摘要gydF4y2Ba
目前的研究解决了exou,a的问题gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba具有磷脂酶A2(PLA2)活性的毒素可以诱导气道上皮细胞过表达组织因子(TF)并表现出促凝血剂表型。gydF4y2Ba
来自人支气管上皮BEA-2B系列的细胞被煎炸生产gydF4y2BaP.铜绿假单胞菌gydF4y2Ba菌株,是否预先与胞质PLA2抑制剂甲基花生四烯酰氟磷酸盐(MAFP)处理,或与两个exou缺陷突变体。1) RT-PCR检测TF mRNA的表达;2)酶免疫和流式细胞术检测细胞相关TF;3)比色法测定促凝剂活性;4)流式细胞术检测微颗粒相关TF。在气管内感染exou产生菌和-缺陷菌的小鼠肺提取物中,酶免疫分析也被用来评估细胞相关TF。gydF4y2Ba
感染野生型细菌的细胞具有较高水平的TF mRNA,细胞相关的TF表达,促凝血活性和释放的微粒相关的TF而不是感染突变体的细胞。用MAFP的细菌治疗明显降低了感染细胞TF的表达。来自野生型细菌感染的小鼠的肺样品表现出较高水平的细胞相关的TF和促凝血活性。gydF4y2Ba
目前的结果表明,ExoU可能通过诱导组织因子依赖的气道上皮细胞促凝活性参与肺损伤的发病机制。gydF4y2Ba
PgydF4y2Baseudomonas绿脓杆菌gydF4y2Ba是革兰氏阴性医院肺炎的主要原因之一。gydF4y2BaP.铜绿假单胞菌gydF4y2Ba医院获得的肺炎经常导致败血症,严重的临床综合征,其特征在于炎症和凝血途径的广义激活。gydF4y2Ba
在败血症期间,肺部是最常见的受累器官gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,特征性表现为肺泡和间质间室纤维蛋白沉积gydF4y2Ba2gydF4y2Ba.除了损害肺气交换屏障之外,肺泡凝血过程是有害的,因为中性粒细胞和成纤维细胞可以进一步通过凝血酶和纤维蛋白降解产物来激活,有助于进一步的组织损伤。此外,表面活性剂组分可以掺入聚合纤维蛋白中,随后的表面活性和肺泡不稳定性丧失gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba.然而,控制患者气道中纤维蛋白沉积的机制仍然明白很差。gydF4y2Ba
组织因子(TF);CD142)是凝血级联反应的主要生理启动因子,是一种完整的膜蛋白,表达于许多与血液不直接接触的细胞上。然而,在单核细胞和内皮细胞中,TF很容易被促炎细胞因子、细菌脂多糖(LPS)和许多其他促炎刺激物上调gydF4y2Ba4gydF4y2Ba,给予这些细胞孕激素表型。当在细胞表面上表达并结合因子VII时,TF是完全函数的,支持其对因子viia的变性激活。然后酶促TF-VIIA复合物引发下游凝血事件,其在凝血酶凝血酶转化为凝血酶中。凝血酶蛋白水解地切割纤维蛋白原,得到纤维蛋白单体,其聚合成生理血肿所需的稳定凝块。gydF4y2Ba
TF还存在于具有大的促凝血活性的人组织中,例如脑和胎盘,以及多种肺细胞,包括支气管肺泡巨噬细胞和肺泡和支气管上皮细胞gydF4y2Ba5gydF4y2Ba,gydF4y2Ba6gydF4y2Ba.已知肺泡细胞中的TF表达已被炎症刺激调节gydF4y2Ba4gydF4y2Ba,gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,但肺泡上皮细胞通过上调活性TF引发肺泡内凝血和纤维蛋白沉积的能力直到最近才被研究gydF4y2Ba8gydF4y2Ba.gydF4y2Ba
TF也可以从不同类型的细胞中释放出来,并作为一种可溶的液相蛋白在细胞外液中循环gydF4y2Ba9gydF4y2Ba或与微粒有关的gydF4y2Ba10gydF4y2Ba,gydF4y2Ba11gydF4y2Ba.微粒是从各种细胞类型的抗BLEBbing血浆膜脱落的囊泡。在体液中,它们构成可靠的细胞活化和/或损坏的标志。微粒在其表面上表现出阴离子磷脂,主要是磷脂酰丝氨酸,其提供促进凝固级联酶配合物的组装的催化表面。在健康个体的外周血中几乎无法检测到,促进在升高水平下循环的促凝血剂的微粒通常与血栓形成倾向相关gydF4y2Ba11gydF4y2Ba,gydF4y2Ba12gydF4y2Ba.与微粒相关的TF的良好良好的血栓形成性相比,可溶性流体相Tf的生理活性是尚不清楚的,因为TF需要与阴离子脂质的关联成为促凝血剂gydF4y2Ba13gydF4y2Ba.gydF4y2Ba
其中最突出的毒力因素gydF4y2BaP.铜绿假单胞菌gydF4y2Ba致病性是ExoU,一种具有磷脂酶A2 (PLA2)活性的毒素,可直接注射到真核细胞中gydF4y2Ba通过gydF4y2BaIII型分泌系统gydF4y2Ba14gydF4y2Ba.当前作者小组的先前研究强调了ExoU诱导大量游离花生四烯酸和二十烷酸释放的能力,并诱导气道细胞的强效炎症反应gydF4y2Ba15gydF4y2Ba,gydF4y2Ba16gydF4y2Ba.gydF4y2Ba
由Kurahashi进行的研究gydF4y2Ba等等。gydF4y2Ba17gydF4y2Ba表明ExoU在随后发生的脓毒症发病机制中发挥了关键作用gydF4y2BaP.铜绿假单胞菌gydF4y2Ba肺炎然而,ExoU激活动物气道凝血级联的能力尚未被研究。gydF4y2Ba
本研究探讨了ExoU是否会通过气道上皮呼吸细胞上调TF的表达,从而调节其促凝活性。目前的研究是由报道花生四烯酸和脂肪加氧酶和环加氧酶衍生的二十烷酸调节人单核细胞的tf依赖的促凝性能的研究进一步推动的gydF4y2Ba18gydF4y2Ba,gydF4y2Ba19gydF4y2Ba.gydF4y2Ba
材料和方法gydF4y2Ba
细菌菌株和培养条件gydF4y2Ba
实验室gydF4y2BaP.铜绿假单胞菌gydF4y2BaPA103应变及其外径缺陷PA103δgydF4y2BaexoUgydF4y2Ba突变体gydF4y2Ba15gydF4y2Ba在整个研究中使用。一个gydF4y2BaexoUgydF4y2Ba耗尽突变体,补充一个gydF4y2BaexoUgydF4y2Ba该基因在PLA2催化位点上具有位点特异性突变(PA103 ΔUT/S142A),该基因是a . Hauser(西北大学,芝加哥,IL,美国)的慷慨捐赠。gydF4y2Ba
细菌在37°C的Luria-Bertani培养液中温和搅拌培养14-16小时,离心收集并重悬在M-199细胞培养基(Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA)中,悬浮液在640 nm波长处的吸光度为0.1,对应于~ 10gydF4y2Ba8gydF4y2Ba菌落形成单位(CFU)·mLgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba.gydF4y2Ba
细胞培养与感染gydF4y2Ba
将来自BEAS-2B系的人支气管上皮细胞培养在含有10%胎牛血清、谷氨酰胺和抗生素的M-199细胞培养基(完全培养基)中。将融合培养物胰酶化,细胞悬浮在完全培养基中,24孔(0.4×10gydF4y2Ba5gydF4y2Ba细胞·好gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba),培养48 h。细胞以~ 100个细菌·细胞的多重感染被感染gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba.由于III型分泌系统的效应蛋白的易位依赖于细菌与宿主细胞的密切接触,因此将细菌离心1000 ×gydF4y2BaggydF4y2Ba37°C孵育1小时。细胞立即处理或用含庆大霉素300 μg·mL的培养基培养gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba不同时期。在一些试验中,在加入细胞培养物之前,用100 μM的胞质PLA2抑制剂甲基花生四烯酰氟膦酸盐(MAFP)处理细菌30分钟。gydF4y2Ba
RT-PCR检测TF mRNAgydF4y2Ba
使用QIAGENRNEASY试剂盒(QIAGEN,HILDEN,德国)从无感染(对照)或感染1小时的BEA-2B细胞中分离出总RNA。通过用上标的逆转录从总RNA合成cDNAgydF4y2BaTM值gydF4y2Ba根据制造商的说明,RT-PCR(Invitrogen,Carlsbad,CA)的第一链合成系统。对CDNA进行以下PCR条件:在95℃下变性2分钟;和30(TF)或25(β-肌动蛋白)在95℃下变性的循环45秒,在50℃下退火45秒并在72℃下延伸45秒。在最后一个循环之后进行5分钟的额外延伸步骤5分钟。反应中使用的引物是:5'-CCC Gaa CAG TTA ACC GGA AGA-3'(TF Sense);5'-GCT CCA ATG ATG标签AAT ATT TCT CTG A-3'(TF反义);5'-CCT CGC CTT TGC CGA TCC-3'(β-肌动蛋白意义)和5'-GGA TCT TCA TCA GGT AgT CAG TC-3'(β-肌动蛋白反义)。PCR产物在2%琼脂糖凝胶中进行电泳,使用Labimimage软件(Kaplan GmbH,Halle,德国)进行密度测定法。gydF4y2Ba
检测细胞相关TFgydF4y2Ba
Imubind组织因子ELISA试剂盒(美国诊断,斯坦福,CT,USA)用于量化来自感染1小时的BEA-2B细胞的提取物和上清液中的TF,并与含庆大霉素的培养基一起孵育2小时,为以及在肿瘤内接种后24小时的小鼠肺的提取物gydF4y2BaP.铜绿假单胞菌gydF4y2Ba暂停,根据制造商的说明。gydF4y2Ba
膜结合TF的检测gydF4y2Ba
感染1小时并用含庆大霉素的培养基孵育另外2小时的细胞培养物用0.05%EDTA脱离,用PBS中的4%多聚甲醛固定,与抗TF-荧光素异硫氰酸酯(FITC)孵育复杂(美国诊断)并用Facscalibur流式细胞仪进行分析(Becton Dickinson,Franklin Lakes,NJ,美国)。gydF4y2Ba
细胞相关的TF的功能相关性gydF4y2Ba
TF存在于细胞表面上的微膜,其具有混合的活性和加密蛋白质。虽然可以在未激活的细胞表面上检测到TF,但其完全的探测器活性不是。因此,使用两种不同的方法来研究EXOU是否会诱导气道细胞表现出促进剂活性。在两者中,细胞感染1小时,并与含庆大霉素的培养基一起孵育另外2小时。在第一种方法中,将无感染和感染的细胞与0.05%EDTA的微孔板孔中离聚,冲洗,悬浮在PBS和10中gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba将细胞与37分的人志愿者获得的合并柠檬酸血浆孵育gydF4y2BaogydF4y2BaC 2分钟。在加入25mm CaCl后,以血块形成所需的时间(肉眼检测)来测量血块时间gydF4y2Ba2gydF4y2Ba.gydF4y2Ba
在第二种方法中,在含有50mM Tris-HCl的缓冲液中,通过重复的冻土裂解控制和感染的细胞,在缓冲液中萃取100mM NaCl,0.1%Triton X-100,pH 7.4和TF的缓冲液中18小时在温和的搅拌下在4℃下。根据制造商的说明,用Actichrome TF活性套件(美国诊断)评估细胞裂解物中的促凝血活性。gydF4y2Ba
含tf微粒的检测gydF4y2Ba
从对照和来自感染1小时的培养物中的上清液被离心2小时的蛋白酰胺蛋白培养基处理以除去细胞碎片。上清液以17,500×进一步离心gydF4y2BaggydF4y2Ba在15°C下静置30分钟,获得微粒。用anti-TF-FITC和annexin V-Alexa Fluor 647复合物(Invitrogen)同时洗涤微丸30分钟,洗涤1次。微粒重悬在含1%牛血清白蛋白的PBS中,在FACScalibur流式细胞仪中分析1分钟。在侧向散射中,对脱落微粒对应的区域进行了门控gydF4y2Ba相对gydF4y2Ba根据制造商的说明,通过使用荧光珠的混合物作为参考,作为参考,作为参考,以覆盖微粒(0.5和0.9μm)和血小板(3.0μm;兆克; Biocytex,Marseille,Marseille,法国)。gydF4y2Ba
上清液促凝活性的检测gydF4y2Ba
细胞培养上清离心10分钟后清除细胞碎片(富集微颗粒上清)或进一步离心17500 ×gydF4y2BaggydF4y2Ba用发色测定(Actichrome TF活性试剂盒)评估30分钟(无颗粒上清液)。gydF4y2Ba
在活的有机体内gydF4y2Ba分析gydF4y2Ba
8-12周龄的瑞士雌性小鼠用氯胺酮(65 mg·kg)混合物麻醉gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)和木嗪(13 mg·kggydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)管理gydF4y2Bai.p。gydF4y2Ba, 10gydF4y2Ba4gydF4y2BaPA103或PA103δ的CFUgydF4y2BaexoUgydF4y2Ba将50μl的无LPS的盐水灌输到其棘轮中。在感染后24小时,由小鼠进行安乐死gydF4y2Bai.p。gydF4y2Ba注射戊巴比妥钠。然后用1ml PBS冲洗气道一次。然后用10 mL冷PBS灌注心脏和肺,并保持在-70℃,洗净肺中的血液gydF4y2BaogydF4y2BaC根据制造商的指示,对裂解缓冲液的抗裂解缓冲液,ELISA检测TF的检测和促凝血剂的评估,并使用Actichrome TF活性套件。所有动物实验均经国家里约热内卢(Rio de Janeiro,巴西)的动物伦理委员会批准。gydF4y2Ba
统计分析gydF4y2Ba
除非另有说明,否则使用单因素方差分析和Bonferroni检验进行统计分析,以确定组间显著的统计差异。p-值<0.05为显著性。gydF4y2Ba
结果gydF4y2Ba
ExoU通过增强TF的表达gydF4y2BaP.铜绿假单胞菌gydF4y2Ba来华的细胞gydF4y2Ba
进行RT-PCR以研究是否gydF4y2BaP.铜绿假单胞菌gydF4y2Ba感染和/或ExoU的产生可改变气道上皮细胞TF mRNA水平。数据如图1所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba表明,与无染色和PA103δ相比,TF转录物在BEA-2B细胞中患有组成型细胞,并且伴随散野野生型细菌的感染增加了mRNA的水平。gydF4y2BaexoUgydF4y2Ba来华的细胞。gydF4y2Ba
a)控制无感染细胞中组织因子(Tf)和β-肌动蛋白mRNA转录物的RT-PCR分析,并在感染的细胞中感染Quou-产生PA103细菌菌株和缺陷型突变体PA103ΔgydF4y2BaexoU,gydF4y2Ba具有代表性的四项分析进行了类似的结果。c) PA103和PA103Δ中TF/β-actin相对转录本密度的增加gydF4y2BaexoUgydF4y2Ba-感染细胞与对照细胞的关系数据以平均值±表示gydF4y2BasdgydF4y2Ba四种不同的检测方法。gydF4y2Ba
用PA103感染3 h增加TF蛋白的基线表达,如ELISA测定在对照培养物裂解物中检测到的。通过PA103感染细胞显着降低了PLA2抑制剂MAFP的细菌治疗显着降低了TF的表达。符合EXO欧PLA2活性在TF表达的调节中的作用,在感染细菌的细胞中检测到TF的不增加gydF4y2BaexoUgydF4y2Ba或PLA2催化活性位点突变(图2a)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba).用单克隆抗TF抗体标记的细胞进行荧光激活细胞分选分析,进一步证实了在pa103感染的细胞中TF的表达增强(图2b)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba).gydF4y2Ba
a)对照和对照的裂解液中组织因子(TF)的浓度gydF4y2Ba铜绿假单胞菌,gydF4y2Ba感染的气道上皮细胞。方框从第25 - 75个百分点延伸,水平线在中值处。胡须表示数据的范围。b)表达表面TF的细胞百分比,由荧光激活细胞分选分析确定。数据以平均值±表示gydF4y2BasdgydF4y2Ba两种不同的分析结果的三份副本。*: p < 0.05;**:与pa103感染细胞的结果相比,p<0.01。gydF4y2Ba
研究了PA103感染细胞增强TF表达的生物学相关性。如图3A所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba结果表明,感染exou产生菌的细胞的凝血时间明显低于对照组或感染exou的细胞,凝血前活性明显高于感染exou的细胞gydF4y2BaexoUgydF4y2Ba细菌突变体(图3AgydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba和b)。gydF4y2Ba
![图3-gydF4y2Ba](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/32/6/1591/F3.medium.gif)
凝血时间(a)和促凝剂活性(b)gydF4y2Ba铜绿假单胞菌,gydF4y2Ba感染的气道上皮细胞。数据以平均值±表示gydF4y2BasdgydF4y2Ba三种不同的测定方法的结果。* *: p < 0.01;***:与pa103感染细胞的结果相比,p<0.001。gydF4y2Ba
ExoU还增强了感染细胞中携带tf的微粒的释放gydF4y2Ba
通过ELISA检测ExoU调节TF从细胞膜释放的潜力。图4一gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba结果表明,感染pa103的细胞上清中TF浓度约为对照组和PA103Δ细胞上清的5倍gydF4y2BaexoUgydF4y2Ba来华的文化。exu产生菌的感染也增强了微粒子从细胞膜的释放(图4b)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba),在pa103感染细胞的上清液中,其表面表达TF的微粒百分比显著升高(图4c)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba).更重要的是,PA103感染后释放的微粒除了表现出表面TF外,还有更高比例的微粒与膜联蛋白V结合(图4d)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba),一种以与带负电荷的磷脂相互作用而闻名的蛋白质,如磷脂酰丝氨酸,它是凝血的必要脂类辅助因子之一。这些tf阳性/膜联蛋白v阳性微粒子可能提供一个催化表面,促进凝聚级联的酶复合物的组装。gydF4y2Ba
a)从对照和富含微粒上清液中的组织因子(Tf)的浓度gydF4y2Ba铜绿假单胞菌,gydF4y2Ba感染的气道上皮细胞。b)控制中的微粒数量和gydF4y2BaP.铜绿假单胞菌 -gydF4y2Ba感染的细胞培养上清液在荧光激活细胞分选分析中提交1分钟。c)TF阳性微粒的百分比;D)TF阳性/ annexinV阳性微粒的百分比对照和感染细胞的上清液中的阳性微粒。数据以平均值±表示gydF4y2BasdgydF4y2Ba两种分析的结果中有三种是重复的。*: p<0.05和***:p<0.001当对照和PA103ΔexoU-infected细胞的数据与感染pa103的细胞的结果进行比较时(a, c, d)。**:p<0.01当对照细胞和感染野生型细菌的细胞的结果进行比较时(b)。gydF4y2Ba
含TF的微粒,但不能溶解TF,占细胞培养上清液的促凝血活性gydF4y2Ba
由于出版了与可溶性同种型的贡献有关的相互冲突的结果gydF4y2Ba9gydF4y2Ba,gydF4y2Ba10gydF4y2Ba,gydF4y2Ba14gydF4y2Ba以及与细胞外液致血栓性相关的微颗粒全长TF,研究了每种微颗粒对气道上皮细胞上清促凝性的影响。图5gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba结果显示,与未感染的培养物相比,感染exu产生菌导致pa103感染细胞的富微颗粒上清液中TF活性增加了约1.8倍。在无微颗粒培养上清中评估ExoU的效果时,pa103感染培养上清中的血栓形成性从35.9±3.1 pM降至0.4±0.2 pM。在对照组和exou缺陷突变体感染的细胞上清中未检测到活性(数据未显示)。这些结果清楚地表明,含TF的微粒,而非可溶性TF,是细胞培养上清致血栓性的原因。gydF4y2Ba
![图5-gydF4y2Ba](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/32/6/1591/F5.medium.gif)
富含微粒富含对照上清液的促凝血活性gydF4y2Ba铜绿假单胞菌,gydF4y2Ba感染的气道上皮细胞。数据以平均值±表示gydF4y2BasdgydF4y2Ba两种分析的结果中有三种是重复的。***:与pa103感染培养物的结果相比,p<0.001。gydF4y2Ba
气管内exou产生菌感染小鼠的肺样本显示出更高的TF浓度和血栓形成性gydF4y2Ba
来确定生物学上的相关性gydF4y2Ba体外gydF4y2Ba结果,gydF4y2Ba体内gydF4y2Ba探讨ExoU对肺细胞TF表达的影响。如图6a所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba结果显示,产生exou的PA103菌株感染小鼠肺实质的TF浓度大约是exou缺陷菌感染小鼠肺实质的3倍。pa103感染肺实质的裂解液也表现出更高的促凝活性(图6b)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba),与中获得的数据一致gydF4y2Ba体外gydF4y2Ba化验。gydF4y2Ba
![图6 -gydF4y2Ba](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/32/6/1591/F6.medium.gif)
a)浓度的组织因子(tf)和b)从对照的肺裂解物中检测到的促凝血活性gydF4y2Ba铜绿假单胞菌,gydF4y2Ba受感染的小鼠。方框从第25 - 75个百分点延伸,水平线在中值处。晶须显示从用PA103(n = 10)或PA103δ感染的动物获得的数据范围gydF4y2BaexoUgydF4y2Ba(n = 13)。**: Mann-Whitney检验p<0.01。gydF4y2Ba
讨论gydF4y2Ba
目前的研究表明,ExoU能够通过激活TF表达的转录调节,诱导气道上皮细胞中的血栓形成特性,并增强受感染细胞中促凝剂微粒子的释放。目前的作者不知道任何之前的调查直接解决了这种可能性。自gydF4y2Ba体外gydF4y2Ba结果得到了pa103感染小鼠肺实质裂解物的类似发现的支持,目前的作者推测,这种能力可能有助于这种毒素的临床意义,被认为是一种高毒性的标志gydF4y2BaP.铜绿假单胞菌gydF4y2Ba从医院获得的肺炎患者中恢复的分离物gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba和菌血症gydF4y2Ba21gydF4y2Ba.gydF4y2Ba
与其他研究一致,显示BEA-2B气通道细胞表达TF mRNA和蛋白质。这种TF表达可能提供气道上皮细胞,其能力产生临时纤维蛋白基质,以便在支气管上皮损伤之后伤口愈合过程中的迁移,独立于血浆蛋白质gydF4y2Ba22gydF4y2Ba.因此,承载tf的气道细胞启动血栓形成被认为是快速初始修复过程的必要条件。血浆蛋白(包括纤维蛋白原)的外漏进入气道有利于凝血的潜在有害传播。移行纤维蛋白本身可能会产生有害影响,因为它提供了一种基质,纤维母细胞也可以在基质上迁移并产生胶原蛋白,从而加速肺纤维化。此外,纤维蛋白可以通过增加血管通透性和激活内皮细胞产生促炎细胞因子和其他介质来增强局部炎症反应。因此,含tf的气道细胞形成的局部纤维蛋白可能成为一种病理事件。事实上,纤维蛋白沉积在肺实质和气隙被认为是急性肺损伤和急性呼吸窘迫综合征的标志gydF4y2Ba23gydF4y2Ba.gydF4y2Ba
严重感染时的支气管肺泡促凝反应也被证明依赖于功能失调的局部抗凝途径(gydF4y2Ba例如gydF4y2Ba抗凝血酶和蛋白C系统)和纤维蛋白溶解活性,由高水平的纤溶酶原激活剂抑制剂-1和降低的纤溶酶原激活剂活性,如Choi和Co-Works所述gydF4y2Ba24gydF4y2Ba,gydF4y2Ba25gydF4y2Ba患有呼吸机的患者和大鼠的实验性肺炎。gydF4y2Ba
在目前的报告中,细胞感染了煎饼gydF4y2BaP.铜绿假单胞菌gydF4y2Ba应变表现出显着更高的TF含量。以前治疗细菌与MAFP,PLA2抑制剂,减少了它们显着上调Tf产生的能力,与Exou的磷脂酶活性一致。这些gydF4y2Ba体外gydF4y2Ba结果证实,pa103感染小鼠肺实质中TF浓度和促凝剂活性均显著高于pa103感染小鼠肺实质gydF4y2BaexoUgydF4y2Ba突变体。基于这些结果,可以推测通过细菌感染引发的TF的过度表达可以引发局部凝结,至少部分地促成严重的肺损伤和两种患者所述死亡率增加gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba和实验动物gydF4y2Ba17gydF4y2Ba随着肺炎引起的肺炎gydF4y2BaP.铜绿假单胞菌gydF4y2Ba菌株。gydF4y2Ba
除了在质膜上表达外,TF还可以与不同类型细胞在激活和/或损伤时释放的微颗粒相关循环。越来越多的证据表明,微粒子携带促炎细胞膜脂质和糖蛋白,证明了它们的细胞来源,可以转移到邻近或遥远的细胞,这些细胞携带适当的反受体作为配体。细胞效应取决于微粒子膜和细胞质的组成和靶细胞的性质,可以是细胞活化、增强单核细胞-内皮细胞的黏附性、血管功能障碍、诱导凋亡等gydF4y2Ba11gydF4y2Ba,gydF4y2Ba12gydF4y2Ba.微颗粒在炎症中的作用也得到了很好的证明。例如,微粒是分泌PLA2的底物的来源,用于生成溶血磷脂酸,一种有效的促炎介质和血小板激动剂。有趣的是,在败血症中,支气管肺泡灌洗液中PLA2活性水平的升高已被证明具有预后价值gydF4y2Ba26gydF4y2Ba.gydF4y2Ba
在本研究中,ExoU还被证明可以增加气道上皮细胞释放的TF-和磷脂酰丝氨酸微颗粒的数量和比例gydF4y2Ba体外gydF4y2Ba分析表明,这些含tf的微粒是促凝剂。可以想象,一个类似的gydF4y2Ba体内gydF4y2Ba微粒子释放的增加是ExoU增加血栓形成倾向的第二种机制gydF4y2BaP.铜绿假单胞菌 -gydF4y2Ba感染的气道上皮细胞。然而,由于微粒子具有传播广泛不同生物信息的潜力,exou诱导的微粒子发挥的病理生理作用可能不限于其促凝作用。例如,微粒子已被证明是一种快速的过氧化底物,并携带生物活性氧化磷脂,引发内皮细胞的特定反应gydF4y2Ba27gydF4y2Ba.令人兴奋的是,目前的作者已经证明了ExoU诱导pa103感染的内皮细胞细胞膜脂显著过氧化的能力gydF4y2Ba28gydF4y2Ba.增加氧化微粒的释放gydF4y2BaP.铜绿假单胞菌 -gydF4y2Ba感染的细胞可能有助于在过程中引发的炎症过程的进展。gydF4y2BaP.铜绿假单胞菌gydF4y2Ba感染。gydF4y2Ba
不同的人类病原体gydF4y2Ba29gydF4y2Ba,gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba已经被证明可以通过单核细胞和内皮细胞调节组织因子的表达,从而促进血管血栓形成,但据目前作者所知,这是第一个报告在气道上皮细胞中细菌上调组织因子的研究。然而,可以想象,ExoU同样可以增强内皮细胞的组织因子表达,并且这种ExoU能力在gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba菌血症可以作为促进败血症经常检测到的高凝状态的毒力因素。研究目前正在进行中检查这一假设。gydF4y2Ba
支持声明gydF4y2Ba
本研究得到了Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico(巴西利亚,巴西;470131/2006-3)和Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do里约热内卢de Janeiro(里约热内卢de Janeiro,巴西;E-26/100.587/2007和E-26/1000.417/2007)。gydF4y2Ba
感兴趣的语句gydF4y2Ba
没有宣布。gydF4y2Ba
致谢gydF4y2Ba
目前的作者谨感谢M.A. Pereira da Silva、M. Jones和C. Barbosa提供的技术援助。gydF4y2Ba
- 收到了gydF4y2Ba2008年6月7日。gydF4y2Ba
- 接受gydF4y2Ba2008年7月19日。gydF4y2Ba
- ©ERS期刊有限公司gydF4y2Ba
参考文献gydF4y2Ba
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