文摘
过多的唾液污染诱导痰液样本防止低气道炎症的令人满意的考试。唾液污染的影响在不同的痰液阶段措施和防止唾液污染分析的水平都没有定义。本研究试图通过调查研究增加唾液污染的影响诱导痰液样本。
痰和唾液样本收集与哮喘和健康对照组,和治疗与二硫苏糖醇(德勤)。唾液被添加进整除的分散痰增加比例(0%到100%)。增加唾液污染的影响评估在痰细胞总数、可行性,微分细胞计数和流体相的白介素8 (IL)检测水平,嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)和总蛋白。
的唾液诱导痰减少总细胞绝对计数和细胞计数,但没有改变微分细胞计数。水平的流体相ECP和IL 8水平显著降低与增加唾液污染。有一个项目在逐步减少,IL 8,唾液污染达到意义在70%和80%,分别。IL 8水平纠正应承担的总蛋白显示与增加唾液浓度没有变化。
诱导痰微分细胞计数表示为nonsquamous细胞的比例强劲措施不受唾液污染的影响。研究总报告和绝对细胞计数和流体相中介要求鳞状污染控制水平。
诱导痰已成为一个重要的技术评估气道炎症的疾病,如哮喘、囊性纤维化和慢性阻塞性肺疾病1。尽管痰炎症细胞分析了很多年了2只有在过去的十年中,样本收集和处理的问题已经解决,使可再生的细胞计数在多个场合被获得3- - - - - -5。
尽管有了一些进展,痰的某些方面归纳和分析不完全标准化,特别是关于唾液污染的影响。因此,选择的下呼吸道部分咳出痰一直倡导以克服这些问题2。鳞状污染水平可以从不同主题的样本之间的差异很大。鳞状污染流体相中介评估的影响是未知的,可能当解释结果有重要影响。
本研究的目的是评估唾液污染的影响炎症细胞和流体相标记。作者测试假设过度鳞状污染会鉴别细胞计数的影响不大,但会导致减少流体相的浓度标记。这项研究试图确定鳞状污染水平,炎症标记物成为错误,以帮助确定鳞状的污染程度,应该导致拒绝样本。为了研究这些影响诱导痰和唾液样本收集,然后增加大量的唾液被添加到分散的痰样本。
材料和方法
研究对象
主题与哮喘(n = 7)和健康对照组(n = 8)是从约翰亨特医院门诊所招募和接受了临床评估和痰诱导。受试者平均(范围)45岁(20 - 67)年和11(73%)是女性。主题与哮喘的意思(范围)在一秒钟用力呼气量% 88.4%的预测(63.5 -122.7%)。获得书面知情同意和猎人区研究伦理委员会批准了这项研究。
方法
诱导痰和唾液收集
受试者被要求清洗他们的嘴,漱口前诱导痰中减少唾液污染的风险。痰诱导了如前所述6。痰诱导后唾液样本收集已经完成。
诱导痰和唾液处理
痰mucocellular部分(400µL)选择和分散使用二硫苏糖醇(DTT)(9.05µg·毫升−1;美国Calbiochem拉霍亚,CA)。德勤也添加到400µL唾液在一个单独的容器中。痰和唾液样本都同时处理在不同管使用先前描述的痰液处理方法6。短暂,痰/德勤和唾液/解决方案被震惊震动恒温水槽在37°C的前30分钟phosphatebuffered盐水(PBS)。样品被过滤。德勤提供有关治疗唾液加入德勤提供有关治疗痰(细胞和上层清液)在体积浓度从0增加到100%。然后结合样本离心机准备无细胞系上层清液和细胞颗粒。细胞颗粒resuspended在PBS和cytospin幻灯片准备。
结果评估
总细胞数(太极拳),细胞生存能力(使用台盼蓝排斥),和微分细胞计数(使用可能格Geimsa染色)进行cytospins。上层清液样本白介素8 (IL)量(enzymelinked免疫吸附测定;美国明尼阿波利斯MN研发系统),嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)(放射免疫检定法;法玛西亚诊断,乌普萨拉,瑞典)和血清总蛋白(Coomassie +;美国皮尔斯罗克福德,IL)。
统计分析
结果报告为中位数(四分位距(差)。非参数测试是用于比较数据。弗里德曼的测试用于检查参数的变化后的唾液,与接受意义p < 0.05水平。Posthoc测试使用signedrank测试bonferroni纠正p值了。对于posthoc测试,意义是接受p < 0.0125。
结果
诱导痰和唾液的特征
德勤提供有关治疗痰中值为2.5(1 - 8.1)%鳞状细胞。太极拳组36 (20-52)×104细胞·毫升−1。痰微分细胞计数结果如表1所示⇓。痰中含有一种中值(差)346(236 - 610)µg·毫升−1蛋白质,47 (13 - 318)ng·毫升−1ECP, 0.7 (0.3 - -1.7) ng·毫升−1IL 8。
痰液嗜酸性粒细胞的百分比较高与健康对照组相比,哮喘受试者(1.6%与表2 0%,p = 0.02⇓)。没有其他细胞的比例差异包括鳞状上皮细胞之间的主题与哮喘和健康对照组(表2⇓)。水平的IL 8,应承担的ECP和总蛋白相似主题之间与哮喘和健康对照组(p > 0.05,表2所示⇓)。
唾液中含有一种中值(0)(0 - 3)×104细胞每毫升(数据没有显示)。三个样品(20%)有足够的细胞准备cytospin幻灯片,包含一个值100%的鳞状细胞。中性粒细胞和巨噬细胞被观察到的只有一个cytospins唾液浓度100%。IL 8在应承担的唾液样本的浓度为0.09 (0.05 - -0.123)ng·毫升−1并在10(67%)的样品可衡量的。ECP水平4.6 (2.5 - -25.7)ng·毫升−1和可测的只有7(47%)的样品(数据未显示)。
诱导痰唾液污染的影响
10(67%)痰液样本(6哮喘)是足够的体积获得细胞计数数据,收集唾液范围的0%到80%(表1所示⇑)。这个数据集是用于分析报道如下。
增加唾液污染导致从36×10降低移行细胞癌47×104细胞·毫升−1(p < 0.0001),但没有影响细胞的生存能力(表1⇑,p > 0.05)。没有显著的影响唾液污染痰微分细胞计数(表1所示⇑,p > 0.05)。相比之下,唾液的加入显著降低所有细胞类型的细胞绝对计数(表1所示⇑)。
的唾液诱导痰液样本导致低水平的蛋白质在上层清液(数据没有显示,p < 0.0001)。也有显著减少的ECP和IL 8水平样本含有唾液的比例高于在整洁的诱导痰液样本(无花果1 a、1 b、p⇓< 0.0001)。纠正IL 8应承担的结果,表示为每μg总蛋白质,不影响与唾液增加稀释(p = 0.228,图2⇓)。在统计上有显著差异的ECP水平,唾液稀释后,校正后仍ECP水平蛋白(p = 0.02,图2 b⇓)。
水平的上层清液IL 8和项目相关的痰(唾液浓度0%:r = 0.74, p = 0.036)。类似的观察水平的协会10和唾液浓度20%。然而,在唾液浓度高于50%本协会并没有观察到。
IL 8水平显著降低而应承担的诱导痰(唾液浓度0%)样品时唾液浓度达到80% (p = 0.0117),而对于ECP水平成为唾液浓度达到70%时显著降低(p = 0.0117)。
讨论
本研究调查的影响诱导痰总唾液污染和微分细胞计数,和液体阶段ECP, IL 8和蛋白质含量。诱导痰细胞计数差似乎特别健壮,因为几乎没有改变由于唾液污染的水平42%的鳞状上皮细胞,这与唾液浓度80%的体积。然而,唾液污染导致了进步和显著减少总和绝对细胞计数,以及流体相ECP, IL 8和蛋白质含量。纠正中介水平蛋白质含量可以调节唾液污染的影响IL 8水平,应承担的但不是ECP水平。
鳞状污染是一个混杂变量的解释痰标记。有鳞状污染程度的差异之间的不同的主题和选择和整个咯血的处理方法4,5,7。本研究的数据表明,尽管有一些唾液污染对细胞的影响差异,影响很小,即使唾液浓度> 70%。尽管鳞状污染与整个大咯血方法,目前的数据表明,这是不太可能影响微分细胞计数报告nonsquamous细胞的比例,和比较研究证实了这一点7,8。因此,选择和整个咯血痰痰处理方法给可比结果微分细胞计数。
鳞状污染的影响等流体相标记ECP和IL 8是更多的问题。有一个项目在逐步减少与增加唾液污染浓度。唾液样本的70%,这对应于鳞状细胞计数> 20%,将对项目不满意测量。此外,修正总蛋白没有解决这个问题。目前的研究数据显示,项目的价值是非常依赖于唾液污染的程度。这是一致的与其他数据报告ECP水平发表在样本处理减少唾液污染,是大大不同的可能的解释ECP含量之间的选择4和全咳出痰的方法处理5,7- - - - - -8。
可能有一个假设,只要样品之间的唾液污染是相当恒定的,会有小影响ECP的相对水平。当前的研究的数据表明这是真正的唾液样本中含有高达70%,但在高于这个浓度不应假设ECP的相对水平。在当前的研究中70%的唾液浓度对应于一个唾液比例21%的细胞。
在早期研究中Fahyet al。5表明ECP,组胺、类胰蛋白酶和白蛋白含量较低的受试者的唾液与哮喘而诱导痰液样本。然而,鳞状污染水平在本研究中的患者的痰是更高(46%)相比,当前的研究(2.8%),并从当前结果目前作者推测,这些样本将会进一步增加中介水平如果他们被处理减少鳞状污染。
对唾液污染的影响IL 8的评估。地理IL 8,像ECP,显示浓度的减少与增加唾液污染。然而,这似乎是成功解决通过为每个样品的蛋白质含量校正,导致蛋白质的IL 8浓度/µg应承担类似各级唾液污染。这个结果的generalisability需要进一步研究。痰液蛋白质含量会增加条件的炎症。可能正常化地理IL 8水平可能并不足以解释dilutional唾液在这种情况下的影响。然而,当这些条件不太可能改变唾液蛋白质含量,但可能会影响痰IL 8和蛋白质含量在某种程度上,也有可能痰IL 8水平纠正应承担的蛋白质可能充分解决唾液污染。观察到的原因调整IL 8和不能ECP是未知的。然而,这些结果表明,稀释动力学为总项目是不同的,这些蛋白质。
总之,这些实验证实,痰微分细胞计数,表示为一个比例的nonsquamous细胞是健壮的措施。总细胞数、细胞绝对计数和流体相标记不太健壮和敏感唾液污染的影响。对白介素8,应承担的唾液污染的影响可以克服蛋白质修正。然而,这需要进一步研究在学科更为明显炎症。这项研究的结果加强欧洲呼吸学会调查小组建议,痰结果应报告为微分细胞计数与鳞状污染188bet官网地址的程度9。
- 收到了2003年4月16日。
- 接受2003年12月15日。
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