抽象的
本研究的目的是评估,以便在鳞状化生支气管血型抗原的表达,以确定该因子是否能在患肺癌的风险的患者。
总共包括100个支气管活组织检查,包括在本研究中。案件根据世界卫生组织分级系统进行分类。对组织血基A和B的免疫组织化学染色,以及对P53的反应性试验和细胞增殖指数进行。
共有56例(56%)患者属于A型血,其中6例(10.7%)患者在鳞状上皮化生中不表达抗原,活检时为癌(n = 3)或并发肺癌(n = 3)。共有9例(9%)患者属于b型血,其中5例出现抗原表达缺失。所有患者均并发肺癌。低级别和高级别发育不良患者分别有71例和100%的病例发展为肺癌。
总之,本研究的结果表明,组织 - 血型抗原表达的缺失是在支气管粘膜的发生的事件和它通常与高度病变和过度增殖活性相关。
肺癌发生是一个多步骤的过程,其特征是连续的分子遗传和表观遗传异常的积累,导致上皮细胞恶性转化1,2,如致癌基因的表达和肿瘤抑制基因的缺失2,3..日益增多的信息是目前市面上的遗传改变导致支气管癌的最后阶段侵入。然而,侵入前病变的自然史知之甚少。目前,很明显,高品位侵袭前病变会发展成浸润癌的情况下30-50%,而大多数低档浸润前病变的保持随访期间稳定或回归4,5.然而,需要增加更好地表征病变的努力。
组织血型抗原是一组糖蛋白和糖脂,其抗原特异性是由其组成碳水化合物链的变化所决定的6.这些抗原参与了细胞分化、成熟、增殖、恶性转化和细胞间信号转导等多种生物学过程7.已经在各种位点的癌症中提出了损失或修饰的组织血群抗原(ABH)表达的预后意义,包括尿膀胱8,胃肠道9和肺部10.- - - - - -12..Davidsohn和倪10.证明ABH决定簇的肺癌的损失。随后,李某et al。11.和摩尔维尔et al。13.证明了抗原表达的减少或缺失与生存率的降低相关。松本et al。14.结论认为,肺癌中的ABH血型抗原的损失与其转移潜力相关,特别是具有复发和血液源性转移。Iichikawa报道了类似的结果et al。15..
本研究的目的是通过免疫组化技术探讨组织血抗原在鳞状上皮化生中的表达及其与肿瘤蛋白p53表达、细胞增殖指数(Ki67)等预后因素的关系。
材料与方法
该研究材料是从GregorioMarañón医院(西班牙马德里)的病理部门的文件中获得的。它由支气管镜检查期间获得的支气管活检标本组成,从1996 - 2000年在100名呼吸症状患者之间进行,肺癌临床怀疑。根据世界卫生组织(世卫组织)分类,病变被分类和分级16..
从临床记录获得的人口统计信息。吸烟者被定义为在谁活检时熏的病人。Ex-smokers were defined as those who had given up smoking >1 yr before the time of biopsy. Nonsmokers were defined as those patients who never acquired the habit. Tobacco consumption was evaluated as a pack-yr index. In the follow-up, synchronous carcinoma was defined as a carcinoma diagnosed within 1 yr after a biopsy, demonstrating squamous metaplasia. Metachronous carcinoma was defined as occurring ≥1 yr after the biopsy.
准备纸巾
组织固定在10%福尔马林中性缓冲溶液中,石蜡包埋,切片厚度4 μm,苏木精和伊红染色。
免疫组织化学研究
从石蜡包埋的活检标本中切下4 μm厚的切片,并安装在玻片上。用二甲苯对标本进行脱蜡,用乙醇逐步降低浓度复水。切片在37°C 0.3% H孵育2O2在绝对甲醇10分钟,阻断内源性过氧化物酶。用pH 7.2的PBS洗涤20分钟后,在室温(RT)的潮湿室中,将样品与一抗初级抗体一起温育45分钟。所用的主要抗体是:抗血液组A(克隆:T36; Signet Laboratories,Dedham,Ma,USA; 1:60稀释),抗血液组B(克隆:CLCP-19B; Signet Laboratories; 1:60稀释),抗P53(克隆:Do7; Novocastra,Newcastle,UK; 1:100稀释)和针对Ki67的抗体(克隆:MIB-1; Dako Corporation,Carpinteria,CA,USA; 1:200稀释)。在柠檬酸盐缓冲液(10mM,pH6.0)中的微波炉(15分钟,500W)中的预处理后使用它们。
The sections were subsequently incubated with biotinylated anti-mouse and anti-rabbit immunoglobulin G and ligand-binding assay (DAKO Corporation) for 25 min at RT, then rinsed in PBS for 5 min and immersed in avidin peroxidase complex for 25 min. Finally, the peroxidase was localised by treatment of the samples with a fresh mixture of diaminobenzidine and substrate for 10 min. After washing in distilled water, the sections were lightly counterstained with haematoxylin, dehydrated in ethanol, cleared in xylene and coverslipped using permount.
当细胞在细胞质和/或细胞质膜上呈现颗粒状染色时,不论其强度如何,A和B抗组的免疫染色被定义为阳性。对p53和Ki67的免疫组化反应记录为细胞核染色百分比。当> - 10%的细胞核染色时,检测为阳性。按染色细胞百分比分为5组:0 = 0 - 10%,+ = 10-25%,++ = 26-50%,+++ = 51-75%,++++ = 76-100%。
统计分析
p值根据Yates检验使用卡方计算,当值小于5时,最后使用确切的Fisher检验进行修正。使用比值比和95%置信区间对不同强度的相关性以及发生任何呼吸道肿瘤的可能风险进行评估。
结果
本研究中包含的100名患者的特征如表1所示⇓.支气管病变根据世界卫生组织的分级系统进行分级。一种表现出血管生成鳞状发育不良(ASD)的案例被归类为呈现严重的发育不良。所有患者患有与肺癌相关的呼吸系统症状,但尚未肺癌诊断。
共有56名(56%)患者属于血液组A.所有这些患者均显示了活组织检查样品中内皮和红细胞中的血液组的阳性染色。其中,六种(10.7%)患者在支气管上皮中没有表达组织血液A抗原。一种情况(16.6%)显示出轻度发育不良,两种情况(33.3%)显示出严重的发育不良,两种情况显示原位癌(顺式;微浸润癌1例(16.6%)。6例患者中有3例(50%)活检时显示为癌。另外3人在活检后的第一年被诊断为肺癌(即。同步)。根据前述标准(参见免疫组织化学研究,所有患者血液组A表达丧失的病例表达了KI67和P53的阳性。高强度Ki67染色的细胞位于基础和中间水平的组分和中间水平,其平均染色细胞的含量为70%。对于P53蛋白,观察到类似的结果,其平均为85%的染色细胞。染色的强度非常强烈。抗原的丧失显示出与Ki67阳性染色的显着关系(p = 0.03;表2⇓).在剩下的病例中,没有血液组A,22例(39.3%)患者发展同步肺癌,(12.5%)七种患者开发的同勤肺癌,10例(17.9%)没有发育肿瘤和11例19.6%)案件失去了随访.ASD病例与组织血型A抗原表达缺失有关,癌蛋白p53和Ki67染色阳性,并发肺癌(图1)⇓).
![图1 -](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/29/2/268/F1.medium.gif)
a)血管生成的鳞状发育不良,具有血红素和曙红染色。b)上皮内内皮组和阴性血液组A的正免疫染色。c)P53(免疫组织化学染色)的表达。a,b)刻度条=40μm。c)缩放条=30μm。
b型9例,5例(55%)出现抗原表达缺失,其中4例为中度发育不良,1例为轻度发育不良。5例(100%)均为同时性肺癌。所有病例p53和Ki67均为阳性染色(表3)⇓).其余4例(45%)无组织血型表达缺失,3例(33.3%)发生异时性肺癌,1例(11.1%)失随访。
组织 - 血型A和B抗原的表达在侵袭前支气管病变损失synchronouos和异肺癌的发展的预测值分别为:24%的阳性预测值和100%的阴性预测值。
随访82例。平均(范围)随访时间为24.7(6-48)个月。共有56例(68.3%)案件发生同步癌。鳞状癌是28%案例中最常见的组织学类型。小细胞肺癌在6.1%的病例中,肺腺癌在3.7%的病例中发育,8.5%的病例披露于其他定位癌(六(7.3%)病例喉癌和一(1.2%)案例乳腺癌).大约12.2%的病例开发了同等癌症;六种鳞状肺癌,一种病例肺腺癌和其他定位癌的三种病例(喉部含两种病例和一个输尿管)。总共18例(21.9%)肺癌临床和放射性标准的患者,死亡而没有组织学诊断。在随访48个月内,在16个月(19.5%)病例中没有开发肿瘤病变(表4⇓).
发育不良的等级,具有肺癌的患者的发展与后续关联后,我们发现,从所述组的55名患者轴承低度病变(基底细胞增生,化生无发育异常和轻度不典型增生),34(61.8%)患者发展同步癌,五(9.1%)患者发生异时性癌16例(29.1%)患者未患癌症。从组27例示出高度病变(中度和重度发育异常),共有22个(81.5%)出现同步癌和五(18.5%)发生异时癌,显示出高度病变之间的统计学显著关联the development of lung cancer (p = 0.006). A total of 63 (63%) cases showed staining of >10% of the cell population of the plaque for Ki67 and 66 (66%) cases for p53. When comparing Ki67 positivity and p53 with the grade of dysplasia, it becomes apparent that high-grade lesions show a higher number of positive cases than low-grade lesions (47.8相对77.4%, p = 0.005;60.8相对80.8%,P = 0.05)。
讨论
鳞状变化变化的组织学分级仍然用作金标,以解决这些病变的恶性潜力17..然而,布鲁尔最近的一项研究et al。5表明9%的鳞状细胞型血糖和低级(轻度和中等)发育不良进展到了CIS和侵入性癌。这表明,并不总是发生肺癌的逐步组织病理学多阶段开发,或者由于其快速进展而并不总是检测到。布雷尔et al。5得出结论,任何预先肿瘤病变的组织学等级不能可靠地用于对现场致癌作用的准确风险评估,因为不可能区分预肿瘤鳞状病变的真正恶性潜力。
虽然肺癌的风险随着预侵入性病变的存在而增加,但尚未确定预测对肺癌不可逆进展的分子测定剂。
表现在血液组和B抗原的表达的免疫化化学分布的变化,类似于在癌中所见的那些,不仅是预后肺癌的临床意义,而且是早期诊断的有用工具。在人类癌症中广泛研究了缺失或减少组织血液A或B表位。在胃癌初始报告之后18.,这一现象也被描述,并与组织学分级和转移潜能在其他胃肠道9, 肺10.- - - - - -12.,宫颈癌19.,口头20.和膀胱癌8.就支气管癌而言,以往的报道表明,A或B血型的患者,且肿瘤不表达相应的组织血型,诊断后生存时间较短13.,14.,21..关于组织血液抗原表达,本结果表明,在支气管粘膜的癌变过程中发生抗原损失,因为它是低级鳞状病变的罕见事件,但频繁的高级病变中的常见事件与开发的同步肺癌相关10.- - - - - -12.,14.,15..本文作者认为,尽管本系列研究的规模太小,无法讨论预测或诊断价值,这些趋势表明,侵袭前支气管病变中组织血抗原表达的缺失可能揭示了支气管粘膜的严重的野灶性癌变过程,这可能是与同步癌相关的侵袭前支气管病变的一个特征。必须强调的是,目前的研究包括临床怀疑肺癌的患者。
在本研究中分析的数据显示,与侵袭前支气管病变相关的同步癌的高百分比(68.3%)。这个事实可以用两种不同的假设来解释。首先,它可以支持这样的理论,即侵袭前支气管病变并不总是发生循序渐进的组织学进展5.其次,它可能反映了这样一个事实,即野癌可以随机影响支气管树的任何部位,因此,伴随病变可以是不同的年龄和不同的侵袭速度22..不幸的是,目前的研究结果并不能澄清这一点。
肿瘤抑制基因的改变起到的许多形式的癌症发展的关键作用。本作者试图与组织 - 血型抗原表达这个因素相关。p53的癌蛋白的正常功能的紊乱已建议反映恶性转化过程中的重要事件。一些作者报告的数据显示鳞状上皮化生的支气管表达的p5323.和与高级发育不良相关的p53突变1.其他作者研究了共存癌患者的化脓性病变,显示p53过表达23.,24..本研究的结果符合这些数据。
在本系列中,所有组织血抗原表达缺失的病例也显示Ki67和p53的高染色。这些结果证实,抗原表达的缺失和其他因素,如p53表达和细胞增殖的增加,至少是同时发生的事件,因此需要用更大的系列病例来评估其统计学意义。这些发现支持了导致细胞转化的遗传/表观遗传异常的渐进和逐步积累1,2,25.,26..
ASD的特点是上皮下小毛细血管呈微乳头状生长,表明支气管粘膜的血管化异常。微血管密度的增加和支气管毛细血管床的异常形态都反映了这一点。ASD血管生成的可能机制可能涉及一小群含有癌前突变的异常鳞状细胞,它们在极短的距离内传递血管生成信号27..在本研究中,观察了一个asd的一种情况。它与抗原表达,癌蛋白p53和ki67阳性的抗原表达,癌蛋白p53和ki67阳性有关。这一发现提供了额外支持,认为它必须被归类为高级病变。
总之,本研究结果表明,组织血液抗原表达的丧失是支气管粘膜的致癌物中的事件,通常与高级病变和过度增殖活性相关。需要进一步的研究以更好地表征定义支气管上皮的恶性肿瘤的改变,以及识别关键因素或因素的关联,这将预测侵入性支气管病变对侵入性癌症的进展。这种研究可能有助于对恶性细胞克隆进行非常敏感和具体的方法和可接受的重复性,并且可以帮助为这种高致命疾病提供更有效的策略。
- 已收到2006年1月23日。
- 接受2006年9月14日。
- ©ers Journals Ltd