验4。作者收集了EBC样品,他们立即分为整除,储存在−80°C和在室温下解冻之前分析。因此,这些氧化生物标志物的变化浓度可能不是由于储存条件但可能是因为他们没有新鲜的分析。
范Hoydoncket al。1和许多其他调查人员测量H2O2和8 isoprostane EBC采用比色和免疫化学方法,分别1,4- - - - - -6。8量Isoprostane被酶免疫分析法化验设备和H2O2通过比色法使用辣根peroxidase-catalysed氧化tetramethylbenzidine Gallati描述和Pracht7。H2O2也可以根据鲁赫byfluorimetric测量技术et al。8使用反应底物(3、3’,5、5 '高tetramethylbenzidinep高hydroxyphenylacetic酸在东莨菪亭、phenolsulfonphthalein地理地理鲁米诺5氨基1,2,3,4必经tetrahydrophthalazine还是1,4高土卫四或高香草酸)。这些基质可以添加到样本收集和保存后立即冻结,直到分析。
通过使用这些化验,H2O2水平在健康年轻不吸烟者和吸烟者变化从0.01到0.09µM 0.10到0.75µM,分别2- - - - - -4。这种差异在H (60 - 80%)2O2浓度可能归因于不同的储存条件和/或分析技术用于EBC样本。作者还发现,H的检测极限2O20.31µM,超过了其他报道值(0.1µM)。虽然这种变化并没有被认为是,变化由于试验过程可能不排除。
迄今为止的大多数其他调查人员使用了一个免疫测定测量8 isoprostane EBC的浓度。使用商业套装,范Hoydoncket al。1发现8量的检测极限isoprostane 3.9 pg·毫升−1。同样地,有很多其他的研究,使用相同的工具,主要报道8的水平的变化量isoprostane控制健康的不吸烟者和吸烟者(6.2 pg·-22毫升−1和6.7 -29 pg·毫升−1分别),表明试验本身是可变的。因此,它可能会认为商品化试剂盒的特异性鉴定。例如,可能有大由于生物体液的密切相关的物种可能会干扰免疫测定。这强调了需要一个高度测量8 isoprostane应承担的具体分析系统。Morespecific和强大的分析技术,如气相色谱法/负离子化学电离质谱(GC / MS)与内部标准,可以考虑分析。然而,8的水平还是isoprostane 10只发现在三个对照组(30%)在一项研究中,GC / MS9,这表明有立即需要设置一个标准协议技术,尤其是在EBC。此外,脂质过氧化作用的其他产品,如丙二醛和4羟基量2高nonenal可以derivitised成功后立即取样和测量由一个更可靠的高效液相色谱方法10,11。
的氧化生物标志物水平EBC可以受到吸烟的影响,日变化和年龄。吸烟,特别是急性吸烟,已被证明导致增加H2O2和8 isoprostane EBC在健康受试者2,6。此外,吸烟会给假氧化应激生物标记和香烟本身包含的值和/或形式H2O2由化学反应直接与上皮衬里流体通过其交互。因此,这方面应该考虑在解释研究结果时还是获得了氧化应激的标记。
很明显,8的水平isoprostane和过氧化氢不能可靠地重现在呼出的气息凝结由于上述原因。为了使用这些呼出的气息凝结标记/临床研究的目的,更敏感和特异性要求可重复测量生物标志物。更新的技术,如使用敏感的生物传感器在线测量,正在开发更多的可再生的过氧化氢的测量。例如,它可以在线检测过氧化氢(实时)使用银电极或通过涂层铂电极或聚合物与辣根过氧化物酶12,13。类似酶探测器系统也可能是开发8 isoprostane应承担的实时监测。因此,它是可能的,氧化应激生物标志物可以测量重复性良好取样后立即测量,提供在线(实时)或更敏感的技术,如高效液相色谱、气相色谱/负离子化学电离质谱。因此强烈欢迎和及时的欧洲呼吸学会/美国胸科学会工作组”呼出的气息凝结”将发布其方法论的建议188bet官网地址欧洲呼吸杂志在几个月的时间。
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