摘要gydF4y2Ba
尽管广泛的脱颗粒可能是嗜酸性粒细胞致病的先决条件,但我们对这些细胞在嗜酸性条件下的脱颗粒状态知之甚少。本研究通过对嗜酸性粒细胞组织超微结构的研究,探讨了季节变应原暴露前后过敏性鼻炎患者嗜酸性粒细胞脱颗粒的情况。gydF4y2Ba
共有23名患者出现症状gydF4y2Baq.d.gydF4y2Ba,之前和期间花粉季节。鼻腔活检确定粘膜嗜酸性粒细胞的数量及其脱颗粒状态。此外,嗜酸细胞阳离子蛋白(ECP)和α的鼻腔灌洗液水平gydF4y2Ba2gydF4y2Ba-大球蛋白分别作为嗜酸性粒细胞活性和血浆渗出的指标。gydF4y2Ba
季节性变应原暴露与增加的鼻部症状相关联的,增加的ECP和α的灌洗液水平gydF4y2Ba2gydF4y2Ba-大球蛋白,增加组织嗜酸性粒细胞的数量。在组织中,透射电镜显示在季节之前已经有中度的碎粒化(平均值±)gydF4y2BaSDgydF4y2Ba37±2.7%改变颗粒)。季节变应原暴露增加了这种脱颗粒(87±1.8%),并产生了大量颗粒蛋白沉积的局部区域。嗜酸性粒细胞脱颗粒的程度与组胺激发时灌洗液中ECP的水平相关。gydF4y2Ba
总之,这项研究表明,鼻粘膜过敏性鼻炎特色:无症状的基准条件下适度脱颗粒嗜酸性粒细胞了。在有症状的季节性过敏性鼻炎的发展协会,嗜酸性粒细胞颗粒蛋白的组织沉积显着地通过增加嗜酸性粒细胞数与单个细胞的显着增强的脱粒升高,在一起。gydF4y2Ba
本研究得到了瑞典研究委员会、斯科内郡委员会、克拉福德基金会、哮喘与过敏基金会、瑞典医学协会和瑞典耳鼻喉协会的支持。gydF4y2Ba
嗜酸粒细胞的组织积累是过敏性疾病的特征gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba2gydF4y2Ba。几十年来,嗜酸性粒细胞被认为是发挥在过敏性疾病的主要致病作用,因为它们释放高细胞毒性颗粒蛋白的能力gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba4gydF4y2Ba。然而,抗白细胞介素(IL)-5中和抗体的哮喘临床试验结果gydF4y2Ba5gydF4y2Ba,gydF4y2Ba6gydF4y2Ba,治疗方法直接针对本病的嗜酸性粒细胞成分,在过去几年中曾质疑这种观点gydF4y2Ba7gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
为嗜酸性粒细胞的活跃致病作用的基本前提是,这degranulates在病变组织。它是,因此,感兴趣的是嗜酸性粒细胞脱颗粒的发生可能不同的疾病之间极大地变化gydF4y2Ba8gydF4y2Ba。因此,在寻找嗜酸性粒细胞的致病作用时,特别关注组织嗜酸性粒细胞高度去颗粒化的情况可能是有帮助的。初步结果已经表明,在季节性变应性鼻炎的目标组织中出现的嗜酸性粒细胞,可能比以嗜酸性粒细胞为特征的许多其他常见疾病表现出更明显的脱颗粒现象,gydF4y2Ba如。gydF4y2Ba炎症性肠病和哮喘gydF4y2Ba8gydF4y2Ba,gydF4y2Ba9gydF4y2Ba。然而,到目前为止,还知之甚少嗜酸性粒细胞脱颗粒的过敏性鼻炎的动态,特别是当疾病进展从无症状基线情况成活性症状条件。gydF4y2Ba
本研究探讨了季节性变应性鼻炎的发生可能与鼻粘膜高度脱颗粒嗜酸性粒细胞的显著增加有关。另一个目标是建立无症状患者的去肉芽基线状态。因此,我们使用透射电镜(TEM)对变应性鼻炎患者在季节变应原暴露前和暴露期间的嗜酸性粒细胞脱颗粒水平进行了详细的分析gydF4y2Ba9gydF4y2Ba,gydF4y2Ba10gydF4y2Ba。此外,还测定了鼻腔组织和灌洗液中是否存在嗜酸性阳离子蛋白(ECP)。gydF4y2Ba
材料和方法gydF4y2Ba
学习规划gydF4y2Ba
鼻腔活检和盐水灌洗(有和没有组胺)从患者得到严格的季节性过敏性鼻炎之前和晚成桦树花粉季节。于2000年3月18日和那些在花粉季节获得了5月9日在花粉季节前的活检,2000鼻灌洗在同一日期4月7日和5月2日,2000年的数字进行,如wellas在气道嗜酸性粒细胞粘膜测定。此外,theeosinophil脱粒状态,使用的颗粒的变化和细胞外的ECP免疫组织化学鉴定超微结构TEM识别评估。ECP和α。此外,鼻腔灌洗液水平gydF4y2Ba2gydF4y2Ba巨球蛋白测量为嗜酸性粒细胞分别活性和血浆渗出,的指数。gydF4y2Ba
病人gydF4y2Ba
本研究共纳入23例季节性变应性鼻炎患者(平均年龄28岁,范围21-46岁)。入选标准:有严格季节性变应性鼻炎病史≥2年,皮肤针刺试验对桦树花粉过敏原阳性。排除标准为慢性鼻疾病史(包括常年变应性鼻炎)、哮喘史、常年过敏原皮肤针刺试验阳性和正在进行的药物治疗。该研究得到了当地伦理委员会的批准,并获得了知情同意。gydF4y2Ba
症状gydF4y2Ba
记录症状gydF4y2Baq.d.gydF4y2Ba在学习期间使用日记卡。记录症状,gydF4y2Ba即。gydF4y2Ba因此,鼻内窥镜、鼻塞和打喷嚏被分为四个等级:0级、0级;1级,温和;二年级,温和;第三级,严重的症状。每一天,计算症状总分。gydF4y2Ba
鼻灌洗gydF4y2Ba
使用鼻池装置进行盐水冲洗,同时进行组胺刺激和鼻粘膜冲洗。后者用于产生急性血浆渗出,以研究组胺诱导的血浆管腔进入可能冲洗组织,并用ECP丰富灌洗液样本gydF4y2Ba11gydF4y2Ba,gydF4y2Ba12gydF4y2Ba。鼻池设备是配备有鼻适配器可压缩塑料容器中。该适配器被插入到其中一个鼻孔,和当患者在60°弯曲颈位置前倾容器被压缩。因此,鼻池流体灌输到鼻腔中的一个,并保持与确定的时间周期大面积的粘膜表面的接触。当在设备上的压力被释放时,流体返回到容器中。In the present study, the volume of the nasal pool fluid was 15 mL. Nasal lavages with and without histamine were carried out before, and on three occasions, during the pollen season. On each occasion, a 10-min saline lavage was performed first, followed immediately by two 30-s saline rinsing lavages to remove any additional luminal surface material. After a period of 10 min, a combined 10-min histamine challenge (0.4 mg·mL−1gydF4y2Ba),并进行了灌洗。鼻腔冲洗是在早晨实验室检查时进行的。洗涤液离心(325×)gydF4y2BaggydF4y2Ba,10 min, 4°C) and samples were obtained from the supernatant and frozen (−20°C), awaiting analysis of ECP and α2gydF4y2Ba巨球蛋白。gydF4y2Ba
鼻活组织检查gydF4y2Ba
在花粉季节之前和之后进行了鼻活组织检查。局部麻醉采用四环素溶液(20 mg·mL)gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba) and adrenaline (0.1 mg·mL−1gydF4y2Ba),递送首先通过鼻喷雾装置,然后,通过棉签。In addition, carbocain (10 mg·mL−1gydF4y2Ba) and adrenalin (5 mg·mL−1gydF4y2Ba)被注射到下鼻甲骨。在距鼻甲前缘约0.5 cm处的下鼻甲处进行了两次鼻活组织检查。切割穿孔钳(2毫米),与钻孔机,用于此目的。切除后立即将切片放入含有甲醛(3%)和戊二醛(1%)的PBS缓冲液中,进行电子显微镜分析。另一组切片放置于Stefanini的固定液(PBS缓冲液,pH 7.6,添加4%甲醛和苦酸)中过夜,温度为4℃,后处理eosinophil过氧化物酶(EPO)酶组织化学和ECP的免疫组化鉴定。gydF4y2Ba
灌洗液的α水平gydF4y2Ba2gydF4y2Ba巨球蛋白和嗜酸细胞阳离子蛋白gydF4y2Ba
The nasal lavage fluid samples were processed by ultrasonication for 15 min. The α2gydF4y2Ba-macroglobulin was measured using a radioimmune assay sensitive to 7.8 ng·mL−1gydF4y2Ba13gydF4y2Ba。兔子反αgydF4y2Ba2gydF4y2Ba巨球蛋白(Dako公司,哥本哈根,丹麦)用作抗血清和人血清(Behringwerke公司Diagnostica公司,马尔堡,德国)作为标准。人类αgydF4y2Ba2gydF4y2Ba-大球蛋白(cappelo - organonteknika, Turnhout,比利时)用乳糖过氧化物酶法碘化。示踪剂和标准(或样品)与抗血清混合后加入山羊抗兔血清(阿斯利康,隆德,瑞典)。结合分数的测量使用伽玛计数器(法玛西亚诊断学,乌普萨拉,瑞典)。实验内和实验间的变异系数分别为3.8-6.0%和3.1-7.2%。如前所述,用荧光免疫分析法(Pharmacia Diagnostics)测定鼻灌洗液中的ECP水平gydF4y2Ba14gydF4y2Ba。The detection level of the assay was <2 ng·mL−1gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
嗜酸性粒细胞过氧化物酶染色gydF4y2Ba
嗜酸性粒细胞是呈现在传统低温恒温器部分(10µm)使用的酶组织化学染色cyanide-resistant EPO(促红细胞生成素)如前所述gydF4y2Ba9gydF4y2Ba。简而言之,标本在PBS缓冲液冲洗彻底,孵化3分钟在室温下在PBS补充3.3 -diamino-benzidiene-tetrahydrochloride(75µg·100毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba),HgydF4y2Ba2gydF4y2BaOgydF4y2Ba2gydF4y2Ba(0.3 mL·100 mL−1gydF4y2Ba) and NaCN (50 mg·100 mL−1gydF4y2Ba)。然后,将样品在水中随后漂洗,用哈里斯苏木精复染,安装在PERTEX(Histolab,哥德堡,瑞典)和审查了明视场显微镜。嗜酸性粒细胞的总数在从每个活检两个部分进行计数。所有的量化是在不知情的方式进行。gydF4y2Ba
免疫组织化学gydF4y2Ba
低温部分(10µm厚)在三羟甲基氨基甲烷缓冲液冲洗盐水(TBS;用正常兔血清阻断非特异性结合位点(Dako;稀释1:10 in TBS) 10分钟。切片在4℃条件下与原单克隆抗体孵育过夜。单克隆抗体EG2 (Pharmacia诊断;稀释1:80),在甲醛固定的组织中,识别ECP的“静息”和分泌形式gydF4y2Ba15gydF4y2Ba,用于检测细胞内外的ECP。与一抗孵育后,用TBS冲洗标本,用二抗(兔抗鼠德州红;美国杰克逊女士;稀释1:80于20%正常人血清中)30分钟。洗净后,TBS切片在室温下用荧光素异硫氰酸酯(FITC)溶液孵育10分钟(FITC分子对嗜酸性粒细胞颗粒中的阳离子蛋白有很高的亲和力gydF4y2Ba16gydF4y2Ba,在甲醛处理过的组织中,可作为组织嗜酸性粒细胞的一般染色)。最后,将切片冲洗干净,置于PBS:甘油(1:3)中,用荧光法检查。gydF4y2Ba
透射电子显微镜法gydF4y2Ba
固定后,活检在缓冲液中冲洗,在1%四氧化锇中室温后固定1小时。在此之后,他们在分级丙酮溶液中脱水并嵌入极化床812 (Poly Science, Niles, IL, USA)。使用一个ultratome (ultratome新星、徕卡、德国),1-µm塑料部分被削减,与甲苯胺蓝染色。为了避免机械诱导的人工制品,甲苯胺蓝染色切片被用来选择具有良好形态的组织区域进行进一步的电子显微镜研究。因此,在机械变形明显的地区,gydF4y2Ba如。gydF4y2Ba不正常的拉伸和破裂的组织被排除在进一步的分析之外。重要的是,在这个以盲法进行的选择过程中,研究者无法区分嗜酸性粒细胞。在选定的保存完好的区域,将超薄切片(90 nm)切割并置于200目薄条铜网格上,用乙酸铀酰染色(ddH染色4%)进行对比gydF4y2Ba2gydF4y2Ba加入柠檬酸铅(1百万NaOH中0.5%,室温下3分钟)。超微结构分析采用飞利浦CM10透射电镜(Philips, Eindhoven,荷兰)。gydF4y2Ba
嗜酸性粒细胞的超微结构分析gydF4y2Ba
组织中的嗜酸性粒细胞是通过其特有的超微结构形态来识别的,如其他地方所述gydF4y2Ba17gydF4y2Ba。含有嗜酸性粒细胞的数量充足,并且有一个保存完好的形态活检的号码,gydF4y2Ba即。gydF4y2Ba无机械文物的迹象,是在之前和之后的季节性观察七(2000年3月8日)和8(2000年5月9日),分别。在这些活检,每个人嗜酸性粒细胞进行了仔细的分析,在4,000-12,000倍放大倍率。gydF4y2Ba
根据以下标准确定和量化脱粒或死亡的模式。1)破片脱颗粒(PMD)和PMD定量:完整的细胞在细胞质内呈现特定颗粒的特征性变化,gydF4y2Ba即。gydF4y2Ba出现部分空的胞内颗粒,无颗粒挤压的迹象。在所有个体嗜酸性粒细胞中,计算总颗粒数。接下来,对每个特定颗粒进行评估,并将其归类为完整颗粒(无脱粒迹象,gydF4y2Ba即。gydF4y2Ba或激活(由于PMD引起的各种结构变化,gydF4y2Ba如。gydF4y2Ba电子致密核心材料,损耗的参差不齐损失或粒状基质的粗大化,或更多或更少的空颗粒)。PMD的每个单独的嗜酸性粒细胞的程度进行计算,定义为激活的颗粒的百分比和称为用于该小区的脱粒索引gydF4y2Ba10gydF4y2Ba,gydF4y2Ba17gydF4y2Ba。2)嗜酸性粒细胞的细胞溶解(ECL):染色质的存在下,细胞膜完整性的丧失和部分溶解的细胞质gydF4y2Ba18gydF4y2Ba,gydF4y2Ba19gydF4y2Ba。ECL的程度表示为总嗜酸性粒细胞的组织的百分比。3)嗜酸性粒细胞的胞吐作用:整个无膜特殊颗粒,其膜已融合与细胞膜的挤出形态迹象gydF4y2Ba17gydF4y2Ba,gydF4y2Ba20gydF4y2Ba。4)嗜酸性粒细胞凋亡:电子致密的存在(gydF4y2Ba即。gydF4y2Ba黑色),浓缩染色质,保存的质膜和非扩张的细胞器gydF4y2Ba17gydF4y2Ba,gydF4y2Ba21gydF4y2Ba,gydF4y2Ba22gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
统计数据gydF4y2Ba
在鼻部症状差异,灌洗ECP和α的流体水平gydF4y2Ba2gydF4y2Ba-大球蛋白和组织嗜酸性粒细胞数采用弗里德曼检验(配对比较)。如有统计学意义,则采用Wilcoxon符号秩检验进行进一步分析。组织PMD指数的差异采用Mann-Whitney u检验(非配对比较)。采用Spearman秩相关检验检验ECP灌洗液水平与组织嗜酸性粒细胞数、组织PMD指数之间的相关性。类似地,用Spearman秩相关检验分析嗜酸性粒细胞指数与症状之间的相关性。p值<0.05为差异有统计学意义。数据以均数±表示gydF4y2Ba扫描电镜gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
结果gydF4y2Ba
季节性的症状gydF4y2Ba
区域桦树花粉量在4月底5月初期间3周均稳步增长。因此,在此期间记录的鼻部症状显著上升。与第一项研究一周相比,gydF4y2Ba即。gydF4y2Ba3月18-24日,研究第3周、第5周(p<0.05)、第6周(p<0.001)、第7周(p<0.001)鼻总症状的增加均有统计学意义(图1)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
![图。1。-gydF4y2Ba](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/24/5/750/F1.medium.gif)
在研究期间,鼻塞症状。症状,这被记录gydF4y2Baq.d.gydF4y2Ba,在花粉季节逐渐发展起来。数据以均数±表示gydF4y2Ba扫描电镜gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
灌洗液的α水平gydF4y2Ba2gydF4y2Ba巨球蛋白和嗜酸细胞阳离子蛋白gydF4y2Ba
鼻灌洗液的α水平gydF4y2Ba2gydF4y2Ba-大球蛋白在花粉季节升高,在第2个季节(p<0.05)和第3个季节(p<0.01)有统计学意义(p<0.01)。gydF4y2BaC.F.gydF4y2Ba在赛季前;图2gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。Similarly, levels of ECP were significantly increased at the second (p<0.05) and third (p<0.05) seasonal observation (before the season; fig. 2⇓gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
![图2:gydF4y2Ba](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/24/5/750/F2.medium.gif)
鼻盐水灌洗液的α水平gydF4y2Ba2gydF4y2Ba巨球蛋白(a和b)和嗜酸性粒细胞紧张性蛋白(ECP; c和d)在研究期间,盐水后获得(□)或组胺激发(└)。数据以均数±表示gydF4y2Ba扫描电镜gydF4y2Ba。警:季节前;S:季节。*:P <0.05;**:P <0.01。gydF4y2Ba
组胺产生显著血浆渗出,gydF4y2Ba即。gydF4y2Baα的增加鼻腔灌洗液水平gydF4y2Ba2gydF4y2Ba巨球蛋白,之前以及在花粉季节(P <0.001;gydF4y2BaC.F.gydF4y2Ba稀释剂的挑战;图2gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba)。在第二季节性观察,渗出性响应性组胺增加(p <0.01;gydF4y2BaC.F.gydF4y2Ba在本赛季之前)。在整个季节观察中,组胺灌洗液中ECP水平进一步升高(p<0.01;gydF4y2BaC.F.gydF4y2Ba在赛季前;图2gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba)。鼻灌洗液的α水平gydF4y2Ba2gydF4y2Ba巨球蛋白相关(相关:ρ)和生理盐水的ECP水平(ρ= 0.825,p < 0.0001)和组胺液体灌洗(ρ= 0.389,p < 0.01)。gydF4y2Ba
嗜酸性粒细胞组织gydF4y2Ba
组织嗜酸性粒细胞的数量和分布用环氧树脂染色冷冻法进行了评估。在赛季前进行的活检中,有56%的组织中存在嗜酸性粒细胞。在季节变应原暴露时,82%的活检标本含有嗜酸粒细胞,嗜酸粒细胞的数量与季节前值相比显著增加(图3a)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。在两组中,嗜酸性粒细胞主要分布在固有层组织,只是在表面上皮的基底膜的下方。gydF4y2Ba
一)组织嗜酸性粒细胞和b)之前(□获得活检零碎脱粒(PMD)的程度的编号)和之后(└)花粉季节。季节之前,嗜酸性粒细胞数过氧化物阳性组织嗜酸性粒细胞具有边际脱粒一起观察。在季节性过敏原暴露的关联,既嗜酸性粒细胞的组织数量和平均水平脱粒增加显著。数据以均数±表示gydF4y2Ba扫描电镜gydF4y2Ba。**:P <0.01。gydF4y2Ba
嗜酸性粒细胞脱颗粒gydF4y2Ba
零碎脱粒gydF4y2Ba
Both before and during the pollen season, signs of eosinophil degranulation could be detected in all examined tissue regions (figs 3b⇑gydF4y2Ba4,gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba,5gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba和6gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。However, areas with extensive or completely degranulated eosinophils were present only during the pollen season (figs 4b⇓gydF4y2Ba在季前组织嗜酸性粒细胞中,平均有37±2.7%的颗粒因PMD而改变(图3b)gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba)。The granule alterations during PMD were characterised by mild-to-moderate loss of either core or matrix, or moderate-to-complete loss of both compartments (fig. 4d–g⇓gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
透射电子显微照片(a)之前和期间展示鼻组织嗜酸性粒细胞的代表性图像(B,C,H,和i)花粉季节。典型的组织嗜曙红细胞,其存在的季节都有前丰富正常颗粒(*),加上分散的颗粒剂显示零碎脱粒的结构标志(PMD;在一部分的箭头)。在花粉季节,大部分颗粒在结构上改变了由于PMD(在部分b箭头)。c)与实际上参与广泛蛋白释放所有的颗粒在花粉季节被排他地观察到,当经历细胞溶解(ECL)嗜酸性粒细胞中也观察到嗜酸性粒细胞(H,I)。PMD中典型的颗粒变化包括在颗粒核心的电子密度的选择性丧失(e)中,基体材料(F)的更多或更少的选择性丧失,或中度至重度核心和矩阵(G)的损失。在上皮损伤和修复的散射片状区域,活化嗜酸性粒细胞为代表的主要浸润细胞类型(H,I)。Scale bars=2 µm (a and b), 3.5 µm (c), 350 nm (d–g), 5 µm (h), and 1 µm (i).
![图5. -gydF4y2Ba](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/24/5/750/F5.medium.gif)
散点图举例的零碎的脱粒(PMD)随机局部组织策划领域的水平,检查之前(⋄)和期间(♦)过敏原的季节。每个数据点代表每个检查组织区域的平均脱颗粒情况。虽然两个研究小组之间有明显的差异,但在所有的研究区域都存在脱颗粒的迹象。gydF4y2Ba
在花粉季节(a)之前和(b)期间检测的粘膜区嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)的组织分布的荧光显微照片。采用间接免疫荧光法,以德州红为检测荧光(红色染色),观察ECP的分布。利用异硫氰酸氟铬荧光素对嗜酸粒细胞的高结合亲和力(绿色染色),也鉴定了嗜酸粒细胞。用Hoechst 33342染色细胞核(蓝色染色)。在赛季前的活检中,ECP免疫反应性主要分布在嗜酸性粒细胞内(a)。b)该组织区域的特征是,固有层组织(Lp)中存在广泛的细胞外ECP免疫反应性(Ep)。比例尺(a和b) = 80µm。gydF4y2Ba
在季节性花粉曝光关联,脱粒的程度增大到平均值±gydF4y2BaSDgydF4y2Ba87±1.8%的颗粒改变(p<0.01),在许多嗜酸性粒细胞中,每个颗粒都表现出蛋白丢失的迹象。因此,在花粉季节,只观察到嗜酸性粒细胞出现颗粒含量严重到完全丧失的迹象。与花粉季节前的组织嗜酸性粒细胞相比,广泛参与PMD的季节性组织嗜酸性粒细胞也含有更多的小分泌颗粒。有显著相关性的PMD指数和水平ECP的组胺灌洗液体(ρ= 0.629,p < 0.05),以及组织嗜酸性粒细胞数之间的ECP水平这些灌洗(ρ= 0.637,p < 0.05)。除此之外,ECP的灌洗液水平与本研究检测的嗜酸性粒细胞特征无相关性(表1)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
不同指标之间的相关性(ρ)嗜酸性粒细胞的存在/活动gydF4y2Ba
一般情况下,上皮细胞层以及之前或期间花粉季节保存。然而,在本赛季期间获得活检的几个分散的地区,被发现的斑片状上皮损伤和修复的迹象。在这些区域中上皮变化包括减小的上皮厚度和上皮化生的发生与低分化上皮细胞gydF4y2Ba23gydF4y2Ba。Interestingly, eosinophils involved in extensive PMD and ECL abounded in these areas (fig. 4h⇑gydF4y2Ba我)。gydF4y2Ba
嗜酸细胞阳离子蛋白的细胞外沉积gydF4y2Ba
嗜酸性粒细胞颗粒蛋白的细胞外组织沉积在低温部分由ECP用于免疫组织化学染色进行了评估。Prior to the pollen season, no or weak extracellular immunoreactivity was detected in tissue regions closely surrounding the eosinophils (fig. 6a⇑gydF4y2Ba)。In contrast, during the allergen season, areas of weak-to-moderate ECP staining were complemented with regions displaying intense extracellular staining of ECP (fig. 6b⇑gydF4y2Ba)。在深入染区偶尔也发生在检测到只有少数嗜酸性粒细胞组织区域。gydF4y2Ba
嗜酸性细胞溶解、胞外增生和细胞凋亡gydF4y2Ba
嗜酸性粒细胞的细胞溶解很少存在于变应原暴露之前获得活检嗜酸性粒细胞中观察到。During the pollen season, there was a clear, although not statistically significant, trend towards an increased proportion of cytolytic eosinophils, characterised by ruptured cell membrane, chromatolysis, and extracellular release of granules with retained membrane area (inset of fig. 4h⇑gydF4y2Ba,我);23.1±5.6%的组织嗜酸性粒细胞在花粉季节表现出细胞溶解的超微结构特征,而在花粉季节前为5.5±5.4%。利用目前详细的TEM分析,在季节性变应原暴露之前或期间,未检测到具有典型的细胞凋亡或胞吐超微结构特征的嗜酸性粒细胞。gydF4y2Ba
症状和嗜酸性粒细胞指数gydF4y2Ba
本研究材料允许探索变应性鼻炎症状与不同的嗜酸性粒细胞活性指标之间的潜在相关性。因此,这些症状与盐水洗胃的ECP水平(ρ= 0.22,p < 0.05),以及组胺灌洗(ρ= 0.52,p < 0.0001)。此外,这些症状与嗜酸性粒细胞数量(ρ= 0.59,p < 0.001)和PMD指数(ρ= 0.73,p < 0.01)。gydF4y2Ba
讨论gydF4y2Ba
通过详细的超微结构分析,本研究首次证实了有症状的季节性变应性鼻炎前后组织嗜酸性粒细胞的脱颗粒状态。目前的数据显示,嗜酸性粒细胞已经存在,并且在本病的非症状基线条件下具有“温和的”脱颗粒表型。此外,在症状诱导的季节变应原暴露期间,不仅嗜酸性粒细胞数量显著增加,而且脱颗粒状态也显著增加,几乎每一个嗜酸性粒细胞颗粒都表现出大量蛋白质丢失的迹象。这一超微结构图像是补充了增加出现的组织区域与强烈的免疫反应活性的ECP和增加的粘膜输出ECP。因此,在活动性变应性鼻炎期间,组织嗜酸性粒细胞的增加和广泛的脱颗粒作用的结合似乎会在靶组织中产生大量的嗜酸性粒细胞颗粒产物的细胞外沉积。gydF4y2Ba
能够识别和量化脱粒的不同模式的唯一可用的方法是通过TEM超微结构分析,即详细显示个别嗜酸性粒细胞脱颗粒状态的技术gydF4y2Ba17gydF4y2Ba,gydF4y2Ba18gydF4y2Ba。在这些详细分析的基础上,作者提出了目前主要脱颗粒模式的定量方法gydF4y2Ba体内gydF4y2Ba(gydF4y2Ba即。gydF4y2BaPMD与嗜酸性粒细胞溶解)gydF4y2Ba10gydF4y2Ba。至于PMD,在这项研究中计算出的PMD指数定义为显示蛋白释放的形态迹象颗粒的百分比。值得注意的是,PMD中过敏原暴露与颗粒的外观与芯和基质隔室比观察到的之前的季节更显着损失相关观察。因此,看来,在本研究中,在花粉季节蛋白释放,实际增长甚至可能比由PMD指数分析表明更大。有人建议,在PMD本季节性增加与嗜酸性粒细胞数的7倍(约三倍),一起,导致了在花粉季节观察到嗜酸性粒细胞产物的显着增加的组织沉积。gydF4y2Ba
以前对季节性变应性鼻炎患者的活检研究表明,即使在非季节性条件下,与健康的非特应性个体相比,鼻组织嗜酸性粒细胞的数量也可能增加gydF4y2Ba24gydF4y2Ba。目前的研究证实,适度的基线嗜酸细胞增多症的发生,并进一步表明,这些嗜酸性粒细胞往往是脱粒表型(脱颗粒比有症状患者在本赛季不太明显)。然而,一些事实表明,淡季的嗜酸性粒细胞的功能做一个适当的基准相比,代表真正的脱颗粒,例如由循环血液嗜酸性粒细胞为代表。因此,使用本定量电子显微镜的方法,最近已经证明,嗜酸性粒细胞的血液检查之前或期间花粉季节缺乏在本研究中观察到的颗粒的改变的类型gydF4y2Ba25gydF4y2Ba。另外,在细胞质中丰富的小囊泡的发生,如在本研究中的季节之前观察到的,已知是与正在进行的脱颗粒相关联的gydF4y2Ba18gydF4y2Ba。因此,即使在季节性鼻炎症状出现之前,嗜酸性粒细胞到达气道组织后也会出现一些脱颗粒现象。gydF4y2Ba
鉴于目前关于嗜酸性粒细胞致病作用的争论gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba26gydF4y2Ba,gydF4y2Ba27gydF4y2Ba,为了表明嗜酸性粒细胞参与疾病过程的可能性,建议嗜酸性粒细胞存在的证据可能必须与脱颗粒的数据相补充。一致认为,目前的嗜酸性粒细胞PMD指数与鼻粘膜中的嗜酸性粒细胞数量无关。同样,不能仅仅因为嗜酸性组织发炎就认为是理所当然的。因此,最近的研究表明,不同的嗜酸性条件在脱颗粒水平上具有明显的异质性gydF4y2Ba8gydF4y2Ba。例如,活性溃疡性结肠炎或克罗恩氏病在结肠粘膜进行嗜曙红细胞增多和严重的炎症,但组织嗜酸性粒细胞可显示脱粒小迹象。几乎没有明显的脱粒组织嗜酸性粒细胞也可能在哮喘和鼻息肉,进一步出现在个体之间脱颗粒较大的差异来表征两个条件中。在人组织中嗜酸性粒细胞显示异质性可能并不令人意外的事实。例如,除了是防御效应细胞(gydF4y2Ba即。gydF4y2Ba释放ofdirect细胞毒性分子),嗜酸性粒细胞还可以充当免疫调节和抗原呈递细胞gydF4y2Ba28gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba31gydF4y2Ba。此外,嗜酸性粒细胞可通过其释放的生长因子,如转化生长因子β,促进组织重塑和修复能力gydF4y2Ba32gydF4y2Ba,gydF4y2Ba33gydF4y2Ba。在这种情况下,这是值得注意的抗IL-5的治疗,虽然没有显著改善哮喘症状,看上去有气道重建参数的影响gydF4y2Ba34gydF4y2Ba。前面提到的异质性嗜酸性粒细胞上的作用,研究和评价抗嗜酸性药物强调的不一致的问题。重要的是,本发明的发现,与在患病组织嗜酸性粒细胞的存在和脱粒的状态之前的数据一起,表明过敏性鼻炎可以表现出作为关于一个广泛的嗜酸性粒细胞脱颗粒例外一致性gydF4y2Ba35gydF4y2Ba,gydF4y2Ba36gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
目前的研究已经证实,增加α的鼻腔灌洗液水平gydF4y2Ba2gydF4y2Ba-大球蛋白和ECP分别反映血浆渗出和嗜酸性粒细胞活性增加,是季节性变应原暴露时变应性鼻炎的特征gydF4y2Ba37gydF4y2Ba。与以前的意见,进一步的协议,也有这两个标记的管腔水平之间的相关性显著。α的共现gydF4y2Ba2gydF4y2Ba-粘膜表面的大球蛋白和ECP支持了目前的假设,即血浆渗出过程将ECP等自由组织分子运输到气道腔内gydF4y2Ba11gydF4y2Ba,gydF4y2Ba38gydF4y2Ba。因此,在血浆外渗反应中,存在一个单向(组织到腔)的血浆大流量,其中包含多种结合蛋白,有助于有效地冲洗气道粘膜的细胞外组织空间gydF4y2Ba11gydF4y2Ba,gydF4y2Ba38gydF4y2Ba。血浆外渗将ECP移入鼻腔的能力也可从目前的观察中得到提示,即在组胺刺激时记录的季节性ECP水平较高,尽管这些灌洗是在盐水灌洗之后直接进行的,而盐水灌洗可能已清除了任何累积的管腔ECP。因此,在组胺刺激/灌洗联合盐水灌洗后记录的管腔ECP水平可能反映了组织中游离ECP的水平。事实上,在目前的研究中,只有在组胺挑战时(在花粉季节之前和期间)记录的ECP灌洗液水平与PMD指数显著相关。有趣的是,使用联合组胺挑战/灌洗液的一个潜在影响是产生腔内样本,比单独的盐水灌洗液更好地反映气道粘膜的细胞外分子环境。试析性地,ECP在这样的洗液中也可能比组织嗜酸细胞数更好地反映嗜酸细胞的活性。gydF4y2Ba
综上所述,本研究最初表明,适度的脱粒的嗜酸性粒细胞中已经存在的期间,季节性过敏性鼻炎无症状基准条件鼻粘膜。在天然变应原暴露,从个人嗜酸性粒细胞脱颗粒活性显着增加,这在与组织嗜酸性粒细胞的升高数字的组合,显着地增加释放到靶组织颗粒蛋白的量。此外,本研究中亮点组胺诱导的急性血浆外渗和伴随的管腔灌洗,丰富相关组织介体,如嗜酸细胞阳离子蛋白的灌洗内容的潜在有用的方法。最后,建议季节性过敏性鼻炎可能是嗜酸性粒细胞的潜在致病作用的研究和早期测试抗嗜酸性药物尤其适用条件。gydF4y2Ba
- 收到了gydF4y2Ba2003年12月3日。gydF4y2Ba
- 接受gydF4y2Ba2004年7月5日。gydF4y2Ba
- ©ERS杂志有限公司gydF4y2Ba
参考文献gydF4y2Ba
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