文摘
慢性阻塞性肺疾病(COPD)的特点是吸入粒子一个过度的炎症反应,主要是吸烟。尽管炎症存在于所有的吸烟者,只占他们发展的慢性阻塞性肺病。淋巴细胞是重要的效应和监管细胞积极参与COPD的炎症反应。他们构成了t细胞受体(TCR) -αβ(CD4 +和CD8 +)和TCR-γδ淋巴细胞)。后者代表总t细胞数量的一小部分,但扮演一个关键的角色在组织修复和粘膜内稳态。
调查TCR-αβ(CD4 +和CD8 +)在慢性阻塞性肺病TCR-γδt淋巴球,目前作者决定,通过流式细胞仪,两个亚种群的分布在外周血和支气管肺泡灌洗(BAL)从COPD患者获得的样本,吸烟者与正常肺功能和不吸烟者。
目前的研究发现:1)CD4 +和CD8 +淋巴细胞的分布在血液和BAL相似的在所有三组;2)与不吸烟者相比,γδt淋巴球显著增加在吸烟者肺功能与保存;和3)这在COPD患者反应迟钝。
这些结果强调了小说,可能相关,在慢性阻塞性肺疾病发病机理。
慢性阻塞性肺疾病(COPD)的特点是明显的气管和肺实质炎症反应吸入粒子,主要是吸烟1。炎症通常是出现在吸烟者的肺,但仍然了解甚少的原因,只有一个百分比的气流限制发展2。
t淋巴球关键炎症效应和监管细胞参与炎症反应的慢性阻塞性肺病3。细胞表面,T淋巴球表达T细胞受体(TCR),承认肽在槽的主要组织相容性复合体抗原递呈细胞,CD3复杂,启动细胞内信号转导通路4。t细胞分为TCR-αβ和TCR-γδ根据细胞表达。前t细胞组成∼95%人口,可以划分为两种主要的亚种,包括:1)CD4 + t淋巴球,,在正常情况下组成TCR-αβ人口总数的60 - 70%,cytokine-secreting辅助细胞,和2)CD8 + t淋巴球,它代表了30 - 40%,细胞毒性杀伤细胞。相比之下,TCR-γδ淋巴细胞只占∼5%的总t细胞亚群。然而,他们扮演着一个关键角色,粘膜内稳态和组织损伤修复反应5。此外,那些coexpress CD8γδt细胞受体有显著的抗炎作用,有助于抑制细胞介导的免疫反应6。
先前的研究已经报道t淋巴球增多在COPD患者的肺实质和支气管组织,主要是CD8 +(因此与低CD4 +: CD8 +比率)7- - - - - -9。相比之下,更了解γδt淋巴球在慢性阻塞性肺病的角色。然而,鉴于其重要作用上皮修复10,有可能是异常的监管可以导致疾病的发病机理。此外,是否异常早期分布代表局部炎症事件或反映系统性异常尚不清楚11,但值得注意的是,CD4 +, CD8 +循环淋巴细胞比率似乎是由基因决定的12。因此,它是可能的,吸烟者的肺与内在低CD4 + CD8 +比率更容易受到吸烟的危害。Costabel等。13之前调查这个问题在支气管肺泡灌洗(BAL)和外周血样本的吸烟者(有或没有慢性粘液生产)。然而,不幸的是,慢性阻塞性肺病吸烟者没有研究。
为了更好地描述不同的早期亚种群内的百分比是慢性阻塞性肺病的炎症过程,本研究试图比较循环的分布和肺TCR-αβTCR-γδt淋巴球在COPD患者中,吸烟者与正常肺功能和非吸烟者。
方法
人口和道德
所有参与者所需的支气管镜检查的临床评价孤立肺结节或咯血,充分了解后,给他们的书面同意的性质、特征、研究的风险和潜在的好处,以前经当地伦理委员会批准,医院的儿子Dureta,西班牙马洛卡帕尔马。慢性阻塞性肺病患者临床稳定并没有恶化在过去3个月。他们都被吸入支气管扩张剂治疗。六个患者同时接受吸入类固醇,但口服类固醇疗法。主题与过敏性疾病、过敏性鼻炎和哮喘被排除在外。为了避免任何潜在的急性影响吸烟,主动吸烟者支气管镜检查前12 h避免吸烟。呼出一氧化碳浓度< 10 ppm在所有科目。
支气管肺泡灌洗液和血液样本
支气管镜检查是执行灵活fibreoptic支气管镜(宾得15 v;宾得,日本东京)。根据局部利多卡因,BAL是由灌输八25 ml整除的无菌生理盐水没有肺下叶的一个肺段结节。液体回收过滤,水洗两次PBS和resuspended 106细胞·毫升1在4°C rpmi - 1640中。血液样本采集前由外周静脉穿刺支气管镜检查。
流式细胞术
BAL和血液样本被孵化的联合anti-CD4异硫氰酸荧光素(FITC) anti-CD8藻红蛋白(PE)和anti-CD3 Phycoerythrin-Cyanin 5 (PC5)或anti-CD8 FITC, anti-TCR-γδPE和anti-CD3 PC5共轭单克隆抗体(库尔特Immunotech、Izasa、西班牙)在黑暗中在室温下15分钟。然后,2毫升的赖氨酸溶液(Becton Dickinson,马德里,西班牙)补充道,和细胞被洗resuspended PBS。分析是在一个史诗XL流式细胞分析仪使用Expo32软件(库尔特Immunotech)。的百分比CD4 +、CD8 +γδ和γδCD8 +被称为淋巴细胞(CD3 +细胞)的总量控制与CD3点阴谋。
统计分析
单向方差分析与Bonferroni对比是用来比较组间差异。被认为具有统计显著性p值< 0.05。
结果
临床和功能研究
表1⇓显示了三组的主要临床和功能特性进行了研究。慢性阻塞性肺病患者略比其他两组。COPD患者的吸烟史,吸烟与正常肺功能是相似的。COPD患者表现出温和的气流阻塞,而在其他两组肺功能正常。
循环和肺αβ淋巴细胞)
在血液中,CD4 +的百分比(60.0±4.7,57.1±2.7和60.2±3.1%;图1一个⇓)或CD8 + t淋巴球(35.6±4.6,35.2±2.6和34.6±3.0%;图1 b⇓)在慢性阻塞性肺病患者相似,分别与正常肺功能和从不吸烟,吸烟者。落下帷幕,在目前的作者观察到的趋势较低层次的CD4 + t细胞在吸烟者(有或没有慢性阻塞性肺病;分别为50.6±3.5,50.7±4.3)比不吸烟者(65.2±4.9%;图1 c⇓),以及相应的趋势值更高的CD8 + t细胞在慢性阻塞性肺病患者和吸烟者与正常肺功能(分别为42.5±2.9,41.2±4.6%)比不吸烟者(30.9±4.7%;图1 d⇓)。然而,这些差异没有达到统计学意义。
![图1 -](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/25/3/441/F1.medium.gif)
比例的t细胞受体(TCR) -αβ外周血中CD4 +和CD8 +淋巴细胞(a和b)和支气管肺泡灌洗(c和d)样品在不吸烟者,吸烟与正常肺功能和慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者。单杠代表平均值。组之间的差异没有达到统计学意义。
循环和肺γδ淋巴细胞)
循环的百分比γδt淋巴球在吸烟者高与正常肺功能(5.0±0.8%)比不吸烟者(3.2±0.8%)或慢性阻塞性肺病患者(2.4±0.4%,p < 0.05;图2一个⇓)。相比之下,双积极γδCD8 +没有不同群体之间(p = 0.2)(图2 b⇓)。在落下帷幕,吸烟者与正常肺功能也显示的一个重要upregulationγδt淋巴球与不吸烟者相比(8.2±1.0与1.4±0.3%,p < 0.001;图2 c⇓)。有趣的是,这种反应是慢性阻塞性肺病患者的钝化(3.6±0.6%,p < 0.001)。γδCD8 +双积极族群也高于吸烟者与正常肺功能(3.6±0.8%)比在慢性阻塞性肺病患者(0.4±0.1%,p < 0.001)或不吸烟者(0.5±0.2%,p < 0.01;图2 d⇓)。这些结果不变如果COPD患者接受治疗吸入性类固醇(n = 6)被排除在分析(数据未显示)。
![图2 -](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/25/3/441/F2.medium.gif)
比例的t细胞受体(TCR) -γδ-γδ在外周血CD8 +淋巴细胞(a和b)和支气管肺泡灌洗(c和d)样品在不吸烟者,吸烟与正常肺功能和慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者。单杠代表平均值。*:p < 0.05;* *:p < 0.01;* * *:p < 0.001。不显示,组间差异没有统计学意义。
图3一⇓显示肺γδt细胞的比例在COPD患者和吸烟者与正常肺功能,根据他们吸烟状态(当前分组与烟)。吸烟者与正常肺功能显示的一个重要upregulationγδt细胞相比,烟与正常肺功能(10.5±0.9与分别为5.4±1.6,;p < 0.01)。这表明,主动吸烟诱发生理反应的特点是肺γδt淋巴球upregulation。有趣的是,这种反应是迟钝的吸烟者与慢性阻塞性肺病(3.2±1.2%,p < 0.001)。也发现了类似的结果,当γδCD8 +分组人口评估(图3 b⇓),他们的比例高于吸烟者与正常肺功能(5.3±1.1%)比人与正常肺功能(1.3±0.4,p < 0.001)或吸烟者与慢性阻塞性肺病(0.5±0.2,p < 0.001)。
![图3 -](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/25/3/441/F3.medium.gif)
比例的t细胞受体(TCR) -γδ(a)和-γδCD8 + t细胞(b)在支气管肺泡灌洗液样品在不吸烟者,当前(•)和人(○)与正常肺功能或慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者。单杠代表平均值。* *:p < 0.01;* * *:p < 0.001。不显示,组间差异没有统计学意义。
讨论
本研究调查潜在异常的分布不同的亚种在外周血t淋巴球,BAL样本在COPD患者中,相比与正常肺功能与吸烟者和不吸烟者。当前作者并没有发现任何显著差异的分布αβ淋巴细胞(CD4 +和CD8 +)之间的团体,在外周血或BAL样品(图。1⇑)。相比之下,一个非常重要的upregulationγδt淋巴球在吸烟者保留肺功能(尤其是在外周血和,BAL样本)观察(图2所示⇑)。这个反应是显著减少吸烟者慢性阻塞性肺病,鉴于γδt淋巴球在组织修复的重要作用和炎症控制,确定了一部小说,潜在的相关疾病的机制。
αβt淋巴球
先前的研究已经报道在外围的CD8 + t淋巴球的百分比增加8和中央航空公司9,以及肺实质和肺血管7慢性阻塞性肺病的患者。落下帷幕,在目前的作者没有发现显著差异在慢性阻塞性肺病患者CD8 +淋巴细胞的分布,吸烟者与正常肺功能,从不吸烟者,尽管吸烟者(有无慢性阻塞性肺病)显示一个倾向更高CD8 +值(图1 d⇑)。差异对先前的研究7- - - - - -9可能与不同采样地点。例如,众所周知,中性粒细胞的浓度增加BAL的COPD患者样本,同时他们在组织样本很少被发现16。
只有少数研究调查的分布在外周血CD4 +和CD8 + t淋巴球的慢性阻塞性肺病患者。德容等。17没有发现差异吸烟者慢性阻塞性肺病有或没有。最近,金等。18也发现了类似的百分比的CD8 + t细胞在慢性阻塞性肺病患者和健康的吸烟者。呈现的结果同意这两个以前的研究1(无花果⇑和c),这表明的起源异常t淋巴球浸润在COPD患者的肺是当地而不是系统性的事件。
γδt淋巴球
γδt淋巴球扮演重要的角色在组织修复和粘膜内稳态5。在慢性阻塞性肺病对其潜在的作用,除了他们组织损伤的一个重要组成部分和改造19。一项研究由里士满等。20.报道γδt细胞数量增加支气管腺体的吸烟者与不吸烟者相比。同样的主要等。21发现增加的百分比γδt淋巴球在吸烟者的肺实质。最后,Ekberg-Jansson等。22评估γδt细胞在外周血和BAL样本,并发现了一个更高级别的趋势γδt细胞在吸烟者肺功能正常。目前的研究证实,与不吸烟者相比,吸烟者与正常肺功能显示出突出的upregulationγδ在外周血淋巴细胞),特别是在落下帷幕。它还显示,这只发生在主动吸烟者3(无花果⇑和b)。鉴于这个早期族群的相关性在组织内稳态,这种观察是兼容的生理反应,旨在保护或修复肺部当前吸烟造成的损伤。的具体分子机制导致这upregulationγδt淋巴球在吸烟者是未知的。当前作者推测,一些组件的直接刺激效应(s)的烟和/或所谓的“危险信号”的存在产生的肺实质破坏可能导致它。
相比之下,本研究首次表明,慢性阻塞性肺病患者无法做出这种反应(无花果2⇑和3⇑)。这可能有两个重要的致病性的影响。首先,它可以危及他们的肺实质能力修复,如γδt淋巴球淘汰赛的老鼠表现出明显延迟伤口修复和re-epithelisation由于缺乏生产的角化细胞生长因子和其他细胞因子10,23,24。其次,它可能促进炎症反应的延续25,26。这特别适用于γδ积极CD8 + t细胞,在方差γδCD8−细胞,可以抑制效应t细胞的组织损伤介导6。
两个潜在的限制目前的研究值得讨论。首先,COPD患者略比其他两组(表1所示⇑)。先前的研究已经表明,循环γδt淋巴球减少的数量随着年龄的增长27,28。没有可用的信息老化的影响γδt淋巴球在肺部。因此,COPD患者略旧的事实不容忽视,这可能影响他们的结果(图2所示⇑)。然而,相信这个因素无关,不吸烟者和吸烟者的比较与正常肺功能(图2所示⇑),因为这两组年龄(表1匹配的⇑)。其次,COPD患者接受药物治疗,包括类固醇和支气管扩张剂。正如前面所讨论的,前者似乎没有影响γδt淋巴球在这些病人的数量。相比之下,支气管扩张剂的潜在影响这些细胞不能评估,因为所有的病人在研究接收它们,最好的作者的知识,在文献中没有任何信息关于这个特定的点。
总之,目前的研究发现,吸烟者与保护肺功能显示突出upregulationγδ和γδCD8 +淋巴细胞在支气管肺泡灌洗液,这种反应是迟钝了慢性阻塞性肺疾病者。是否这就构成了一个以前未报告的致病因素,促进了慢性阻塞性肺疾病的发展在某些吸烟者或,或者,是否疾病过程的结果贡献对放大由吸烟引起的炎症反应和/或这可以防止有效的组织修复,虽然这些理论无法确定的结果。然而,在两种情况下,本研究的结果确定一部小说,潜在的疾病相关机制值得进一步调查。
确认
本研究支持,部分由洋底de Investigaciones疗养地(FIS 02/0986和红色Respira-RTIC 03/11C),皇家社会诺拉德Patologia del Aparato Respiratorio,治理Balear和Asociacio Balear / l 'estudi de Malalties呼吸。作者要感谢c·桑托斯的技术援助。
- 收到了2004年6月10日。
- 接受2004年11月28日。
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