文摘gydF4y2Ba
持续提升阻塞性睡眠呼吸暂停综合症患者的氧化应激(群)可能有助于解释他们的心血管疾病的风险增加。我们测试的假设的值氧化应激增加在健康受试者群相比,紧密匹配的对照组。gydF4y2Ba
我们进行了前瞻性研究38受试者没有群和37群患者。血浆血管紧张素II (Ang)指数,血管内皮生长因子(VEGF),氧化低密度脂蛋白(oxLDL)和循环内皮前体细胞(cep)测定在群病人和匹配控制。外周血单核细胞(PBMCs)获得两组和内皮细胞培养检查对管形成的影响。gydF4y2Ba
群组显示水平的提高和II, VEGF, oxLDL cep证书,后被减少鼻持续正压通气(nCPAP)治疗。gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba,从群PBMCs组诱导管形成。Angⅱ、oxLDL Ang II-stimulated PBMCs诱导lectin-like oxLDL受体(LOX-1)表达和VEGF受体2激活内皮细胞,分别。gydF4y2Ba
这些观察结果表明一个重要的角色和二世和oxLDL-mediated LOX-1 upregulation在内皮细胞损伤患者群。gydF4y2Ba
阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(群)是一个非常普遍的障碍影响∼4%的成年人gydF4y2Ba1gydF4y2Ba。主要的物理障碍是心血管的发病率,和群是心血管疾病的一个独立危险因素,尤其是系统性动脉高血压gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,gydF4y2Ba3gydF4y2Ba,还冠状动脉疾病,充血性心脏衰竭、脑血管事件gydF4y2Ba4gydF4y2Ba。患者群,氧饱和度可能在apnoeic事件一再降低。著名的生理适应性反应的组织缺氧、缺血血管生成,新血管的形成和增加血液供应gydF4y2Ba5gydF4y2Ba。血管内皮生长因子(VEGF)调节多个内皮细胞(EC)功能包括有丝分裂发生、血管渗透性和血管的基调gydF4y2Ba6gydF4y2Ba,gydF4y2Ba7gydF4y2Ba。VEGF已被证明是调节血管紧张素II (Ang),促进ischaemia-induced血管再生gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba和gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba8gydF4y2Ba,gydF4y2Ba9gydF4y2Ba。众多报道表明,VEGF表达明显增加群患者的血浆gydF4y2Ba10gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba14gydF4y2Ba和由Angⅱ诱导外周血单核细胞(PBMCs)gydF4y2Ba10gydF4y2Ba。此外,Ang II上调LOX-1的表达,lectin-like清道夫受体在ECs氧化低密度脂蛋白(oxLDL)gydF4y2Ba15gydF4y2Ba。反过来也LOX-1上调Angⅱ受体的激活gydF4y2Ba16gydF4y2Ba。之间的正反馈循环LOX-1 Angⅱ受体激活和II-induced血管生成增加。众所周知,这些血管生成因素加强从循环内皮祖细胞的增殖和招聘(cep)的骨髓gydF4y2Ba15gydF4y2Ba。最近的研究提供了越来越多的证据表明,新血管的形成在产后生活并不能单独从萌芽已存在的血管,而且还涉及到招聘的ECs从骨髓祖细胞gydF4y2Ba16gydF4y2Ba。产后血管生成主要血管愈合反应有助于血管损伤或缺血通过剥蚀的过程快速endothelialisation船只和抵押品血管形成gydF4y2Ba16gydF4y2Ba。在这个过程中,CEPs受伤的网站和协同工作与现有成熟的ECsgydF4y2Ba16gydF4y2Ba。人们普遍同意,VEGF增加患者群,但血管生成和CEPs在群的作用还不清楚gydF4y2Ba17gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba19gydF4y2Ba。复发间歇低氧血在群可能诱导生成过多的活性氧(ROS),这可能最终导致内皮细胞损伤gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba反应与蛋白质、核酸和脂质。是否有确实增加氧化应激在群是有争议的gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba24gydF4y2Ba。这些相互矛盾的结果可能是由于几个因素包括群患者的并发症和药物的存在,这两个可以在测量氧化应激有重要影响。群可能cep的动员和氧化应激的一个特点。gydF4y2Ba
更容易地认识到这些因素的影响,必须做更多的研究,他们的影响和角色,获得结果可以更好的理解。因此,本研究的目的是测试假设等离子体水平的血管生成因子,cep和脂质过氧化增加健康受试者群与密切匹配的对照组相比是完全免费的,没有任何其他疾病。通过证明这个假设,我们可以展示一个基于群的部分机制,将有助于我们更好地理解许多因素造成这一疾病。gydF4y2Ba
材料和方法gydF4y2Ba
患者和对照组gydF4y2Ba
男性疑似群,睡眠相关症状(gydF4y2Ba即。gydF4y2Ba打鼾、呼吸暂停,日间极度嗜睡)和其他医学疾病,被认为是研究,岩手医科大学医院伦理委员会批准的寻求治疗的患者在他们的设施。潜在的病人被告知我们的愿望包括在我们的研究中,问他们愿意参与。验收后,受试者提供书面知情同意根据我们机构的道德协议(见在线补充数据)。gydF4y2Ba
测量和II, VEGF和oxLDLgydF4y2Ba
静脉血样来自受试者的肘前的最后每个睡眠研究(gydF4y2Ba即。gydF4y2Ba6)。进一步给出了程序在线补充数据。gydF4y2Ba
量化的cep证书gydF4y2Ba
我们研究了外周血的cep八最严重的群患者呼吸暂停/ hypopnoea指数(AHI)值> 60岁和8岁,身体质量指数(BMI)移植物对照组(见在线补充数据)。gydF4y2Ba
信使rna表达的逆转录酶聚合酶链反应和免疫印迹分析人类主动脉LOX-1 ECsgydF4y2Ba
人类主动脉ECs (HAECs)从Kurabo购买(日本大阪)和维护Humedia-EG2介质(Kurabo)根据制造商的指示。刺激HAECs提交逆转录酶聚合酶链反应(RT)和免疫印迹gydF4y2Ba25gydF4y2Ba(也看到在线补充数据)。gydF4y2Ba
的培养与人类脐静脉ECs或HAECs PBMCs治疗gydF4y2Ba
在共培养试验中,我们使用PBMCs获得八个严重的患者群和八岁——BMI-matched对照组。Heparinised静脉血离心机于1077年Histopaque(σ,东京,日本)在600 xgydF4y2BaggydF4y2Ba在室温下为20分钟。详细的协议PBMCs隔离已报道的其他地方gydF4y2Ba10gydF4y2Ba(见在线补充数据)。共培养实验进行24-well ThinCert细胞培养板插入系统(膜孔径为0.4μm直径增长领域的膜33.6毫米gydF4y2Ba2gydF4y2Ba他一一Bio-One Frickenhausen,德国)与HAECs或人类静脉ECs (HUVECs)镀井的底部。PBMCs (1×10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba或1×10gydF4y2Ba4gydF4y2Ba·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)在一夜之间被播种到之后插入和孵化在37°C, 5%的公司gydF4y2Ba2gydF4y2Ba在空气中表示时间。gydF4y2Ba
修改gydF4y2Ba体外gydF4y2Ba培养血管生成gydF4y2Ba
在体外gydF4y2Ba血管生成是评估capillary-like HUVECs人类培养结构的形成二倍体成纤维细胞(见在线补充数据)。实验过程后血管生成工具包提供的指令(Kurabo)。3天,PBMCs收集和RNA提取从PBMCs(见在线补充数据)。新PBMCs另一个病人被播种到插入新媒介,渴望24小时,然后反复刺激和pre-incubation紧随其后。这个过程被重复天5、7、9、11、13和15。在17天HUVECs提交应对染色(图1所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba也看到在线补充材料)。gydF4y2Ba
外周血单核细胞(PBMCs)共培养实验协议。PBMCs获得八个最严重的阻塞性睡眠呼吸暂停综合征患者或八个年龄和体重index-matched对照组。PBMCs从一个病人或健康控制镀上插入了2天。人类主动脉内皮细胞(HAECs)和静脉内皮细胞暴露于(通过传代形成细胞的血管紧张素II (Ang) + Ang II-stimulated PBMCs 17天。HUVECs受到免疫细胞化学(ICC)和HAECs提交后免疫印迹和免疫印迹- sensing最后PBMCs收集。Pt:阻塞性睡眠呼吸暂停患者;反对:健康控制主体;S:播种和饥饿;答:PBMCs和媒介。gydF4y2Ba
培养LOX-1表达式和VEGF受体2在HAECs磷酸化gydF4y2Ba
HAECs (1×10gydF4y2Ba5gydF4y2Ba)镀72 h在24-well板块分析之前,所以他们将50至60%汇合的时候PBMCs培养,而被播种到插入在第一天。更换PBMCs插入和介质,和孵化的条件和II,缬沙坦,或可溶性VEGF受体(VEGFR) 2,所述的程序gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba血管生成。17天,HAECs被提交给免疫印迹检测LOX-1蛋白表达(见在线补充数据)或检查使用- sensing VEGFR-2磷酸化蛋白免疫印迹的方法gydF4y2Ba26gydF4y2Ba(图1gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba也看到在线补充数据)。gydF4y2Ba
统计分析gydF4y2Ba
所有的数据表示为均值±gydF4y2Ba扫描电镜gydF4y2Ba。单向方差分析和gydF4y2Ba事后gydF4y2Ba测试是用来评估团体之间的统计学意义。还用于检查一个未配对t检验变化与对照组之间的群病人后测试数据正常的人口使用Kolmogorov-Smirnov测试。gydF4y2Ba
结果gydF4y2Ba
耐心,控制人口gydF4y2Ba
最初的77例检查,39岁的患者群。以来的两个受试者新诊断出患有哮喘和过敏性鼻炎的研究后,non-OSAS控制和群集团由38和37个人,分别。non-OSAS控制个人被告知群的临床特征,包括重要的日间极度嗜睡和打鼾,但证明没有客观的发现睡眠呼吸障碍多导睡眠图(PSG)的研究。的基线特征研究人口是表1所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba。两组在年龄和类似中度肥胖。你好和血氧定量法数据明显不同(p < 0.01),两组之间。没有受到任何其他医学障碍的临床证据,以及每个主题的详细的生化概要,包括肝脏和肾脏功能,心肌酶和静息心电图,都在正常范围内。最初的37个群患者招募,只有八个严重群患者使用gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba研究,因为他们有一个你好> 60岁患者控制类似的年龄和体重指数。gydF4y2Ba
人口、睡眠和对照组的临床资料和阻塞性睡眠呼吸暂停综合症(群)患者gydF4y2Ba
措施和二世,VEGF和oxLDLgydF4y2Ba
表2gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba本研究显示oxLDL的水平。与群总共29个合适的对象,他已同意可能持续正压通气(CPAP)治疗在接受诊断睡眠研究之前,被认为是。八个学科由于对CPAP辍学。剩下的29个受试者接受重复睡眠研究经过12周的治疗。都是评估症状和副作用,和客观的合规数据从设备下载。患者群,Angⅱ、VEGF和oxLDL明显高于控制和post-CPAP组(表2所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba;和二世和VEGF数据未显示)。在12周的CPAP疗法之后得到的29 CPAP-treated与群主题,所有三个数据点下降(表2gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba),但在其他观测参数没有明显的降低。gydF4y2Ba
特定的实验室数据对氧化低密度脂蛋白(oxLDL)和%循环内皮祖细胞(cep)gydF4y2Ba
从cep的数量gydF4y2Ba
在夜间缺氧和高浓度的Ang II和VEGF在患者的循环群强烈建议cep证书及其在骨髓干细胞来回应这些血管生成因素。白细胞从八最严重的患者群(你好> 60)和控制被用于实验的后续实验co-cultivation ECs。Flow-cytometric分析CD133的染色,CD34, CD202b (Tie-2)参与者的封闭CD45-negative细胞如表2所示gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba。患者群CD133∼三倍增加gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD34gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD202bgydF4y2Ba+gydF4y2BaCD45gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba细胞与对照组相比,他们的血液循环。CPAP治疗后,这种增加是抑制(表2所示gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
的影响和二世和oxLDL HAECs LOX-1表达式gydF4y2Ba
表明等离子体水平的增加和II, VEGF和oxLDL群病人,我们接下来研究这些分子之间的相互作用和HAECsgydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba。我们评估是否oxLDL HAECs Angⅱ诱导LOX-1表达式。gydF4y2Ba
如图2所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba低浓度的oxLDL导致LOX-1的表达。最大LOX-1表达发生在响应μg·10毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2BaoxLDL浓度(图2所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。相比之下,我们发现LOX-1表达增加浓度的方式回应Angⅱ(图3所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。基于这些发现,我们选择的最大有效浓度oxLDL(10μg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)和《II(100海里)的后续实验。HAECs刺激oxLDL-1和Angⅱ时,LOX-1的水平(mRNA和蛋白)是添加剂对刺激(图4所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
内皮受体lectin-like氧化低密度脂蛋白(oxLDL)对人类主动脉内皮细胞(HAECs)。3天的孵化与oxLDL HAECs调节的表达lectin-like oxLDL受体(LOX-1) mRNA。oxLDLμg·10毫升的浓度gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba增加LOX-1 HAECs mRNA的表达。相比之下,100年μg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba少oxLDL诱导表达。LOX-1蛋白质带密度被管家基因β-actin正常化。五个独立的代表。b)汇总的数据(意味着±gydF4y2Ba扫描电镜gydF4y2Ba)从五个实验。*:p < 0.05gydF4y2Ba与gydF4y2Ba0μg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
![图3 -gydF4y2Ba](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/34/6/1390/F3.medium.gif)
Lectin-like氧化低密度脂蛋白受体(oxLDL) (LOX-1)蛋白表达对人类主动脉内皮细胞(HAECs)。孵化的HAECs血管紧张素II (Ang) 3天浓度的方式增加LOX-1 mRNA的表达。五个独立的代表。b)汇总的数据(意味着±gydF4y2Ba扫描电镜gydF4y2Ba)从五个实验。*:p < 0.05gydF4y2Ba与gydF4y2Ba0纳米。gydF4y2Ba
Upregulation lectin-like的氧化低密度脂蛋白受体(oxLDL) (LOX-1) mRNA和蛋白表达oxLDL和血管紧张素II (Ang)在人类主动脉内皮细胞(HAECs)。治疗oxLDL或Angⅱ造成适度增加在HAECs LOX-1表达式。oxLDL和Angⅱ的存在增加了LOX-1累积的方式表达。五个独立的代表。b和c)的总结数据(意味着±gydF4y2Ba扫描电镜gydF4y2Ba)从5实验。*:p < 0.05gydF4y2Ba与gydF4y2Ba控制。gydF4y2Ba
PBMCs群患者诱发管形成gydF4y2Ba通过gydF4y2BaVEGFR-2磷酸化在修改后的培养系统gydF4y2Ba
LOX-1表达的增加和二世让我们确定这个分子影响ECs的另一个已知的反应,血管生成。和二世以来报道从PBMCs能够诱导VEGFgydF4y2Ba10gydF4y2Ba,我们认为它可能管形成依赖于从PBMCs VEGF可能分泌。为了测试这个想法,我们将插入血管生成工具和播种PBMCs到插入检测他们的交互与HUVECs(图1所示gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba)。如图5所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba和b,管形成通过co-cultivation PBMCs时显著增加PBMCs受到盎IIgydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba并获得群病人而小管形成时观察到的细胞暴露于媒体。PBMCs从群获得患者的这种效应会缺席的可溶性VEGFR (sVEGFR) 2。类似的结果在mRNA水平的观察VEGF165 PBMCs受到rt - pcr(数据没有显示)。值得注意的是,sVEGFR-2不干扰VEGF165 PBMCs mRNA的表达。这些结果表明,VEGF从群PBMCs有助于管形成。PBMCs从群患者VEGF表达,培养PBMCs从正常受试者进一步分析了管状的形成和磷酸化ECs实验治疗后Angⅱ。如图6所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba和b, PBMCs管形成的控制与Angⅱ刺激后显著增加。Angⅱ的生物效应是由Angⅱ受体的激活,其中两个主要的亚型,AT1R和AT2R,已确定。大部分的心血管的行为和二世一直归因于AT1R激活。预处理AT1R阻滞剂缬沙坦和sVEGFR-2明显抑制引起的管形成PBMCs从对照组Angⅱ刺激。管形成的抑制这些因素并不是由于任何预期的毒性,因为非特异性免疫球蛋白G (Ig)不能抑制管形成。这些结果清楚地表明,管形成诱导的PBMCs控制是高度依赖于VEGF的分泌。确定了Angⅱ在PBMCs induced-VEGF EC管形成的诱导物,我们接下来试图确认激活VEGFR-2 HAECs。之前就有报道称,酪氨酸残基在VEGFR-2 autophosphorylated VEGF, VEGFR-2在酪氨酸的磷酸化gydF4y2Ba1214年gydF4y2Ba有一个核心作用在这种受体的激活。从群PBMCs导致VEGFR-2在酪氨酸的磷酸化存在剂量依赖的相关性gydF4y2Ba1214年gydF4y2Ba(p < 0.05;图5gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba和c)。sVEGFR-2强烈的刺激效应抑制磷酸化的VEGFR-2 HAECs(图5gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba和c)。按照我们的管状形成数据,增加受体磷酸化反应发生在与Ang co-cultivation II-stimulated PBMCs或VEGF刺激(图6gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba和c;p < 0.05)。预处理与缬沙坦和sVEGFR-2但不是特异性的免疫球蛋白,明显抑制Angⅱ——刺激PBMCs VEGFR-2磷酸化。这些管状——形成了ECs LOX-1蛋白表达增加(图6gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。因此,我们得出结论,Angⅱ诱导VEGFgydF4y2Ba通过gydF4y2BaPBMCs AT1R,导致增加管形成和LOX-1蛋白的表达。gydF4y2Ba
外周血单核细胞(PBMCs)阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(群)诱发管形成和酪氨酸的磷酸化gydF4y2Ba1214年gydF4y2Ba血管内皮生长因子受体(VEGFR) 2。)人类主动脉内皮细胞(HAECs)孵化与媒体(-)或单独培养1×10gydF4y2Ba6gydF4y2BaPBMCs控制或1×10gydF4y2Ba4gydF4y2Ba和1×10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba的PBMCs群病人为17天。PBMCs和介质取代PBMCs每3天从另一个病人的新媒介。在17天,人类脐静脉内皮细胞固定和提交(通过传代形成细胞免疫染色对HUVECs anti-CD31抗体检测gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba血管生成,评估capillary-like HUVECs PBMCs培养结构的形成。酒吧= 100μm规模。17天,HAECs也是固定的,报西方墨点法- sensing VEGFR-2和磷酸化VEGFR-2 Li-Cor漫游系统(美国东北Li-Cor生物科学,林肯)。插入和介质的更换PBMCs管形成的过程中所描述的系统。图像表示两个颜色- sensing 24-well西方墨点法与800(绿色)和700(红色)通道检测总VEGFR-2(正常化)和磷酸化VEGFR-2,分别。通道1和2:内皮细胞(ECs)只有在培养基培养(巷1没有anti-VEGFR-2抗体是一种消极控制);巷3:培养PBMCs 1×10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba从对照组;巷4:培养PBMCs 1×10gydF4y2Ba4gydF4y2Ba从群;巷5和6:培养PBMCs 1×10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba从群(巷6:孵化与可溶VEGFR-2)的形式。b)十个不同领域从井里被随机选中,和管形成由Chalkley评估和量化计算方法。从群PBMCs增加了管HUVECs的形成。抑制了PBMC-mediated增加管形成可溶性形式的VEGFR-2 (sVEGFR-2)。c)免疫印迹显示- sensing VEGFR-2磷酸化是低HAECs PBMCs培养从控制但显著增加HAECs PBMCs培养来自群的方式依赖于PBMCs的数量。这与可溶性VEGFR-2增加抑制了孵化。磷酸化VEGFR-2总VEGFR-2正常化的表达式。引起的褶皱增加磷酸化VEGFR-2 PBMCs计算相比之下的磷酸化VEGFR-2 HAECs PBMCs培养从控制。数据表示为均值±gydF4y2Ba扫描电镜gydF4y2Ba。*:p < 0.05与控制。gydF4y2Ba
血管紧张素II (Ang)和血管内皮生长因子(VEGF)和II-stimulated外周血单核细胞(PBMCs)诱发管形成,表达lectin-like氧化低密度脂蛋白受体(LOX-1)和酪氨酸的磷酸化gydF4y2Ba1214年gydF4y2BaVEGF受体(VEGFR) 2。一)中所描述的实验过程图5的传奇gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba。17天,人类脐静脉内皮细胞固定和提交(通过传代形成细胞免疫染色HUVECs anti-CD31抗体的检测gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba血管生成,评估capillary-like HUVECs PBMCs培养结构的形成。酒吧= 100μm规模。17天,人类主动脉内皮细胞(HAECs)提交免疫印迹LOX-1表达式。包含β-mercaptoethanol HAECs提取样本内缓冲。10μg蛋白质被加载在sds - page,转移到硝化纤维,并通过免疫印迹分析。注意标志着HAECs LOX-1增加蛋白质和培养II-stimulated PBMCs。孵化的HAECs缬沙坦(Val),但不可溶性VEGFR (sVEGFR) 2、抑制和II-stimulated PBMCs-induced LOX-1蛋白质的表达。17天,HAECs也是固定的,报西方墨点法- sensing VEGFR-2和磷酸化VEGFR-2 Li-Cor漫游系统(美国东北Li-Cor生物科学,林肯)。更换PBMCs插入和介质中描述管形成体系的过程。图像表示两个颜色- sensing 24-well西方墨点法与800(绿色)和700(红色)通道检测总VEGFR-2(正常化)和磷酸化VEGFR-2,分别(底部)。 Lane 1: Endothelial cells (ECs) were co-cultured with PBMCs from obstructive sleep apnoea syndrome (OSAS); Lane 2–5: co-cultured with Ang II-stimulated PBMCs from control in the presence of Ang II (Lane 3: pre-treatment with immunoglobulin (Ig) G as a control; Lane 4: pre-treatment with Val; Lane 5: pre-treatment with sVEGFR-2; Lane 6: ECs were cultured only in medium in the presence of VEGF as a positive control. b) Ten different fields from the well were randomly selected, and tube formation was evaluated and quantified by the Chalkley counting method. Ang II-stimulated PBMCs from control increased tube formation of HUVECs. PBMCs-mediated increased tube formation was inhibited by Val and the sVEGFR-2 pre-treatment. c) In-cell western blotting showed that the phosphorylated VEGFR-2 was low in HAECs co-cultured with PBMCs from control (fig. 5⇑gydF4y2Ba),但在HAECs明显提高和培养II-stimulated PBMCs从控制与群。增加被孵化Val和sVEGFR-2镇压。磷酸化VEGFR-2总VEGFR-2正常化的表达式。褶皱增加引起的磷酸化和II-stimulated PBMCs或VEGF计算相比HAECs PBMCs培养从群的磷酸化。数据表示为±gydF4y2Ba扫描电镜gydF4y2Ba。*:p < 0.05与群相比,Val和sVEGFR-2。gydF4y2Ba
讨论gydF4y2Ba
几个新发现发表的这项研究。首先,我们展示了增强血管生成,血管生成和脂质过氧化反应,oxLDL群患者相比,控制,由CPAP治疗逆转。其次,我们已经表明,oxLDL ECs Angⅱ诱导LOX-1表达式。最后,我们表明,Angⅱ诱导EC管形成,表达LOX-1,gydF4y2Ba通过gydF4y2BaPBMCs。gydF4y2Ba
我们的gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba研究与先前的研究相比有许多优点。我们在选择科目排除吸烟者照顾,任何人与心血管或其他医学疾病,或服用任何药物。此外,我们排除受试者有晒伤,因为即使生理剂量的紫外线辐射管理超过300 W·mgydF4y2Ba−2gydF4y2Ba先前已被证明能够诱导氧化损伤蛋白在人类皮肤成纤维细胞gydF4y2Ba27gydF4y2Ba。因此,研究人口允许评估ROS和群之间的关系没有潜在的混杂因素的影响。gydF4y2Ba
炎症在动脉粥样硬化的发展的作用。一旦激活各种刺激(gydF4y2Ba如。gydF4y2Ba低密度脂蛋白胆固醇、损伤或感染)、活性氧氧化脂质,损伤细胞膜,创建一个炎性环境与变性强有力的血管舒张药物种一氧化氮gydF4y2Ba28gydF4y2Ba,gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba。低密度脂蛋白是通常被认为是重要的在动脉粥样硬化的发展及其atherogenicity可能是由于氧化修饰,oxLDLgydF4y2Ba30.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba31日gydF4y2Ba。因为低密度脂蛋白氧化的影响下超氧化物和纳入巨噬细胞,形成泡沫细胞,我们提议重复缺氧/复氧可以促进自由基的生产。同时,Ang二世是ROS生成证明是一个强有力的刺激gydF4y2Ba32gydF4y2Ba增加在群患者与正常对照组相比在这项研究中。我们的研究结果与MØller一致gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba33gydF4y2Ba。他们已经表明,未经处理的群与系统性的upregulation angiotensin-aldosterone系统,改善长期夜间低氧血的CPAP降低血压(BP)。有趣的是,这减少英国石油公司有密切关系的减少血浆肾素和二和浓度。李的研究gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba34gydF4y2Ba,gydF4y2Ba35gydF4y2Ba表明oxLDL Angⅱ一氧化氮生成减少,增加脂质过氧化和乳酸脱氢酶释放在培养人类冠状动脉ECs。因此,很可能和二世和oxLDL动脉粥样化形成的关键因素。cep证书可能发挥作用在内皮维护,被卷入re-endothelialisation和neovascularisation。最近的研究表明,cep证书纳入新的和现有的血管在许多病理条件,包括肿瘤vascularisation和心肌缺血,cep升高,动脉粥样硬化等作为炎性疾病的生物标记物gydF4y2Ba36gydF4y2Ba和脑血管疾病gydF4y2Ba37gydF4y2Ba。事实上,它已经表明,内皮和cep证书的数量内膜与的大小存在慢性阻塞性肺疾病患者的缺氧gydF4y2Ba38gydF4y2Ba。沃纳gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba39gydF4y2Ba已经证明降低冠状动脉疾病患者的内皮祖细胞预测增加心血管事件的发生。他们还表明,使用小鼠模型CEPs还导致血管病变形成诱导平滑肌细胞增殖和血管内膜形成血管损伤的网站gydF4y2Ba40gydF4y2Ba。因此,cep证书可能会对受伤血管起到相反的作用。生长因子之间的不平衡,促进内皮功能的中断和氧化应激产生的间歇性低氧血,可以确定cep的命运。几组报道减少或没有cep证书的数量差异控制和患者群gydF4y2Ba17gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba19gydF4y2Ba。一个可能的原因的差异可能是由于不同的研究群体和方法。他们的人口控制和患者群包括女性受试者。因为一些报告表明,月经周期的影响影响cep证书的数量和功能gydF4y2Ba41gydF4y2Ba,gydF4y2Ba42gydF4y2Ba,我们只招收男性患者和排除的周期性动员cep的可能性。此外,由于它还建议使用CD133,血管EC标记和CD34结合量化的可行性标记内皮祖细胞在血液里gydF4y2Ba43gydF4y2Ba,我们使用这三个抗体和CD45检测cep证书。在我们的环境中,VEGF和CEPs也增加群患者与健康对照组相比,支持re-endothelialised的概念和neovascularised环境群病人。因为有CPAP干预在我们的研究中,提供了进一步的证据群与内皮功能障碍之间的关系,证明apnoea-related缺氧的治疗可以减少氧化应激和血管生成因素,我们目前的数据gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba支持认为氧化应激、pro-arteriosclerosis和缺陷re-endothelialisation可能有助于描述患者群。gydF4y2Ba
鉴于这种临床数据,gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba实验针对检测和二世的交互,oxLDL, PBMCs和ECs。许多研究表明LOX-1促进oxLDL的吸收和调节的生物效应gydF4y2Ba44gydF4y2Ba,gydF4y2Ba45gydF4y2Ba。KataokagydF4y2Baet al。gydF4y2Ba46gydF4y2Ba表明LOX-1调节动脉粥样硬化组织于人类。在目前的研究中,LOX-1的表情被oxLDL调节,Angⅱ(图4所示gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba)。这些观察结果有重要意义对EC受伤的传播和二世和oxLDL的存在。另一项研究来自我们的实验室gydF4y2Ba10gydF4y2Ba表明,VEGF表达PBMCs从群患者获得感应,至少在某种程度上,通过增加和二世。VEGF结合两个酪氨酸激酶受体血管ECs, VEGFR-1 / Flt-1和VEGFR-2 / KDR / Flk-1。VEGFR-2是最重要的生态系统的VEGF受体的成年人。它调节EC迁移、增殖和生存gydF4y2Ba47gydF4y2Ba。绑定后VEGF, VEGFR-2 dimerises和经历自身磷酸化酪氨酸残基在其胞质部分。我们假定Angⅱ的增加可能提高VEGF表达和管形成gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba酪氨酸的磷酸化gydF4y2Ba1214年gydF4y2BaVEGFR-2之内。事实上,我们的研究表明,Ang II-induced管形成依赖于从PBMCs分泌VEGF,酪氨酸的磷酸化gydF4y2Ba1214年gydF4y2Ba在VEGFR-2出现在EC管形成对VEGF的回应。gydF4y2Ba
总之,我们证明了Angⅱ、VEGF、oxLDL CEPs群患者的外周血中增加。我们还观察到血管生成增加当PBMCs培养获得群病人,这是与LOX-1的表达有关。这些发现表明,复发间歇低氧血可能诱导内皮修复和动脉粥样硬化的一个持续的过程。Angⅱ受体阻滞剂和鼻CPAP治疗最终可能代表一个强有力的战略群患者的血管疾病的临床治疗。gydF4y2Ba
感兴趣的语句gydF4y2Ba
没有宣布。gydF4y2Ba
确认gydF4y2Ba
目前作者要感谢参与这些研究研究对象和承认肺医学研究小组人员提供的宝贵援助。我们还要感谢N.N. Jarjour, W.W.会(过敏、肺和急救护理部分,威斯康辛大学麦迪逊,WI,美国)和聚合度白色(布莱根妇女医院、哈佛医学院、波士顿,MA,美国对他们有用的评论。gydF4y2Ba
脚注gydF4y2Ba
可以从本文的补充材料gydF4y2Bawww.www.qdcxjkg.comgydF4y2Ba
- 收到了gydF4y2Ba2009年1月20日。gydF4y2Ba
- 接受gydF4y2Ba2009年5月7日。gydF4y2Ba
- ©人期刊有限公司gydF4y2Ba
引用gydF4y2Ba
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