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肺动脉高压(PAH)是一种罕见的疾病,常导致右心衰竭和过早死亡1。PAH是特发性的(IPAH)、遗传性的,或与结缔组织疾病(CTD)等疾病有关。2。IPAH的预后仍然很差,尽管目前的治疗方案改善了患者的生存。因此,阐明IPAH的病理生理学对于发现新的治疗方法是重要的。炎症和免疫反应与IPAH的病理生理有关。2005年,Tambyet al。3.描述了抗内皮细胞抗体(AECA)在IPAH中的存在,指出体液免疫的参与。AECA是一个异质的自身抗体家族,能够与不同的内皮细胞(EC)结构反应4。在肺动脉高压中,肺EC功能障碍被认为是疾病开始和进展的关键因素5。系统性硬化症(SSc)是自身免疫性PAH的典型,10-15%的患者会发展为PAH6。有趣的是,在SSc中,靶向细胞表面抗原的免疫球蛋白G AECA确实被证明会引起EC功能障碍7,8。因此,IgG aaca诱导的内皮功能障碍可能是IPAH的起始事件。IgG自身抗体被认为是多种自身免疫性疾病的致病因素,而IgM自身抗体被认为是这些疾病的保护因素9。
关于AECA的病理生理作用,重要的是确定AECA是否与ec表面抗原反应。为了证实和进一步研究体液免疫系统在IPAH中的作用,我们采用基于活人脐静脉EC (HUVEC)的细胞酶联免疫吸附试验(cell-based ELISA)研究IgG的流行情况,以及IgM AECA靶向细胞表面EC抗原的流行情况。
我们筛选了5个研究小组以确定是否存在AECA。1) IPAH患者29例;平均肺动脉压(P̄巴勒斯坦权力机构)经右心导管插管测量为45.5毫米汞柱。2) ctd相关PAH患者18例(SSc 14例,系统性红斑狼疮2例,混合性结缔组织病2例);P̄巴勒斯坦权力机构右心导管测量为42.5 mmHg;全肺容量(TLC) >为预测的70%。3)无肺动脉高压SSc 51例(弥漫性SSc 9例,局限性SSc 42例);右心室收缩压< 35mmhg,超声心动图估计;TLC pred > 70%。4) 40例伴血管受累的2型糖尿病患者。5) 40个健康的人。ctd相关的多环芳烃患者和无多环芳烃的SSc患者被纳入已知的免疫病理参与的比较队列。糖尿病患者作为已知血管功能障碍的对照。纳入健康个体以确定最佳的AECA阳性临界值。 All subjects gave their informed consent prior to participation. Age was similar in all five study cohorts (p = 0.18). Previous use of immunosuppressive drugs occurred in four out of 18 CTD-associated PAH patients as compared with 14 out of 51 in SSc and zero out of 29 in IPAH patients.
如前所述进行HUVEC的分离和培养10。实验在3和5传代间用融合HUVEC单层进行。HUVEC单层呈典型的鹅卵石状ECs形态。流式细胞术显示HUVEC表型为ECs: CD31+(96.5%)、CD146+ (98.6%),Ulex europaeus凝集素阳性(99.3%),血管性血友病因子阳性(98.9%),CD90-阳性(0.3%)。
采用未固定HUVEC的细胞elisa检测特异性靶向ec表面抗原的AECA10。实验进行了三次,一式三份。根据IPAH队列与健康人群的光密度(OD)值,使用接受者工作特征曲线分析计算截止点。如果OD值分别为>0.322和0.137,则认为IgG和IgM AECA阳性。HUVEC酶联免疫吸附试验的检测内和检测间变异系数分别为5.15%和19.89%。HUVEC ELISA的平均kappa一致性值为0.87 (p<0.0001)。
在IPAH队列中IgG AECA患病率为62.1%(29例中的18例),而在ctd相关的多环芳烃组中为77.8%(18例中的14例),而在SSc中不存在多环芳烃组中为43.1%(51例中的23例)(表1)⇓)。IPAH组的IgG AECA患病率与ctd相关的多环芳烃组和无多环芳烃的SSc组没有显著差异(p = 0.261和p = 0.104)。18例ctd相关性PAH患者中,14例被诊断为SSc。14例与SSc相关的PAH患者中IgG AECA的患病率为71.4%(14例中的10例)。与DM组(分别p<0.0001和p<0.0001)和健康个体(分别p = 0.015和p = 0.001)相比,IPAH和ctd相关的PAH组的IgG AECA患病率明显更高。
与无肺动脉高压的SSc患者相比,与SSc相关的肺动脉高压队列患者的AECA水平显著升高(p = 0.011)。免疫抑制药物的使用对IgG AECA水平无显著影响。
在IPAH组中IgM AECA患病率为44.8%(29人中13人),而在ctd相关的PAH组中为61.1%(18人中11人),在无PAH的SSc组中为41.2%(51人中21人)(表1)⇑)。IPAH组与ctd相关的多环芳烃组和无多环芳烃的SSc组相比,IgM AECA患病率无显著差异(p = 0.278和p = 0.751)。与DM组(p = 0.014和p = 0.001)和健康个体(p = 0.027和p = 0.002)相比,IPAH和ctd相关的PAH组的IgM AECA患病率明显更高。
同样,免疫抑制药物的使用对IgM AECA水平没有显著影响。
在IPAH队列中,IgG/IgM比值与肺血管阻力相关(R = 0.433, p = 0.039),与心脏指数呈负相关(R = -0.420, p = 0.046)。这种相关性在ctd相关的PAH队列中不能被证实。
在已确诊的肺动脉高压患者中存在AECA。我们的数据证实了坦比的发现et al。3.。此外,我们使用细胞为基础的ELISA法检测了能够靶向细胞表面抗原的功能相关的AECA。肺ECs功能障碍被认为是IPAH发病的关键。然而,引起EC功能障碍的起始刺激或损伤仍是一个推测问题。我们推测,IgG AECA的自身免疫攻击可能是导致EC功能障碍的初始触发器。然而,并没有在所有的PAH患者中发现IgG AECA。对此可能有几种解释。首先,EC表达的表型是至关重要的。理想情况下,病人自己的肺ECs应该被用来检测AECA。这些内皮细胞可能具有独特的内皮表位表型,这些表位表型受个体因素的影响,如剪应力、病毒感染和肺部炎症特征(如。细胞因子。为了更好地模拟肺环境,我们还测定了正常人肺动脉ECs上IgG AECA的患病率。与HUVEC ELISA获得的结果相比,AECA患病率没有发现差异(数据未显示)。其次,一些PAH患者接受免疫抑制剂治疗,可能抑制了AECA的水平。然而,治疗和未治疗患者的AECA水平没有统计学上的显著差异。
AECA是否在IPAH中起主要致病作用,或者它们是否是EC损伤的结果,这可能是一个问题。在血管损伤的糖尿病对照组中观察到IgG AECA的低患病率支持了IgG AECA在IPAH中的主要作用。与无PAH的SSc患者相比,有PAH的SSc患者中IgG AECA患病率较高,这也支持了其致病作用。IgM AECA的作用也不清楚。IgM AECA患病率在IPAH、ctd相关PAH和无PAH的SSc中没有差异。然而,在IPAH队列中,IgG/IgM AECA比值与疾病严重程度相关的研究表明,IgM AECA可能具有保护作用,例如可以与相关的内皮表位结合,从而阻碍IgG的结合。
IgG AECA可能导致EC功能障碍的机制也不完全清楚。在被认为是自身免疫性PAH范例的SSc中,AECA靶向EC表面抗原已被证明上调黏附分子表达并诱导EC凋亡7,8。此外,下游信号通路可能对邻近的肺成纤维细胞产生影响。然而,我们的研究没有解决IgG AECA的功能方面。因此,需要进一步研究确定IPAH中IgG AECA可能的致病性。
总之,我们报道了特异性针对IPAH中EC-surface抗原的IgM和IgG AECA的存在,进一步证实了自身免疫过程参与了该疾病的病理生理过程。
特别感谢H. Bilo(荷兰Zwolle Isala诊所内科/糖尿病中心)提供了II型糖尿病患者的血清样本。
感兴趣的语句
对J. Damoiseaux和本研究本身感兴趣的陈述可以在www.www.qdcxjkg.com/misc/statements.dtl
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