摘要GydF4y2Ba
恶性间皮瘤是一种患有令人沮丧的癌症。本研究的目的是解决免疫系统,肿瘤微环境和间皮瘤潜在免疫抑制的作用。GydF4y2Ba
80种细胞因子在间皮瘤细胞系上清液和原患者胸腔积液中的表达谱。免疫组化检测免疫效应细胞的内流。GydF4y2Ba
在上清和胸腔积液中均可检测到血管生成素、血管内皮生长因子、转化生长因子-β、上皮中性粒细胞活化蛋白-78等参与免疫抑制、血管生成和血浆外渗的蛋白。周围基质和/或浸润细胞是肝细胞生长因子、巨噬细胞炎症蛋白(MIP)-1δ、MIP-3α、中性粒细胞激活肽-2和肺和激活调节的趋化因子最可能的来源,这些因子可导致白细胞浸润和激活。在人类间皮瘤活检中,CD4+和CD8+ t淋巴细胞和巨噬细胞大量涌入,但没有树突状细胞。进一步证明,人间皮瘤组织中含有大量Foxp3+CD4+CD25+调节性t细胞。当这些CD25+调节性t细胞在GydF4y2Ba在活的有机体内GydF4y2Ba小鼠模型,存活率增加。GydF4y2Ba
间皮瘤被免疫效应细胞浸润,但也含有抑制有效免疫反应的细胞因子和调节性t细胞。间皮瘤的免疫治疗与消除或控制调节性t细胞的药物结合可能更有效。GydF4y2Ba
恶性间皮瘤(MM)是一种高度侵袭性的肿瘤,最常见于有石棉暴露史的患者。从接触石棉纤维到疾病最初症状之间有20-40年的潜伏期。发病后的中位生存时间为9-12个月,预后较差。到目前为止,MM还没有标准的治疗方法。联合治疗方式,如胸膜外全肺切除术后放疗,导致高局部复发率和可疑的生存获益GydF4y2Ba1GydF4y2Ba.由于MM是一种弱的免疫原性肿瘤,不同的研究小组尝试使用细胞因子或佐剂来进行免疫治疗,以提高肿瘤的免疫能力,取得了不同的成功GydF4y2Ba1GydF4y2Ba.在之前的一项研究中,作者评估了肿瘤裂解液负载抗原呈递树突状细胞(DCs)的治疗效果GydF4y2Bai.p。GydF4y2Ba用小鼠间皮瘤细胞系AB1攻击肿瘤攻击。用肿瘤裂解物或外泌体脉冲的DC有效诱导保护性细胞毒性CD8 T细胞应答和增加存活,即使在肿瘤植入后给出GydF4y2Ba2GydF4y2Ba.在这些研究中,在肿瘤发展早期注射DC治疗有更好的结果,表明肿瘤负荷在生存中起重要作用。虽然间皮瘤诱导和进展的确切序列仍不清楚,但间皮瘤内外发生的一系列缺陷可能参与了肿瘤逃脱免疫破坏的过程。根据免疫监测理论,大型肿瘤通过下调主要组织相容性复合体(MHC) I类或改变肿瘤抗原的表达而逃避免疫识别,从而逃脱CD8细胞的细胞毒性杀伤GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba.这一理论最近受到了挑战,因为小鼠自发产生的肿瘤仍然是免疫原性的,相反,通过诱导肿瘤浸润淋巴细胞的无能量而逃避免疫识别GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba或者通过吸引抑制抗肿瘤反应的调节性t细胞(Treg)。现在已经确定,某些肿瘤和周围的基质产生一个免疫抑制微环境来抑制抗肿瘤免疫反应的效应臂(肿瘤内的细胞毒性t淋巴细胞反应)和免疫反应的诱导臂,GydF4y2BaIE。GydF4y2Ba抗原呈递树突状细胞诱导细胞毒性t淋巴细胞应答的潜力。GydF4y2Ba
本研究采用非偏见的方法,使用蛋白质组学平台,并确定在所产生的群体细胞系中存在80个细胞因子和趋化因子的阵列的存在和产生细胞系的原始患者的胸膜液。这允许作者研究肿瘤衍生的因素,并且衍生自渗透免疫细胞或周围的基质。用CD4 +和CD8 + T细胞和巨噬细胞严重渗透肿瘤,但缺乏DC。令人惊讶的是,发现,发现前面显示在其他癌症模型中促进肿瘤进展的Foxp3 + CD25 + Treg。去除这些细胞导致在可移植的间皮瘤模型中增加存活。这些发现表明MM逃离免疫识别的多个水平。GydF4y2Ba
方法GydF4y2Ba
分析患者材料和细胞系的制备GydF4y2Ba
在获得知情同意后,从组织学证实有大量胸腔积液的间皮瘤患者(n = 6)中收集胸膜液。在大多数病例中,胸膜液排出的指征是劳力性呼吸困难缓解。所有患者均为67 - 88岁的男性,接受了最佳的支持治疗。胸腔穿刺采用细针穿刺入胸腔,无菌管收集,不使用抗凝剂。3000 ×离心从胸腔积液中取出胸膜细胞GydF4y2BaGGydF4y2Ba在4℃下20分钟,将上清液在-80℃下储存在等分试样中。从这些胸腔积液产生四种长期间皮瘤细胞系,并如前所述广泛表征GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba.这包括确定细胞DNA含量,免疫组织化学,肿瘤性GydF4y2Ba在活的有机体内GydF4y2Ba、病毒和/或细菌污染、核型分型和人类白细胞抗原分型。细胞系长期培养(>50代)后用于上清检测。这些患者的胸膜液仍可用于分析。GydF4y2Ba
在另一组患者中(n = 4),通过内科胸腔镜获得肿瘤活检并进行免疫组织学处理。GydF4y2Ba
蛋白质组学平台分析细胞因子和趋化因子GydF4y2Ba
用于基于抗体的细胞因子阵列系统(Raybiotech,Inc.,Norcross,Ga,USA)用于确定间皮瘤细胞系(n = 4)上清液中的细胞因子表达曲线和相应的患者的胸腔积液(n = 6)。细胞系在T175培养瓶中生长至80%汇合。然后培养基含有含有1%胎牛血清的12ml RPMI,并在37℃温育。第二天,收集上清液并以3,000×离心20分钟GydF4y2BaGGydF4y2Ba移除细胞。样品采用Centricon YM3色谱柱(Millipore, Billerica, MA, USA)进行浓缩。以与细胞上清相同的方法制备上述培养基12 mL作为阴性对照。在这些浓缩样品中,1 mL应用于RayBio膜(人细胞因子阵列V;表1GydF4y2Ba⇓GydF4y2Ba).检测是根据制造商的协议进行的。通过两个独立观察者(J.P.J.J.J.J.J.J.J.J.J.J.J.J.J.J.J.J.J.J.J.J.J.J.J.J.jans和A.Semmes的分组进行细胞因子表达的定量使用六个斑点的标准等级,其密度增加(得分0至5;着陆灯(阳性对照)得分为4)。GydF4y2Ba
肿瘤活检的免疫组织学GydF4y2Ba
肿瘤活检采用医用胸腔镜,并嵌入Tissue-Tek II最佳切割温度介质(Miles, Naperville, IL, USA),快速冷冻并在-80°C保存。在HM-560低温恒温器(Microm,海德堡,德国)上切割组织切片(6 μm),使用抗体进行免疫染色(表2)GydF4y2Ba⇓GydF4y2Ba).抗体结合采用免疫碱性磷酸酶(AP)抗碱性磷酸酶(apap)法(DAKO, Glostrup, Denmark)检测。Naphtol-AS-MX-phosphate·毫升(0.30毫克GydF4y2Ba-1GydF4y2Ba;Sigma-Aldrich Chemie B.v.,Zwijndrecht,荷兰)和新的葡萄酒(160 mg·mlGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba在2米HCL;Chroma-Gesellschaft,Köngen,德国)用作基质。使用蛋白质浓度匹配的非重形单克隆抗体和PBS检查抗体的特异性。Double staining of Foxp3 (rat immunoglobulin (Ig)G2a) and CD3 or CD25 (both mouse IgG1) was performed using AP-conjugated goat anti-rat (Sigma-Aldrich Chemie B.V.) and rat APAAP (DAKO) followed by horseradish peroxidase conjugated goat anti-mouse IgG1 (Southern Biotechnology Associates, Birmingham, AL, USA). Naphtol-AS-MX-phosphate and 1 mM Fast Blue substrate were used as substrate for AP and NovaRed was used as substrate for horseradish peroxidise, according to the manufacturer's instructions (Vector, Burlingame, CA, USA). Alexa Fluor 647 labelled anti-human CD4 and fluorescein isothiocyanate conjugated CD25 (both BD Biosciences, San Jose, CA, USA) were used at a dilution of 1:100 and 1:20, respectively. Signals were captured on a Zeiss confocal laser-scanning microscope (LSM510NLO; Carl Zeiss B.V., Sliedrecht, the Netherlands).
小鼠间皮瘤后肿瘤生长GydF4y2Ba在活的有机体内GydF4y2BaBALB / C小鼠中CD4 + CD25 + T细胞的耗尽GydF4y2Ba
女性6-10周龄Balb / C(H-2D)小鼠(Harlan,Zeist,荷兰)被安置在erasmus mc(荷兰鹿特丹)的动物护理设施的无病原条件下。实验由当地的动物福利伦理委员会(Areasmus大学动物专家,鹿特丹,荷兰)批准,并遵守英国癌症研究委员会实验肿瘤福利福利指导方针。AB1细胞系,鼠标间皮瘤细胞系,由B.S.S.罗宾逊(西澳大利亚大学医学与药理学院,查尔斯爵士医院,珀斯,澳大利亚)。为了GydF4y2Ba在活的有机体内GydF4y2Ba每只小鼠(n = 12)在肿瘤细胞接种前25天腹腔内清除CD4+CD25+ t细胞,0.5 mL抗CD25抗体(PC61)腹水(由G. Oldenhove提供,Université Libre de Bruxelles, Brussels, Belgium)。根据Lowenthal的描述,通过蛋白A-Sepharose 4B亲和层析纯化海鞘液GydF4y2Baet al。GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba.作为对照组,作者使用0.5 mL PBS (n = 12)。第0天,对小鼠施以致死剂量0.5×10GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba有所肿瘤细胞。如前所述,测量肿瘤生长,体重,物理阱和存活率的发生2个月GydF4y2Ba2GydF4y2Ba.GydF4y2Ba
统计分析GydF4y2Ba
数据表示为平均值±GydF4y2BasdGydF4y2Ba.组间比较采用独立样本的Mann-Whitney u检验。双尾p值<0.05被认为是显著的。采用Kaplan-Meier生存曲线分析无肿瘤动物百分比数据,使用log-rank检验确定统计学意义。GydF4y2Ba
结果GydF4y2Ba
胸腔积液和细胞系上清液在细胞因子和趋化因子阵列上的表达谱GydF4y2Ba
基于抗体的细胞因子阵列系统(Raybiotech,Inc。)用于确定胸腔积液中的细胞因子表达谱(n = 6),也可以在衍生自相同患者的间皮瘤细胞系的上清液中(n = 4)。在阴性(中)对照中没有发现细胞因子表达。表3总结了胸腔积液中的细胞因子表达水平和间皮瘤细胞系的相应上清液GydF4y2Ba⇓GydF4y2Ba.在间皮瘤细胞株的积液和上清中均未检测到49种细胞因子。肝细胞生长因子(HGF)、巨噬细胞炎症蛋白(MIP)-1δ、MIP-3α、中性粒细胞活化肽(NAP)-2和肺和激活调节的趋化因子(PARC)只存在于胸腔积液中,而在间皮瘤细胞上清中未检测到(图1)GydF4y2Ba⇓GydF4y2Ba).因此,这些细胞因子可能通过基质细胞和/或炎性细胞在胸腔积液中产生和分泌。一些积液还表达了eotaxin-2,白细胞介素(IL)-12,瘦素,中胚层诱导因子(MIF)和oncostatinM的细胞因子水平。相反,间皮瘤细胞系的上清液含有高水平的生长相关的癌基因(GAG)和咆哮(对激活,正常的T细胞调节,表达和分泌)。这些蛋白质似乎主要被肿瘤细胞分泌,并且所示的存在量可以与肿瘤细胞的量相关。GydF4y2Ba
人间皮瘤肿瘤的细胞募集GydF4y2Ba
肿瘤细胞和周围基质的细胞因子和趋化因子的局部释放表明,循环血细胞的招募在肿瘤附近有白细胞浸润的积累。因此采用免疫组化技术来确定实体肿瘤组织中的炎症成分。间皮瘤肿瘤组织可以被认为是复杂的组织,由局部HBME-1阳性肿瘤区域组成,由间质和许多CD31+血管分隔(图2)GydF4y2Ba⇓GydF4y2Ba).尽管患者之间存在一些异质性,但白细胞浸润始终存在。巨噬细胞(CD68)和自然杀伤细胞(NK) (CD16)是炎症细胞浸润的主要组成部分。肿瘤细胞和宿主免疫t细胞(泛t (CD3), t辅助/诱导(CD4)和t抑制/细胞毒性淋巴细胞(CD8))之间的相互作用在间皮瘤标本的内部、边缘和间质中可见。然而,DCs(使用针对Langerin、fasin、S100、CD1a、BDCA2和CD209的抗体)、嗜酸性粒细胞(BMK-13)、肥大细胞(抗糜酶)、b细胞(CD24)和中性粒细胞(CD15)很少检测到(图3)GydF4y2Ba⇓GydF4y2Ba).GydF4y2Ba
可以基于CD4和CD25的表达来区分Treg,与转录因子Foxp3组合。通过荧光显微镜分析间皮瘤组织切片,用于CD4 + CD25 +双阳性细胞的表型证据。在肿瘤区域CD4 + CD25 +的边缘处特别检测到T细胞(图4GGydF4y2Ba⇓GydF4y2Ba和h)。由Sakaguchi鉴定的转录因子Foxp3GydF4y2Baet al。GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba作为自然产生的CD4+CD25+ Treg细胞的标志,证实这些细胞在肿瘤附近存在(图4a)GydF4y2Ba⇓GydF4y2Ba).双染色显示Foxp3的表达与CD3密切相关(图4b)GydF4y2Ba⇓GydF4y2Ba)和CD25表达(图4CGydF4y2Ba⇓GydF4y2Ba和d)。GydF4y2Ba
效果GydF4y2Ba在活的有机体内GydF4y2BaCD4+CD25+ t细胞减少对肿瘤生长的影响GydF4y2Ba
在之前的研究中描述的间皮瘤小鼠模型GydF4y2Ba2GydF4y2Ba用于检测CD4+CD25+ t细胞耗竭对肿瘤进展的影响。初步研究表明,在BALB/c小鼠中,CD25的表达仅限于CD4+ t细胞,在血液、淋巴结和脾脏中占总细胞的一小部分(2-10%)。动力学研究表明,注射耗尽性抗体导致CD4+CD25+ t细胞的选择性损失≥30天,治疗后50天观察到人群的补充GydF4y2Ba8.GydF4y2Ba.目前的作者首先调查的影响GydF4y2Ba在活的有机体内GydF4y2Ba施用抗CD25腹水液对血液中的CD25 +群体,如流式细胞术透露。一块钱后GydF4y2Bai.p。GydF4y2Ba注射0.5 mL PC61腹水,25天后,该细胞在血液中的数量从3.5减少到1%(图5)GydF4y2Ba⇓GydF4y2Ba).GydF4y2Ba
在该方案中,注射了BALB / C小鼠GydF4y2Bai.p。GydF4y2BaPBS或PC61在肿瘤细胞接种前25天腹水液。在第0天,将所有小鼠注射GydF4y2Bai.p。GydF4y2Ba用致命剂量的0.5×10GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba有所肿瘤细胞。两组患者在6天后开始出现晚期症状(典型的是腹水的形成、毛发蓬乱或病情明显好转)(图6)GydF4y2Ba⇓GydF4y2Ba).对小鼠进行了广泛的尸检,结果总是显示腹膜腔内有实体瘤形成,少数病例伴有厚的、黄色染色的腹水。实体肿瘤的性质从遍布肠系膜和腹膜的众多小结节到单个大肿块不等。在40天内,PBS组的所有小鼠都显示出健康不良或明显肿瘤生长的迹象。使用抗cd25抗体将中位生存期从19天延长到33天。令人惊讶的是,12只小鼠中有5只(41%)接受了耗尽型抗体PC61的治疗,2个月后肿瘤仍然没有复发。然后将老鼠处死,检查肿瘤的生长情况。没有发现组织异常或肿瘤形成。GydF4y2Ba
讨论GydF4y2Ba
癌症,特别是间皮瘤,是一种慢性疾病。当间皮瘤发生临床上可见的20-40yrs时,在石棉暴露后,肿瘤细胞及其产物已经与其相互作用并影响宿主细胞以确保肿瘤的存活率。间皮细胞在其变得恶性方面的路径是未知的,并且可能对几个宿主因子,包括环境因素,多态性和敏感性基因的突变,年龄和免疫。肿瘤发展也取决于微环境中的因素。恶性细胞,基质细胞,细胞外基质组分,各种炎症细胞和一系列可溶解体之间的相互作用有助于肿瘤发育和进展。先进阶段病患者的间皮瘤肿瘤由癌细胞的不仅仅是癌细胞;它由复杂的细胞类型网络组成,包括包含血管和基质细胞的内皮细胞。许多免疫细胞类型环绕和渗透癌细胞区域,但肿瘤逃避免疫破坏。积累了癌细胞甚至可以招募并颠覆正常细胞类型以作为其肿瘤计划中的活跃合作者招募的证据GydF4y2Ba9.GydF4y2Ba.了解这些在肿瘤微环境水平发挥作用的多重因素可能有助于更好地理解和设计免疫治疗方案。因此,本文作者公正地观察了间皮瘤内存在的炎症细胞类型,以及间皮瘤细胞系产生的细胞因子和趋化因子,并在相应的胸膜液中存在。在目前作者的免疫组织学研究中,一个显著的观察是间皮瘤被许多免疫效应细胞严重浸润。炎症细胞主要由巨噬细胞、NK细胞和t淋巴细胞组成,包括t辅助/诱导细胞(CD4)和t抑制细胞/细胞毒性细胞(CD8)。不足为奇的是,目前的蛋白阵列显示在MM细胞系上清液和胸膜液中(干扰素诱导蛋白-10,MIF,单核细胞趋化蛋白-1,上皮中性粒细胞激活蛋白-78,MIP-1β, IL-8, GRO, RANTES)或仅在胸膜液中(MIP-1δ, MIP-3α, nap2, MIP-1β)产生许多趋化因子。和帕洛阿尔托研究中心(PARC))具有吸引这些细胞类型的潜力。GydF4y2Ba
巨噬细胞,T细胞和其他免疫细胞在间皮瘤活组织检查中的作用仍然未知。可能由肿瘤的微环境变化引起的流入,可以赞成炎症,血管生成和肿瘤生长,从而导致肿瘤进展。它也会对肿瘤生长产生负面影响;例如,巨噬细胞在非物质细胞肺癌(NSCLC)中存在巨噬细胞和结直肠癌中浸润的效应记忆T细胞的存在与增加的存活率有关GydF4y2Ba10.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba11.GydF4y2Ba.了解抗动脉醛免疫应答的结果,导致肿瘤进展或回归,各种细胞类型对结果的作用是对未来临床试验设计的重大。GydF4y2Ba
嗜酸性粒细胞、肥大细胞、b细胞和中性粒细胞很少被检测到。肥大细胞浸润及其在肿瘤胰岛中的密度已被描述为NSCLC中生存的预测因子GydF4y2Ba10.GydF4y2Ba.非小细胞肺癌和间皮瘤肥大细胞密度的差异可能是由于肿瘤的类型、分期、大小以及评估这些细胞的方法的差异造成的。威尔士GydF4y2Baet al。GydF4y2Ba10.GydF4y2Ba使用抗胰蛋白酶来检测所有肥大细胞,而本提交人染色的冠血酶+肥大细胞。在恶性乳腺肿瘤中也已经说明了胰蛋白酶和冠血酶之间的这种差异GydF4y2Ba12.GydF4y2Ba.临床随访数据比较人间皮瘤活检中凝乳酶+和胰酶+结合其他免疫细胞标志物可能揭示更多关于其预后意义的信息。GydF4y2Ba
与其他几种癌症类型一样,在肿瘤内部发现了许多免疫效应细胞,而肿瘤仍然没有被排斥。当前研究的目的之一是确定间皮瘤和周围基质细胞中是否存在抑制肿瘤免疫反应的因素。除了涉及血管生成的因素(血管生成素、血管内皮生长因子(VEGF)、GRO)和白细胞吸引因子(趋化因子)外,还发现了一些可能通过抑制DCs的抗原提呈能力或免疫系统的效应臂来抑制抗肿瘤免疫反应的因素。MM患者胸膜液中发现的因素之一是HGF,也称为分散因子。HGF是一种多功能因子,参与发育和组织修复,以及癌症和转移等病理过程GydF4y2Ba13.GydF4y2Ba.先前,HGF在间皮瘤细胞侵袭中具有主要作用,同时刺激基质金属蛋白酶和组织抑制剂的粘附性,运动,侵袭和调节金属蛋白酶水平GydF4y2Ba14.GydF4y2Ba.令人惊讶的是,结果表明HGF有可能在多种肿瘤模型中诱导GRO和VEGF(也在本分析中发现),包括NSCLCGydF4y2Ba15.GydF4y2Ba.最近的研究表明,HGF可能是MM中免疫抑制的关键媒介,因为HGF抑制了肺树突状细胞的成熟状态和抗原提呈能力GydF4y2Ba16.GydF4y2Ba.同样,作者发现VEGF由MM细胞系分泌,并存在于胸腔积液中。VEGF的主要作用是诱导血管生成以使肿瘤受益,但它长期以来一直被认为通过保持这些细胞处于不成熟状态或抑制其从单核细胞分化而严重抑制DCs诱导抗肿瘤反应的功能GydF4y2Ba17.GydF4y2Ba.GydF4y2Ba
本研究另一个引人注目的观察是,在MM活检中未发现CD1a+ DCs。由于对CD1a使用的争论,使用了其他DC标记物(langerin, fasin, S100, BDCA2和CD209)GydF4y2Ba18.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba19.GydF4y2Ba,并证实在间皮瘤活检中发现这种罕见的DC。这与许多其他肿瘤相反,如乳腺癌或非小细胞肺癌,在这些肿瘤病变中发现CD1a+树突状细胞GydF4y2Ba20.GydF4y2Ba.MM中缺乏树突状细胞的一个可能的解释是MM细胞产生的高水平的IL-6,如本研究所示。IL-6也被其他研究证实在MM细胞系中普遍表达GydF4y2Ba21.GydF4y2Ba.IL-6抑制CD34+祖细胞和单核细胞的DCs的发展GydF4y2Ba体外GydF4y2Ba22.GydF4y2Ba.对多发性骨髓瘤患者的研究表明,高水平的IL-6是这些患者循环DCs缺乏的原因GydF4y2Ba23.GydF4y2Ba.在小鼠和人类中,IL-6也使树突状细胞持续处于不成熟状态,并促进巨噬细胞从单核细胞分化GydF4y2Ba22.GydF4y2Ba.在包括肺癌在内的许多癌症中,肿瘤内部缺乏树突状细胞已被证明会影响肿瘤的进展GydF4y2Ba24GydF4y2Ba.肿瘤内部的DCs可能是激活效应CD4和CD8细胞在肿瘤内部局部发挥效应功能的关键GydF4y2Ba25GydF4y2Ba.树突状细胞的缺失可能部分解释了为什么尽管肿瘤内存在效应细胞,但肿瘤却没有被杀死。因此,提高DC分化和生长因子、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的水平已被用于许多癌症中,作为增强抗肿瘤反应的策略GydF4y2Ba26GydF4y2Ba.GydF4y2Ba
尽管缺乏抗动态反应,但肿瘤内部存在免疫效应细胞存在的另一种解释是存在抑制抗动胎儿T细胞的天然存在的Treg细胞。在自发性肿瘤发展的小鼠模型中,表明这是肿瘤逃避免疫识别的主要方式之一GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba.通过抑制对自我抗原,传染性药物和肿瘤的各种免疫应答来保持免疫平衡,在维持免疫平衡方面发挥着重要作用GydF4y2Ba27GydF4y2Ba.这一CD4+ t细胞亚群表达高水平的CD25 (IL-2受体α链),自然是无能量的,需要通过t细胞受体的刺激来诱导其细胞介导的抑制功能。叉头转录因子Foxp3在这些细胞的发育中尤为重要GydF4y2Ba28GydF4y2Ba.在癌症患者的外周血和组织中观察到Treg细胞的频率增加GydF4y2Ba29GydF4y2Ba.在卵巢癌中,CD4+CD25+Foxp3+ Treg细胞大量浸润与预后差相关,这些细胞直接抑制浸润CD4和CD8细胞功能GydF4y2Ba30.GydF4y2Ba.同样,在目前的研究中,作者证明了人类间皮瘤活检中含有大量的CD4+CD25+ t细胞,这些CD25+细胞也表达Treg转录因子Foxp3。其他研究也描述了MM胸腔积液中CD4+CD25+细胞的增加GydF4y2Ba31GydF4y2Ba.GydF4y2Ba
为了解决这些Treg细胞的功能,本作者转向鼠移植间皮瘤AB1小鼠模型GydF4y2Ba2GydF4y2Ba.在该模型中,肿瘤生长显着降低,当在肿瘤植入之前使用CD25耗尽抗体耗尽Treg细胞时,存活增加。中位生存率从19至33天延长。注意到,12只处理过的小鼠中有五个(41%)仍然肿瘤2个月。这使得可以使其他实验性肿瘤模型中的其他实验肿瘤模型中的一种,其中使用相同抗体的Treg耗尽导致肿瘤抑制增加GydF4y2Ba32GydF4y2Ba那GydF4y2Ba33GydF4y2Ba.Treg细胞介导其抑制功能的途径之一是通过CD8 t细胞的转化生长因子(TGF)-β受体信号传导GydF4y2Ba34GydF4y2Ba.本研究在胸膜液和MM上清中均可检测到TGF-β2,但目前尚不清楚TGF-β是否由CD4+CD25+ Treg细胞产生。Treg细胞产生的另一种抑制因子是IL-10。虽然目前的作者无法在蛋白阵列中检测到IL-10,但在免疫组织学上观察到IL-10的弱染色(数据未显示)。除了肿瘤微环境中的Treg细胞和免疫抑制细胞因子外,针对间皮瘤的免疫反应通常如此无效还有其他可能的原因。低或缺乏特异性抗原的产生,抗原表位的隐藏性或MHC表达的下调使免疫系统对肿瘤不知情。在没有足够共刺激的情况下呈递抗原可能会诱发克隆性无能或导致效应细胞产生非破坏性反应或导致细胞死亡。未来的小鼠实验将探索这些细胞因子在treg介导的免疫抑制中的功能意义。目前只能推测为什么间皮瘤内存在高水平的具有抑制功能的Treg细胞。目前的作者先前已经描述了mm来源的肿瘤组分中高水平的热休克蛋白-70GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba.已经表明,自我休克蛋白衍生的肽具有扩展FoxP3 + CD4 + CD25 + Treg细胞的可能性GydF4y2Ba35GydF4y2Ba.此外,环氧化酶2和前列腺素e水平较高GydF4y2Ba2GydF4y2Ba已在间皮瘤中发现,并与更严重的预后相关GydF4y2Ba36GydF4y2Ba.肿瘤提取prostaglandin-EGydF4y2Ba2GydF4y2Ba特异性诱导人CD4+ CD25- t细胞中Foxp3基因表达和Treg细胞功能GydF4y2Ba37GydF4y2Ba.GydF4y2Ba
目前的数据可能用于设计更好的间皮瘤免疫治疗试验。目前的作者最近表明,使用肿瘤脉冲树突状细胞的免疫疗法可以有效地防止小鼠间皮瘤的生长,但这种成功在具有较大肿瘤负担的小鼠中是有限的GydF4y2Ba2GydF4y2Ba.通过肿瘤膨大或阻断血管内皮生长因子、白细胞介素-6或肝细胞生长因子激活和/或信号传导来抑制肿瘤的免疫抑制环境可能被用作树突状细胞免疫治疗的辅助手段。更有挑战性的是,通过低剂量环磷酰胺、特异性toll样受体8激动剂、COX2抑制或针对CD25的免疫毒素抑制t调节功能,可能与树突状细胞免疫治疗联合使用,以提高间皮瘤肿瘤根除的成功率。显然,在设计临床试验之前,对小鼠恶性间皮瘤模型的临床前研究必须证明这种联合方法的成功。GydF4y2Ba
致谢GydF4y2Ba
作者要感谢G. Oldenhove (Université Libre de Bruxelles, Brussels, Belgium)提供PC61。GydF4y2Ba
- 收到了GydF4y2Ba2005年11月16日。GydF4y2Ba
- 公认GydF4y2Ba2006年2月22日。GydF4y2Ba
- ©ERS期刊有限公司GydF4y2Ba
参考文献GydF4y2Ba
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