摘要gydF4y2Ba
囊性纤维化患者气道一氧化氮生成减少。由于生长激素疗法已被证明可以增加生长激素缺乏患者的一氧化氮产生,它也可能影响囊性纤维化患者的一氧化氮产生。本研究的目的是探讨生长激素治疗对囊性纤维化患者全身和气道一氧化氮形成的影响。gydF4y2Ba
在囊性纤维化患儿接受人类生长激素治疗1年之前、期间和之后,分别测量了血清和尿液中的一氧化氮代谢物、血清和痰中的氨基酸浓度以及呼出的一氧化氮。gydF4y2Ba
治疗期间血清和尿液中一氧化氮代谢物浓度显著升高。血清氨基酸浓度(包括gydF4y2BalgydF4y2Ba-精氨酸(一氧化氮合酶的底物)在治疗过程中也有所增加。的系统生物利用度gydF4y2BalgydF4y2Ba-精氨酸为一氧化氮合酶,表示为的比值gydF4y2BalgydF4y2Ba精氨酸/gydF4y2BalgydF4y2Ba-鸟氨酸+赖氨酸,保持不变。相比之下,gydF4y2BalgydF4y2Ba在生长激素治疗期间,痰中-精氨酸浓度显著降低,呼气一氧化氮水平也显著降低。gydF4y2Ba
用生长激素治疗囊性纤维化儿童可通过降低一氧化氮浓度来降低呼出的一氧化氮gydF4y2BalgydF4y2Ba-精氨酸gydF4y2Ba
囊性纤维化(CF)是由囊性纤维化跨膜电导调节基因(CFTR)突变引起的一种遗传性疾病。CF的临床病程多变,但典型特征为吸收不良,继发于胰腺功能不全的营养不良,以及慢性气道感染和炎症,导致肺功能的进行性丧失,最终导致呼吸衰竭gydF4y2Ba1gydF4y2Ba.CF气道缺乏一氧化氮(NO)。CF气道中低NO形成的机制尚不完全清楚,但可能包括缺乏一氧化氮gydF4y2BalgydF4y2Ba-精氨酸是NO合成酶(NOS)的底物,NOS表达降低gydF4y2Ba2gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba5gydF4y2Ba.gydF4y2Ba
越来越多的证据表明,低浓度的NO在CF中具有功能相关性。gydF4y2BaFgydF4y2Ba伊诺gydF4y2Ba)和肺功能反复观察gydF4y2Ba6gydF4y2Ba,gydF4y2Ba7gydF4y2Ba.此外,神经元NOS的基因变异(gydF4y2BaNOS1gydF4y2Ba),与低有关gydF4y2BaFgydF4y2Ba伊诺gydF4y2Ba,似乎更容易导致CF患儿肺功能的快速下降gydF4y2Ba8gydF4y2Ba.增加了CF气道定植的风险gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba也被发现与gydF4y2BaNOS1gydF4y2Ba而且gydF4y2BaNOS3gydF4y2Ba基因变异与低相关gydF4y2BaFgydF4y2Ba伊诺gydF4y2Ba9gydF4y2Ba,gydF4y2Ba10gydF4y2Ba.gydF4y2Ba
相反,gydF4y2BalgydF4y2Ba-精氨酸补充剂具有抗炎作用,如慢性假单胞菌感染大鼠模型所示gydF4y2Ba11gydF4y2Ba并且,当添加到气道时,对cftr缺陷小鼠的气道平滑肌有扩张作用gydF4y2Ba12gydF4y2Ba.gydF4y2BalgydF4y2Ba-精氨酸也可能对肺氧化应激和抗氧化防御有保护作用gydF4y2Ba13gydF4y2Ba.在CF患者中,gydF4y2BalgydF4y2Ba-精氨酸的补充导致gydF4y2BaFgydF4y2Ba伊诺gydF4y2Ba静脉注射或口服gydF4y2Ba14gydF4y2Ba,gydF4y2Ba15gydF4y2Ba,以及一次雾化gydF4y2BalgydF4y2Ba-精氨酸已被证明增加gydF4y2BaFgydF4y2Ba伊诺gydF4y2Ba用力呼气量(FEV)gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)在CF患者中gydF4y2Ba16gydF4y2Ba.gydF4y2Ba
NO的形成可以通过增加可用性来增强gydF4y2BalgydF4y2Ba-精氨酸和增加NOS表达gydF4y2Ba17gydF4y2Ba.内分泌因子,如雌激素,胰岛素样生长因子-1和生长激素也被发现可以改变gydF4y2BalgydF4y2Ba精氨酸/不通路gydF4y2Ba18gydF4y2Ba,gydF4y2Ba19gydF4y2Ba.生长激素能够转录激活NOSgydF4y2Ba20.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba21gydF4y2Ba也可能影响NOS的底物可用性,因为它增强了gydF4y2BalgydF4y2Ba-精氨酸被小肠吸收gydF4y2Ba22gydF4y2Ba,gydF4y2Ba23gydF4y2Ba.生长激素缺乏导致全身NO形成减少,生长激素缺乏患者的替代导致NO增加,尿硝酸盐和环鸟苷单磷酸生产恢复,血管外周阻力升高正常化,心排血量改善gydF4y2Ba24gydF4y2Ba,gydF4y2Ba25gydF4y2Ba.gydF4y2Ba
人类生长激素(hGH)治疗已被证明对CF患者有有益的影响,包括促进生长、体重增加和骨矿化gydF4y2Ba26gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba28gydF4y2Ba.由于生长激素替代导致生长激素缺乏患者NO代谢增加,目前的作者假设生长激素治疗CF患者也会导致NO形成增加。因此,hGH治疗对gydF4y2BalgydF4y2Ba-精氨酸代谢和NO形成在接受生长激素治疗的CF患者中进行了研究,这是一项多中心试验的一部分,目的是评估生长激素治疗在CF中的效果gydF4y2Ba26gydF4y2Ba.gydF4y2Ba
材料与方法gydF4y2Ba
研究设计gydF4y2Ba
本研究中纳入的患者参与了一项关于hGH治疗CF疗效的随机安慰剂对照多中心研究(Pharmacia试验307 MET-9002-026)。gydF4y2Ba26gydF4y2Ba.患者每日皮下注射重组hGH 0.039 mg·kggydF4y2Ba−1gydF4y2Ba每天体重(~ 0.11 IU·kg)gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba体重/天),0.07毫克·公斤gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba每天体重(~ 0.21 IU·kg)gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba每天体重)或安慰剂。该研究为24周双盲研究,24周开放标签治疗期。患者被分配到三个治疗组中的一个,为期24周。在双盲治疗期结束时,接受生长激素治疗的患者继续保持目前的生长激素剂量24周,安慰剂组的患者被随机分配到低剂量或高剂量的生长激素治疗方案。受试者必须被确诊为CF,营养不良由身体质量指数(BMI) <第10百分位和/或体重<第3百分位定义,尽管高热量摄入(>120%推荐膳食摄入量),并且骨龄为8-18岁。排除标准为急性肺加重、糖尿病和肝硬化。在开始hGH治疗前,治疗期间每3个月,治疗期后6个月和12个月对患者进行研究。gydF4y2Ba
研究人群gydF4y2Ba
本亚研究共纳入来自单一中心(德国埃森)的15例CF患者,他们均参与了多中心研究。其中,11名患者接受了12个月的生长激素治疗;6例低剂量和5例高剂量hGH。四名患者被分配到安慰剂组,因此在12个月内没有接受hGH治疗,不包括在分析中。11例患者的平均年龄(范围)为14(12-18)岁,FEVgydF4y2Ba1gydF4y2Ba预测为53 (28-90)%,BMIgydF4y2BasdgydF4y2Ba得分为-1.7 (-3.7 - -0.9);这与研究的总人数没有什么不同gydF4y2Ba26gydF4y2Ba.在hGH治疗前、治疗期间(3、6、9和12个月)和治疗后12个月,分别检测血清和尿液中的NO代谢物(NOx)。在hGH治疗前和治疗期间(6个月和9个月)测定血清氨基酸。采集痰液主要用于微生物学。在研究的盲法阶段(3个月和6个月之前和之后)以及hGH治疗后6个月,测量了5名接受hGH治疗的患者痰中氨基酸浓度,他们能够提供额外的样本。所有患者在hGH治疗前、治疗期间(3、6、9和12个月)和治疗后6个月测量呼出NO。gydF4y2BaFgydF4y2Ba伊诺gydF4y2Ba在12个月的hGH治疗后,仅在4名患者中进行了测量,因此这些数据没有进行分析。gydF4y2Ba
血清、痰标本处理gydF4y2Ba
静脉穿刺抽血,立即离心,血清保存于-20°C,待分析。自发咳痰主要用于微生物学。另外的样品用1:1的缓冲液稀释,涡旋2 min, 1000 ×离心10 mingydF4y2BaggydF4y2Ba.清上清用于氨基酸测定。gydF4y2Ba
氮氧化物的测量gydF4y2Ba
用NO分析仪(noa280和吹扫容器;西弗斯,博尔德,科罗拉多州,美国)gydF4y2Ba29gydF4y2Ba.gydF4y2Ba
氨基酸测定gydF4y2Ba
氨基酸在氨基酸分析仪LC 3000 (Eppendorf,汉堡,德国)上用离子交换色谱法根据制造商的规格进行测定。分析前对血清和痰标本进行脱蛋白处理。gydF4y2Ba
呼气没有测量gydF4y2Ba
化学发光分析仪(noa280;Sievers)用于测量gydF4y2BaFgydF4y2Ba伊诺gydF4y2Ba.在呼气流量恒定为50 mL·min的情况下,进行单次呼吸在线测量以评估下气道NOgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba符合欧洲呼吸学会/美国胸科学会公布的标准188bet官网地址gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba31gydF4y2Ba.NO分析仪在每次研究前用0 ppb和185 ppb NO校准气体进行校准(林德公司,Unterschleissheim,德国)。计算每个受试者三次呼气末NO浓度在15%变化范围内的平均值。gydF4y2Ba
统计数据gydF4y2Ba
数据显示为中位数(四分位范围)。比较时间过程中的氮氧化物和氨基酸浓度,以及gydF4y2BaFgydF4y2Ba伊诺gydF4y2Ba,采用Kruskal-Wallis单因素方差分析。的比较gydF4y2BalgydF4y2Ba-精氨酸生物利用度指数(gydF4y2BalgydF4y2Ba精氨酸/gydF4y2BalgydF4y2Ba-鸟氨酸+赖氨酸)gydF4y2Ba与gydF4y2Ba痰液采用Wilcoxon检验。gydF4y2Ba
结果gydF4y2Ba
在分析的任何参数中,低和高hgh治疗组之间没有差异。在治疗期间,血清NOx浓度显著增加(p = 0.027, ANOVA),并在停止生长激素后恢复到基线值(图1)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba).同样,在治疗期间,尿液NOx浓度也显著增加(p = 0.029, ANOVA),并在停止生长激素后恢复到基线水平(图2gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba).gydF4y2Ba
![图1 -gydF4y2Ba](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/31/4/815/F1.medium.gif)
在囊性纤维化患者接受人类生长激素(hGH)治疗前、期间和12个月后,血清中一氧化氮代谢物(NOx)的浓度(n = 11)。血清NOx在治疗期间增加,在停止使用hGH后恢复到基线值。gydF4y2Ba
![图2 -gydF4y2Ba](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/31/4/815/F2.medium.gif)
囊性纤维化患者在接受人类生长激素(hGH)治疗12个月之前、期间和之后尿中一氧化氮代谢物(NOx)浓度(n = 11)。尿NOx浓度在治疗期间增加,并在停止使用hGH后恢复到基线值。gydF4y2Ba
在hGH治疗前和治疗期间测定的18种氨基酸的血清浓度见表1gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba.在hGH处理期间,除苏氨酸外,血清中所有氨基酸的平均水平均显著升高。这包括gydF4y2BalgydF4y2Ba精氨酸和gydF4y2BalgydF4y2Ba-瓜氨酸、底物和产物的NOS活性分别以及gydF4y2BalgydF4y2Ba-鸟氨酸(精氨酸酶的产物)和脯氨酸(精氨酸酶途径的下游产物和胶原蛋白形成的前体)(表1)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba).的比例gydF4y2BalgydF4y2Ba精氨酸/gydF4y2BalgydF4y2Ba-鸟氨酸+赖氨酸,可作为生物利用度的指标gydF4y2BalgydF4y2Ba-精氨酸用于NOSgydF4y2BalgydF4y2Ba精氨酸浓度gydF4y2Ba32gydF4y2Ba,为0.45±0.08,在hGH治疗期间维持不变(p = 0.347, ANOVA)。gydF4y2Ba
10例囊性纤维化患者在开始使用人类生长激素治疗前和6、9个月后血清氨基酸浓度的变化gydF4y2Ba
的意思是gydF4y2BaFgydF4y2Ba伊诺gydF4y2Ba在治疗期间显著下降(p = 0.005,方差分析),并在停止使用hGH后恢复到基线水平(图3gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba).gydF4y2Ba
![图3 -gydF4y2Ba](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/31/4/815/F3.medium.gif)
部分呼出一氧化氮(gydF4y2BaFgydF4y2Ba伊诺gydF4y2Ba)在接受人类生长激素(hGH)治疗12个月之前、期间和之后的囊性纤维化患者中(n = 11)。的意思是gydF4y2BaFgydF4y2Ba伊诺gydF4y2Ba在治疗期间下降,并在停止使用hGH后恢复到基线值。gydF4y2Ba
lgydF4y2BaCF痰液-精氨酸浓度为15.5±17.3 μmol·LgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba在hGH治疗期间显著下降(p = 0.008, ANOVA;图4gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba).的gydF4y2BalgydF4y2Ba基线时,CF痰中的-精氨酸可用性指数显著低于血清(p<0.001, Wilcoxon检验)。个人变化gydF4y2BalgydF4y2Ba-精氨酸在痰中的生物利用度指数如图4b所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba.虽然该指数在个别患者中有所下降,但平均痰量gydF4y2BalgydF4y2Ba-精氨酸生物利用度指数在生长激素处理期间无显著变化(p = 0.275, ANOVA)。gydF4y2Ba
![图4 -gydF4y2Ba](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/31/4/815/F4.medium.gif)
一)gydF4y2BalgydF4y2Ba-精氨酸和b)gydF4y2BalgydF4y2Ba囊性纤维化患者在人类生长激素(hGH)治疗前、期间和12个月后痰中-精氨酸生物利用度指数(n = 5)。gydF4y2Bal -gydF4y2Ba在hGH处理期间,精氨酸浓度下降,而平均gydF4y2BalgydF4y2Ba-精氨酸有效度指数无变化。gydF4y2Ba
肺功能数据与所分析的任何参数之间均无相关性。gydF4y2Ba
讨论gydF4y2Ba
在本研究中,用hGH治疗CF患者导致血清氨基酸浓度增加,包括gydF4y2BalgydF4y2Ba-精氨酸,NO合成酶的底物,以及血清和尿液中NOx浓度的增加。这些发现表明,在生长激素缺乏的CF患者中,hGH替代治疗增加了全身NO的形成,而在这些患者中,hGH替代治疗增加了全身NO的形成gydF4y2Ba25gydF4y2Ba.相反,浓度gydF4y2BalgydF4y2Ba在hGH治疗期间,痰中-精氨酸和呼出NO水平下降,这表明使用hGH治疗的CF患者的NOS底物可用性降低,气道中NO形成减少。gydF4y2Ba
在hGH处理过程中NO生成增加,如血清和尿液中NOx的增加,可能是由于生长激素对构成性或诱导性NOS亚型的表达或活性的影响。体外培养的人内皮细胞实验表明,生长激素可导致内皮细胞NOS (NOS3)基因和蛋白表达呈剂量依赖性和时间依赖性增加gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba.在培养系膜细胞的一项研究中,生长激素治疗也被发现导致诱导性NOS (iNOS;NOS2)成绩单gydF4y2Ba21gydF4y2Ba.iNOS与CF有关,因为尽管该病具有炎症性质,但其在CF气道上皮细胞中的表达减少gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba4gydF4y2Ba.导致CF中iNOS表达降低的机制目前尚不清楚,但即使是激活促炎细胞因子,导致非CF细胞中iNOS的深度激活,也仅限于对cftr缺陷细胞中iNOS的表达没有影响gydF4y2Ba5gydF4y2Ba.NOS2 mRNA的翻译也可被低浓度的gydF4y2BalgydF4y2Ba精氨酸gydF4y2Ba33gydF4y2Ba,gydF4y2Ba34gydF4y2Ba.gydF4y2Ba
另一个合理的解释是,使用hGH治疗的CF患者系统NOx浓度较高,这是由于底物可用性较高,酶促NO生成增加。gydF4y2BalgydF4y2Ba- NOS的精氨酸转化随着细胞外的增加而增加gydF4y2BalgydF4y2Ba-精氨酸水平,虽然细胞内浓度gydF4y2BalgydF4y2Ba-精氨酸通常远高于NOS的米凯利斯常数。这种现象被称为gydF4y2BalgydF4y2Ba精氨酸悖论gydF4y2Ba35gydF4y2Ba并被认为是导致gydF4y2BaFgydF4y2Ba伊诺gydF4y2Ba在健康受试者和CF患者中补充gydF4y2BalgydF4y2Ba精氨酸gydF4y2Ba14gydF4y2Ba,gydF4y2Ba15gydF4y2Ba.因此,观察到的NOx水平的增加可能与循环浓度直接相关gydF4y2BalgydF4y2Ba-精氨酸,两者都有gydF4y2BalgydF4y2Ba-精氨酸和NOx升高。gydF4y2Ba
虽然系统性gydF4y2BalgydF4y2Ba生长激素治疗期间,CF患者-精氨酸和NOx的产生增加,同时呼出空气中的NO减少。gydF4y2BaFgydF4y2Ba伊诺gydF4y2Ba用作气道NO生成的替代标记物;因此,低gydF4y2BaFgydF4y2Ba伊诺gydF4y2Ba提示气道NO生成减少。另外,NO在气道分泌物中的滞留和转化为代谢物,如亚硝酸盐或硝酸盐,可能导致低gydF4y2BaFgydF4y2Ba伊诺gydF4y2Ba存在不变,甚至增加,酶NO的产生。这种机制以前曾被认为是造成低的一个因素gydF4y2BaFgydF4y2Ba伊诺gydF4y2BaCF患者gydF4y2Ba36gydF4y2Ba,gydF4y2Ba37gydF4y2Ba.然而,在本研究中发现,用生长激素治疗导致CF气道中NOS底物可用性降低。虽然,由于样本量小,这些结果需要谨慎解释,但发现不仅是绝对痰gydF4y2BalgydF4y2Ba-精氨酸的浓度,而且相对生物利用度gydF4y2BalgydF4y2Ba-精氨酸用于NOS,在hGH治疗期间CF痰中减少。的gydF4y2BalgydF4y2Ba-精氨酸生物利用度指数(gydF4y2BalgydF4y2Ba精氨酸/gydF4y2BalgydF4y2Ba-鸟氨酸+赖氨酸)反映的可用性gydF4y2BalgydF4y2Ba-精氨酸用于NOSgydF4y2BalgydF4y2Ba-精氨酸浓度,如gydF4y2BalgydF4y2Ba精氨酸,gydF4y2BalgydF4y2Ba-鸟氨酸和赖氨酸利用相同的跨膜运输系统,阳离子氨基酸转运体(CAT)-2gydF4y2Ba32gydF4y2Ba细胞内化。最近研究显示,在哮喘、镰状细胞病和CF患者的血液中,该指数下降,并被认为反映了在这些情况下nos介导的平滑肌舒张的底物限制gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,gydF4y2Ba32gydF4y2Ba,gydF4y2Ba38gydF4y2Ba.即使在基线时,CF患者痰液中的该指数也明显低于血清。这减少了gydF4y2BalgydF4y2Ba-精氨酸对CF气道细胞的可用性可能潜在地影响上调NO的能力,作为对抗对NO介导杀伤敏感的气道病原体(如粘液)的防御机制的一部分gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba39gydF4y2Ba.gydF4y2Ba
CF的慢性感染导致中性粒细胞为主的炎症和气道炎症标志物浓度增加gydF4y2Ba1gydF4y2Ba.然而,信号传感器和转录激活因子(STAT)1的激活在CF中降低,而涉及STAT1并导致气道上皮细胞中NOS2基因诱导的干扰素(IFN)-γ信号通路在CF中存在缺陷gydF4y2Ba40gydF4y2Ba.因此,生长激素对这些途径的抑制作用可能会进一步降低CF中NOS2的表达。事实上,在大鼠胰岛素分泌细胞系(INS-1细胞)中,生长激素可以抑制细胞因子IFN-γ和肿瘤坏死因子-α对iNOS的协同诱导。这种效应被认为是通过生长激素抑制IFN-γ-激活的STAT1介导的gydF4y2Ba41gydF4y2Ba.相比之下,接受脂多糖(LPS)挑战的犊牛肝组织中iNOS酶活性不受生长激素预处理的影响。然而,与未使用生长激素的动物相比,使用生长激素的动物在使用LPS之前使用生长激素会导致组成性NOS活性、NOS3磷酸化、血浆NOx水平和肝脏蛋白质硝化的增加。有趣的是,在该模型中,使用生长激素处理后,LPS后组织CAT-2 mRNA的渐进式增加显著减少gydF4y2Ba42gydF4y2Ba虽然尚未在CF中进行研究,但这些研究可能表明,CF患者的生长激素治疗可能通过影响NOS2的表达和减少NOS2的表达而对NO的形成产生显著影响gydF4y2BalgydF4y2Ba- NOS的精氨酸可用性。gydF4y2Ba
气道NO浓度低不仅反映了NO生成的减少,也可能是NO与活性氧(ROS)反应的结果。活化的NOS能在不饱和状态下释放活性氧,如超氧阴离子和过氧化氢gydF4y2BalgydF4y2Ba精氨酸水平gydF4y2Ba43gydF4y2Ba,gydF4y2Ba44gydF4y2Ba,在低饱和时,NOS能同时生成NO和超氧阴离子gydF4y2BalgydF4y2Ba精氨酸水平gydF4y2Ba45gydF4y2Ba.这些产物可反应生成过亚硝酸盐,随后导致酪氨酸硝化。先前已发现在CF肺组织、痰液和呼气冷凝液中硝基酪氨酸增加gydF4y2Ba46gydF4y2Ba.先前的研究表明,外源性生长激素为人类和大鼠的中性粒细胞、单核细胞和巨噬细胞的呼吸爆发以及伴随的超氧化物产生的增加提供了条件gydF4y2Ba47gydF4y2Ba,gydF4y2Ba48gydF4y2Ba.相比之下,用生长激素处理的培养内皮细胞的NO释放仅在生长激素浓度高到足以显著减少ROS形成的情况下才会增加。在较低浓度下,NOS3的表达增加,但NO通过与ROS反应代谢gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba.因此,生长激素对NO产生的影响可能是剂量依赖的,比本研究中使用的更高剂量可能对肺NO产生不同的影响。gydF4y2Ba
总之,本研究结果表明,使用人类生长激素治疗可减少囊性纤维化患者气道一氧化氮的形成。需要进一步的研究来阐明这一观察结果是否对囊性纤维化具有特异性,并具体说明所观察到的囊性纤维化变化的病理生理后果gydF4y2BalgydF4y2Ba-精氨酸/一氧化氮代谢途径。gydF4y2Ba
权益声明书gydF4y2Ba
D. Schnabel和F. Ratjen的兴趣声明,以及研究本身可以在gydF4y2Bawww.www.qdcxjkg.com/misc/statements.shtmlgydF4y2Ba
致谢gydF4y2Ba
作者要感谢M. Groch和B. Cirkel(德国埃森杜伊斯堡-埃森大学儿童医院)提供的出色技术援助。gydF4y2Ba
- 收到了gydF4y2Ba2007年8月10日。gydF4y2Ba
- 接受gydF4y2Ba2007年11月30日。gydF4y2Ba
- ©ERS期刊有限公司gydF4y2Ba
参考文献gydF4y2Ba
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