抽象gydF4y2Ba
肺泡蛋白沉积的特征是在远端空气腔内聚集表面活性剂样物质。由于溶酶体对从细胞环境中获取的大生物分子的降解起着关键作用,因此,推测氧化诱导的溶酶体破坏和随后的细胞死亡可能在疾病的发展中起作用。gydF4y2Ba
在本研究中,肺泡巨噬细胞,通过从诊断患有肺泡蛋白沉积症患者全肺灌洗收获,被示出为包含溶酶体内大量的未消化的材料,和相同的细胞器表现出增加的铁血黄素结合的铁的量。与鼠相比巨噬细胞样J774细胞(铁暴露与否),人巨噬细胞的状态是助氧化,gydF4y2Ba即。gydF4y2Ba巨噬细胞表现出抗氧化剂谷胱甘肽和大量可用于芬顿型化学铁的水平低。其结果是,当暴露于过氧化氢的生理浓度(在培养基中通过葡萄糖氧化酶生成的)macrophageal溶酶体是特别脆弱。这样的溶酶体破裂导致双方坏死和caspase-3的激活凋亡独立广泛的细胞死亡。gydF4y2Ba
考虑到铁催化氧化引起溶酶体破裂的潜在作用,以及随之而来的细胞杀伤为肺泡蛋白沉积症的病理和疾病进展,全肺灌洗可能早在其细胞化学染色显示含铁血黄素载货肺泡巨噬细胞大批的情况下考虑。gydF4y2Ba
肺泡蛋白沉积症(PAP)是一种罕见的肺部疾病gydF4y2Ba1gydF4y2Ba。PAP的特征是由磷脂和蛋白质组成的表面活性剂样物质的密集堆积,通常沉积在肺泡和细支气管gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba。PAP的主要形式是最常见的gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba。表面活性剂的减少macrophageal间隙由粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的活性降低引起的,由于中和抗体的存在对GM-CSFgydF4y2Ba2gydF4y2Ba,gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba。其它形式中,继发于恶性血液病或暴露于无机灰尘(gydF4y2Ba如。gydF4y2Ba,导致肺泡巨噬细胞(AMs)数量的减少和/或这些细胞的功能损伤来降解表面活性剂gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
溶酶体通过不断退化胞浆含铁元素发挥细胞的铁代谢至关重要的作用(gydF4y2Ba如。gydF4y2Ba线粒体和铁蛋白)以及从环境中吸收的大的生物分子gydF4y2Ba4gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba6gydF4y2Ba。降解产物(gydF4y2Ba即。gydF4y2Ba金属,氨基酸,单糖,gydF4y2Ba等等gydF4y2Ba)被输送到细胞质中重新使用gydF4y2Ba4gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba6gydF4y2Ba。由于溶酶体内存在高度还原性的环境,释放的铁主要以氧化还原活性状态存在于溶酶体内gydF4y2Ba7gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba9gydF4y2Ba。在过氧化氢的存在下(HgydF4y2Ba2gydF4y2BaOgydF4y2Ba2gydF4y2Ba)、铁gydF4y2Ba2 +gydF4y2Ba催化作用芬顿型化学,通过该羟基自由基损害溶酶体膜gydF4y2Ba10gydF4y2Ba,gydF4y2Ba11gydF4y2Ba。大量的溶酶体破坏导致坏死,而细胞凋亡则伴随更多的溶酶体渗漏gydF4y2Ba10gydF4y2Ba,gydF4y2Ba11gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
氧化诱导的巨噬细胞死亡是肺炎症和纤维化发展的一种机制gydF4y2Ba10gydF4y2Ba,gydF4y2Ba12gydF4y2Ba。透射电子显微镜(TEM)PAP-AMS的研究表明在降解过程中填充材料溶酶体丰盈gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba。事实上,papam被认为是死于过量的表面活性剂gydF4y2Ba13gydF4y2Ba。考虑PAP病理macrophageal溶酶体的关键作用,本作者假设,细胞死亡的氧化剂引起溶酶体途径可能是一些重要性。gydF4y2Ba
患者PRESENTATIONgydF4y2Ba
一名不吸烟的男性(22岁)因为常规胸片显示双侧浸润(其他方面正常)而被转到肺内科(林雪平大学医院,瑞典)。在高分辨率计算机断层扫描(HRCT)上,这些浸润物呈磨砂玻璃外观。患者无症状,既往无接触、用药或疾病史。除乳酸脱氢酶(LDH)轻度升高外,全血计数和化学分析均正常。肺功能正常(见表1)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
肺功能测试gydF4y2Ba
The patient performed 160% of predicted (350 W), but the alveolar–arterial oxygen tension difference (PgydF4y2BaA - A,OgydF4y2Ba2gydF4y2Ba)以最大工作效率(图1gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。支气管肺泡灌洗液细胞分类计数(BAL)流体正常,培养物(包括分支杆菌)均阴性,CD4 / CD8比率稍低和细胞学检查是没有炎症或肿瘤的迹象。支气管活检标本不诊断,而开放肺活检标本,由获得的视频胸腔镜,分别为PAP特性。在time, the patient experienced some shortness of breath with exercise but was otherwise asymptomatic, lung function and performance during exercise were preserved but a second HRCT (performed 13 months after the first one) demonstrated progression of infiltrates (fig. 2a⇓gydF4y2Ba)。因此全肺灌洗(WLL)如先前所述进行gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba。在全身麻醉下,独立的肺通气,右肺的混合物在37℃生理盐水(NS)输注。Tidal washing volume was 1,000 mL for each cycle. 23 L of NS were infused during chest percussion until clearing of the lavage effluent. Cultures were negative. The left lung was lavaged with 26 L of NS 4 weeks later. HRCT, performed 1 month after the second WLL, revealed a significant improvement (fig. 2b⇓gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
![图1 -gydF4y2Ba](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/33/3/673/F1.medium.gif)
动脉氧张力反应(gydF4y2BaPgydF4y2BaA,OgydF4y2Ba2gydF4y2Ba;•)和肺泡-动脉氧张力差(gydF4y2BaPgydF4y2BaA - A,OgydF4y2Ba2gydF4y2Ba;○)以全肺灌洗术前锻炼。在休息的值(R),的显著相比变化gydF4y2BaPgydF4y2BaA,OgydF4y2Ba2gydF4y2Ba和gydF4y2BaPgydF4y2BaA - A,OgydF4y2Ba2gydF4y2Ba在运动中变得明显。gydF4y2BaPgydF4y2BaA - A,OgydF4y2Ba2gydF4y2Ba>5.3 kPa is a criterion for when to proceed to whole-lung lavage3.gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
![图2 -gydF4y2Ba](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/33/3/673/F2.medium.gif)
胸部的高分辨率计算机断层扫描(HRCT)全肺灌洗(WLL)前后和b)进行的)。一个)预WLL HRCT节目片状带有叠加帧内和小叶间隔增厚地理毛玻璃衰减。多边形的外观,表示二次小叶,被称为“铺路石”。b)注意到了显著改善以下两肺WLL。gydF4y2Ba
材料和方法gydF4y2Ba
伦理思考gydF4y2Ba
该研究方案是由当地伦理委员会(瑞典林雪平)根据《赫尔辛基宣言》的指导方针批准的。在WLL之前获得完全知情同意,并获得书面同意以发表病史、放射学图像和研究结果。gydF4y2Ba
细胞培养和处理gydF4y2Ba
由于初始方法上的问题,该数据仅来自第二个WLL呈现导出。AMs, harvested from the recovery of the first cycle of lavage (performed without chest percussion), were filtered through a nylon filter (pore diameter 100 μm; Syntab Product AB, Malmö, Sweden), centrifuged (400×ggydF4y2Ba, 10分钟,4°C), PBS(4°C)冲洗。以小鼠巨噬细胞样组织细胞淋巴瘤(J774)细胞为对照。细胞在Dulbecco改良的Eagle培养基中培养(DMEM;补充10%胎牛血清(FBS), 100iu·mLgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba青霉素和100μg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba链霉素在标准培养条件下(37℃,5% CO加湿空气)gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
细胞接种于35mm培养皿中,PBS冲洗,贴附细胞(0.4×10)gydF4y2Ba6gydF4y2Ba细胞·菜gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)恢复标准培养36 h。将J774细胞暴露(或不暴露)于FeCl原液中gydF4y2Ba3.gydF4y2Baadded directly to the medium ∼8 h before oxidant challenge. In the medium, FeCl3.gydF4y2Ba形成水合磷酸铁复合物,被细胞吞噬并最终进入溶酶体。gydF4y2Ba
Cells were oxidatively stressed for 60 min at standard culture conditions by adding a stock solution of glucose oxidase (GO; Sigma-Aldrich Inc., St. Louis, MO, USA) directly to the culture medium. The concentration used generates a stable concentration of H2gydF4y2BaOgydF4y2Ba2gydF4y2Ba(∼40–60 μM), thus mimicking the conditions在活的有机体内gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
普鲁士蓝染色技术和硫化银法gydF4y2Ba
采用普鲁士蓝染色法评价血黄素结合非反应性铁(Fe)gydF4y2Ba3 +gydF4y2Ba)in PAP-AMs and J774 cells (the latter exposed to 0–100 µM FeCl3.gydF4y2Ba)gydF4y2Ba14gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
细胞排名使用以下规模铁血黄素的含量。0:没有颜色;1:晕在零件或具有或不具有单深颗粒整个细胞质蓝;2:在整个有或无轻微深蓝色颗粒(<50%)的细胞质的部分细胞质介质的颜色强度;3:深蓝色颗粒在细胞质中的主要(> 50%)的部分;或4:在整个细胞深蓝色颗粒gydF4y2Ba15gydF4y2Ba。甲铁血黄素评分(HS)中的溶液每100个细胞来计算。的0-20得分被视为低,21-100作为中间和> 100作为高gydF4y2Ba15gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
在对照实验中,将经普鲁士蓝染色的J774细胞(含铁或不含铁)与经溶酶体铁染色的J774细胞(含铁或不含铁)进行比较gydF4y2Ba2 +gydF4y2Ba)使用所述硫化银法(SSM)gydF4y2Ba9gydF4y2Ba,gydF4y2Ba16gydF4y2Ba。一个典型的溶酶体尺寸的银沉淀图案对应于溶酶体内的Fe-沉积物,如由TEMgydF4y2Ba16gydF4y2Ba,gydF4y2Ba17gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
还原型谷胱甘肽和总细胞铁的分析gydF4y2Ba
Samples for reduced glutathione (GSH) analysis were prepared by collecting the cells in 0.5 M HClO4gydF4y2Basupplemented with 1 mM EDTA. Following centrifugation (300×ggydF4y2Ba,10 min, 4°C), supernatants were used for assessment of intracellular GSH using high-performance liquid chromatography (HPLC)18gydF4y2Ba。用Z-8270极化塞曼原子吸收分光光度计(日立,京都,日本)和铁灯(243.3 nm)测定细胞裂解液中的铁。GSH和Fe浓度由标准曲线计算,并由每个样本的蛋白浓度归一化(蛋白以鸡蛋白蛋白为标准,用双肌球蛋白酸法测定)。gydF4y2Ba
溶酶体膜的完整性检测gydF4y2Ba
Acridine orange (AO; Gurr, Poole, Dorset, UK) is a metachromatic fluorophore and a lysosomotropic base (pKa = 10.3). It is retained in its charged form (AOH+gydF4y2Ba),主要是在次级溶酶体中(ph4 - 5)。当在完整的溶酶体内高度浓缩时,AO呈红色荧光。因此,溶酶体膜损伤被监测为AO红色荧光的减少gydF4y2Ba5gydF4y2Ba,gydF4y2Ba7gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
测定caspase-3的活化gydF4y2Ba
AMC(7-氨基-4-甲基香豆素)是由Ac-DEVD-AMC (Becton Dickinson, Mountain View, CA, USA)通过活性caspase-3样caspases释放出来的,利用Shimadzu RF-1501型荧光分光光度计(Shimadzu, Kyoto, Japan)在380 nm激发波长和435 nm发射波长下进行荧光分析。gydF4y2Ba
凋亡DNA和细胞形态的评价gydF4y2Ba
用碘化丙啶(PI;(美国密苏里州圣路易斯市西格马化学公司)gydF4y2Ba19gydF4y2Ba。施加相同的方法来评估低荧光PI染色的材料(二氧化硅颗粒和大的生物颗粒,例如表面活性剂)的量从该单元的内部/溶酶体vacuome释放以下细胞裂解。gydF4y2Ba
与凋亡或坏死形态的细胞的频率(gydF4y2Ba即。gydF4y2Ba细胞质出芽和固缩或片段化的细胞核和膜破裂或蜂窝/核溶胀,分别地)也被估计。gydF4y2Ba
统计分析gydF4y2Ba
结果作为平均值±gydF4y2BasdgydF4y2Ba。采用方差分析进行统计学比较。gydF4y2Ba
结果gydF4y2Ba
血铁蛋白结合的铁主要位于溶酶体内gydF4y2Ba
血红蛋白结合铁的AMs染色明显gydF4y2Ba3 +gydF4y2Ba(图3gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。事实上,所有的细胞都得到了3个或更多的分数,每100个细胞获得了>300的血黄素分数(HS)。同时染色J774对照细胞(gydF4y2Ba即。gydF4y2Ba阴性对照)仅表现出少量的含铁血黄素(HS <3)。暴露于增加的Fe的浓度(阳性对照)J774细胞显示铁血黄素结合的铁gydF4y2Ba3 +gydF4y2Ba以剂量依赖性的方式。Only J774 cells exposed to 100 μM FeCl3.gydF4y2Ba显示HS与AMs的培养范围相同。gydF4y2Ba
在肺泡蛋白沉积症肺泡巨噬细胞通过硫化物银方法:a)三价铁的Fe细胞化学示范使用普鲁士蓝技术,和b)的Fe亚铁中铁暴露的J774细胞。a)以对应于溶酶体(通常为肺泡蛋白核周分布普鲁士蓝粒度,肺泡巨噬细胞是非常大)。b)在的FeCl银沉淀在J774细胞gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba暴露(100μM) colocalise溶酶体(细胞发达20分钟)。没有对比染色使用。酒吧= 50μm规模。gydF4y2Ba
接下来,用SSM比较普鲁士蓝和银沉淀的染色模式。吞噬作用后,FeClgydF4y2Ba3.gydF4y2Ba施用到溶酶体,因此优先增加该细胞器内的Fe沉积物。Both Prussian blue granularity and silver precipitation were distributed within J774 cells in a way typical for lysosomes (fig. 3b⇑gydF4y2Ba使用SSM显示结果)和增加的剂量依赖性以下溶酶体铁装载用的FeClgydF4y2Ba3.gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
AM的溶酶体中含有大量的未降解材料gydF4y2Ba
从PAP-AMS的TEM研究gydF4y2Ba13gydF4y2Ba和二氧化硅 - 暴露的AMgydF4y2Ba20.gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba22gydF4y2Ba中,已知的是表面活性剂类中时材料的溶酶体降解受到损害。溶酶体vacuome变为通过累积未消化物质的量扩展gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba。在光学显微镜下,这种情况是由含有许多液泡的泡沫AMs所反映的(图4a)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。细胞裂解时,这样的材料被释放gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba进入肺泡空间gydF4y2Ba13gydF4y2Ba和gydF4y2Ba体外gydF4y2Ba进入培养基中gydF4y2Ba23gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
细胞内物质的评估。a)泡沫巨噬细胞含有大量空泡的光显微照片。b)肺泡蛋白沉积(肺泡巨噬细胞)和c) J774细胞(之前暴露于蛋白包被的二氧化硅颗粒)在碘化丙钠溶液中裂解后的细胞荧光图。与碘化丙钠染色DNA相反(如所示),来自破裂溶酶体的物质,gydF4y2Ba即。gydF4y2Ba磷脂和二氧化硅颗粒,表现为低的荧光事件(没有选通执行)的一个很大的部分。Scale bar = 50 μm.
在目前的实验环境中,当AMs在低渗PI溶液中溶解时,用细胞荧光测定法进行分析时,这一点很明显。事实上,papams(非氧化胁迫)表现出大量的低荧光粒子,这些粒子显然不是来自DNA(图4b)gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba)。在对照实验中,暴露于二氧化硅颗粒J774细胞表现出类似的流动cytometrical图案。在这些实验中,将细胞免受有害二氧化硅诱导的血浆膜损伤所保护蛋白质涂布在使用前的颗粒gydF4y2Ba23gydF4y2Ba。吞噬后,颗粒留在溶酶体内,当细胞被溶解时,颗粒被释放到PI溶液中(图4c)gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
AM的氧化还原平衡是亲氧化gydF4y2Ba
AMs中含有大量的Fe,支持了普鲁士蓝的研究(表2)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba),comparable with that of J774 cells exposed to 25–50 μM FeCl3.gydF4y2Bafor 8 h. The concentration of GSH was, on the other hand, much lower in AMs (table 2⇓gydF4y2Ba)。GSH清除自由基,并可以作为在谷胱甘肽过氧化物酶家族的辅助因子,通过^ hgydF4y2Ba2gydF4y2BaOgydF4y2Ba2gydF4y2Ba还原为HgydF4y2Ba2gydF4y2BaO.值得注意的是,在J774细胞GSH的细胞水平降低通过暴露于提高的Fe浓度,表明铁,gydF4y2Ba本身gydF4y2Ba,对细胞的抗氧化状态有很大的影响。gydF4y2Ba
细胞总Fe和还原型谷胱甘肽(GSH)肺泡巨噬细胞(AMS)和J774细胞gydF4y2Ba
低水平的谷胱甘肽和过量的铁可能会在细胞氧化剂和抗氧化剂之间建立一种微妙的平衡,从而达到促进氧化的状态。鉴于溶酶体内芬顿型化学反应主要依赖于H的流入gydF4y2Ba2gydF4y2BaOgydF4y2Ba2gydF4y2Ba(避免在胞质中降解)和可用溶酶体活性铁的量gydF4y2Ba7gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba11gydF4y2Ba,巨噬细胞溶酶体很容易受到氧化应激的影响。gydF4y2Ba
氧化应激导致溶酶体损伤和巨噬细胞死亡,而与caspase-3的激活无关gydF4y2Ba
通过评估发射的AO-诱导红色荧光,其正比于溶酶体vacuome的大小gydF4y2Ba16gydF4y2Ba, AMs的溶酶体间隔明显大于J774细胞(无论是否暴露于铁;图5gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。Upon oxidant exposure, AMs demonstrated pronounced lysosomal disruption, reflected by a decrease of AO red fluorescence during the first hour after completed oxidant challenge (fig. 5b⇓gydF4y2Ba)。J774细胞的溶酶体更稳定,但在铁负荷后变得脆弱(图5b)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。在凋亡的J774细胞中,在氧化后5小时caspase-3活性显著增加(图5c)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba),从而产生远远晚于溶酶体中断。在contrast, dying AMs did not exhibit caspase-3 activity (fig. 5c⇓gydF4y2Ba),很可能是因为细胞死亡主要是由于坏死。gydF4y2Ba
一个)溶酶体大小,b)中的溶酶体完整性和c)胱天蛋白酶-3激活的评估。J774细胞,预曝光(或不)的FeClgydF4y2Ba3.gydF4y2Bafor 8 h, and pulmonary alveolar proteinosis alveolar macrophages (PAP-AMs) were oxidatively stressed (or not) by a stable concentration of H2gydF4y2BaOgydF4y2Ba2gydF4y2Ba,generated by adding glucose oxidase to culture medium for 1 h, and then re-incubated at standard culture conditions until analysis. a) Lysosomal compartment size was estimated as the red fluorescence emitted from acridine orange (AO)-loaded intact lysosomes in nonoxidatively stressed cells and expressed in arbitrary units (AU). b) Oxidant-induced lysosomal membrane damage, appearing during the first h after ended oxidant challenge, was evaluated as the decrease of red AO fluorescence intensity (expressed as % of control). c) Change of caspase-3 activity from control (%) at 5 h after completed oxidative stress. Data are presented as mean±sdgydF4y2Ban≥2。两两比较采用方差分析。*:p < 0.05;* *:p < 0.01;* * *:p < 0.001;所有显著差异gydF4y2Ba与gydF4y2BaPAP-AMs。gydF4y2Ba
两种类型的细胞,在完成氧化后10-12小时凋亡细胞比较多,而在含有氧化应激的papam的培养皿中坏死细胞占多数(图6a)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。Regarding apoptosis, flow cytometric analysis of apoptotic DNA gave a similar result (fig. 6b⇓gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
细胞死亡测定。a) The frequency of cells with apoptotic or necrotic morphology was estimated by light microscope 10–12 h after completed oxidative stress. b) Assessment of the fraction of hypodiploid DNA from apoptotic cells was performed at 10 h after completed oxidative stress. Data are presented as mean±sdgydF4y2Ban≥2。两两比较采用方差分析。□:活细胞;▓:凋亡细胞;▪:坏死细胞。*:p < 0.05;* *:p < 0.01;* * *:p < 0.001;所有显著差异gydF4y2Ba与gydF4y2Ba氧化应激肺泡蛋白沉积症肺泡巨噬细胞(AMS)。gydF4y2Ba
显然,氧化剂诱导的细胞杀伤(频率和模式)发生在正比于溶酶体泄漏前述的幅度。这些意见与氧化剂挑战的J774细胞内凋亡级联正在发生的早期动力学研究线。与溶酶体内芬顿型化学开始(由在不存在或溶酶体靶向铁螯合剂的存在电子顺磁共振(EPR)进行评估),随之而来的溶酶体泄漏引起线粒体膜电位的损失和胱天蛋白酶的激活,最终导致DNA降解和凋亡形态gydF4y2Ba8gydF4y2Ba,gydF4y2Ba9gydF4y2Ba,gydF4y2Ba24gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
讨论gydF4y2Ba
一种细胞杀伤的溶酶体途径被认为在炎症性肺部疾病中起作用gydF4y2Ba10gydF4y2Ba,gydF4y2Ba12gydF4y2Ba但是,据目前作者所知,这一想法从未在人体AMs上测试过。本研究首次表明,取自一位PAP患者的AMs溶酶体对氧化应激非常敏感。明显的溶酶体分裂引起广泛的细胞死亡,主要是坏死。相反,J774细胞暴露于H后仅表现出中度溶酶体损伤gydF4y2Ba2gydF4y2BaOgydF4y2Ba2gydF4y2Ba,因此,细胞死亡主要是由于细胞凋亡。这种差异的部分原因是GSH在PAP-AMS非常低的水平说明,从而让更大量的^ hgydF4y2Ba2gydF4y2BaOgydF4y2Ba2gydF4y2Ba扩散进入溶酶体,用铁反应。gydF4y2Ba
然而,令人惊讶的是,papam被发现含有过量的与血红蛋白结合的溶酶体铁,进一步使溶酶体和细胞对氧化挑战敏感。由于所有的数据都来自第二轮肺水肿,因此可能会认为大量的含铁黄素的AMs是由肺泡腔出血引起的,而肺泡腔出血又是单肺通气时气压性创伤的结果。在目前的作者看来,这种可能性不大。本例患者未表现出任何wll后出血的临床或放射学征象。在亚临床肺出血的情况下,大部分(如果不是全部的话)含铁黄素的AMs会在两次手术之间的时间(4周)内被肺清除gydF4y2Ba25gydF4y2Ba。此外,papam - ams的HS值极高(>300),这一发现不太可能被解释为肺出血,因为只有表现为急性严重肺泡出血的情况,如血管炎和古德兰芝综合征,HS值才高于100gydF4y2Ba15gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
描述PAP患者含铁血黄素载货的AM先前的报道很少。从lysinuric蛋白不耐受患者获得AM的TEM研究,甚至罕见的条件与PAP样病理,揭示Fe的标记内macrophageal积累呈现gydF4y2Ba26gydF4y2Ba。马萨诸塞州总医院的案例记录提供了有趣的gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba意见gydF4y2Ba27gydF4y2Ba。一个42岁的老女住进了重症监护室,因为严重的呼吸困难。许多含铁血黄素载货的AM BAL液中被发现gydF4y2Ba27gydF4y2Ba。引起肺泡出血状况进行了彻底排除了,被开胸肺活检获得的PAP诊断gydF4y2Ba27gydF4y2Ba。最近,当我们正在完成我们自己的工作时,GhiogydF4y2Ba等。gydF4y2Ba28gydF4y2Ba据报道,Fe稳态在特发性PAP患者的肺中被严重破坏。在无细胞WLL液中发现铁、转铁蛋白、转铁蛋白受体、乳铁蛋白和铁蛋白的含量增加了几倍(n = 20)。gydF4y2Ba28gydF4y2Ba。在本结果一致,在PAP患者的AMS和肺组织中发现Fe和铁蛋白的过量gydF4y2Ba28gydF4y2Ba。因为在WLL流体抗坏血酸,尿酸和GSH的按压级别,金属催化的氧化应激被认为是参与PAP的机构gydF4y2Ba28gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
一段时间以来,本作者的组gydF4y2Ba5gydF4y2Ba,gydF4y2Ba9gydF4y2Ba和其他人gydF4y2Ba6gydF4y2Ba人认为铁从铁蛋白存储该铁蛋白释放需要蛋白质外壳的溶酶体降解。在次级溶酶体内铁血黄素的聚集的铁蛋白结果部分或不完全帧内溶酶体降解gydF4y2Ba29gydF4y2Ba。如果正常溶酶体降解是由大量的由肺泡巨噬吸收的溶酶体内的材料的损害,合乎逻辑的结果将是,含铁血黄素的阳性的AM由于肺泡空间内的累积材料的量增加而增加。因此,BAL流体的细胞学样品综述(从最初的支气管镜进行而疾病进展仍然是轻度)和发现,含铁血黄素载货AM数量是BAL远小于在WLL流体的流体。事实上,在BAL AM的HS为95,因而比(HS> 300)的AM在WLL的要低得多。评估疾病进展的这种方式,可以比传统方法更敏感,gydF4y2Ba即。gydF4y2Ba肺功能检查及HRCT。gydF4y2Ba
结论gydF4y2Ba
非常仍不知道关于肺泡蛋白沉积症的性质和预后。虽然全肺灌洗术是公认的治疗,它仍然是不明确的时候,进入这个过程,这种疗法的效果是对预后的东西。然而,众所周知的是,其中一些患者趋于恶化severly,最终发展肺纤维化。考虑到由Ghio研究的光本研究的结果gydF4y2Ba等。gydF4y2Ba28gydF4y2Ba因此,我们有理由认为,肺泡蛋白沉积的病理过程与铁催化氧化诱导的溶酶体破裂和随后的巨噬细胞杀伤有关。在支气管肺泡灌洗液中含血红蛋白的肺泡巨噬细胞数量所反映的临床环境中,溶酶体铁的评估可能是疾病进展和预后的一个标志。目前作者提出,当怀疑肺泡蛋白沉积症时,肺泡巨噬细胞常规染色检测血黄素,如果在支气管肺泡灌洗中发现含血黄素的肺泡巨噬细胞,考虑在疾病早期进行全肺灌洗。gydF4y2Ba
支持声明gydF4y2Ba
本研究财政上LIO研究基金(东约特兰省,瑞典),东南瑞典医学研究理事会和肺医学系和外科中心和肿瘤学(大学医院,林雪平,瑞典当地的拨款,支持;补助H.L. Persson).
感兴趣的语句gydF4y2Ba
无声明。gydF4y2Ba
致谢gydF4y2Ba
目前作者要感谢美国约翰逊(实验病理学分工,健康科学学院,林雪平,瑞典)的高度赞赏和优秀的技术援助,k . Ollinger(实验病理学分工),美国对A.K.姆尼尔,c . Sederholm和p . Jakobsson(肺医学系,林雪平,瑞典)对他们的帮助回顾本文之前提交。gydF4y2Ba
- 收到gydF4y2Ba2008年3月21日。gydF4y2Ba
- 接受gydF4y2Ba2008年8月19日。gydF4y2Ba
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