文摘
结核菌素皮肤试验的敏感性是HIV-1-infected受损的人。酶联immunospot-based检测免疫敏化作用可能影响较小。此外,相关的定量响应CD4细胞计数,可能改善活动性疾病的特异性。
T-SPOT。结核病化验HIV-1-infected参与者进行的,85年与活动性结核病(TB)和81名健康病人(non-TB)。之和的比值6-kDa早期分泌抗原目标和文化滤液蛋白10回应CD4细胞计数(spot-forming细胞(证监会)/ CD4)计算。
使用制造商的指导方针,活动性结核病诊断敏感性为76%,特异性53%。使用一个证监会/ CD4比率为0.12,敏感性(80%)和特异性(62%)有所改善。定量的t细胞反应增加而增加smear-positivity活动性结核病组(p = 0.0008)。non-TB组人员的比例得分T-SPOT积极。结核病分析组中较低的CD4细胞计数< 200细胞·毫米−3(p = 0.029)。
总结t细胞CD4细胞计数反应的比例提高了诊断的准确性T-SPOT。结核病HIV-1-infected人化验,证监会/ CD4 > 0.12的比例应该为活动性疾病及时调查。一个强大的痰积极性和T-SPOT程度之间的联系。结核病分数被发现。T-SPOT的敏感性。结核病试验在活动性疾病可能不太受先进的免疫抑制。
世界卫生组织停止结核病(TB)的传播战略概述了在其目标的改善结核病诊断HIV - 1 (HIV)来华的人。非洲占全球结核负担的> 31%,估计有139万2005年艾滋病毒感染结核病例和480000例死亡1。我们承认CD4 t细胞耗竭增加患艾滋病结核病的风险2,3结核病的风险事件显示血清转化后第一年内翻倍4。广泛使用的结核病诊断测试的性能,如结核菌素皮肤试验(TST)和痰显微镜,在艾滋病病毒感染者是妥协5- - - - - -7。
Interferon-γ释放化验(干扰素释放)在体外immunodiagnostic测试测量t细胞interferon-γ回应结核分枝杆菌-特定的抗原。研究评估的力量IGRA-based分析发现潜伏性结核感染(LTBI) HIV-co-infected人特有的结核病和艾滋病的设置8,9。进行比较,干扰素释放证明T-SPOT。结核病测定了更高比例的积极成果比QuantiFERON®TB-Gold管(QFT-GIT)测定在感染艾滋病毒的成年人10。一个更大的Rangaka的比较et al。11设置高结核病流行,也建议T-SPOT。结核病分析不发达免疫抑制受损11。然而,这些测试,因为目前的解释,不允许LTBI和活动性疾病之间的区别。
免疫学集团的试点研究实验室(传染病和分子医学研究所大学健康科学学院,开普敦大学,开普敦,南非)建议的方法检测活动性结核病感染艾滋病毒的患者通过加总酶联immunospot有关酶联免疫斑点)(应对TB-specific抗原(6-kDa早期分泌抗原目标(ESAT-6)和文化滤液蛋白10 (CFP-10))和分裂的CD4细胞计数12。> 1强烈建议积极疾病的比率。随着这些初步结果采用内部干扰素释放,一个更大的研究设计,使用的比例从T-SPOT有关酶联免疫斑点数求和。结核病测定除以CD4细胞计数诊断活动性结核病,并包括一个健壮的群non-TB感染艾滋病毒的病人作为对照组。
方法
研究地点和设计
研究网站在Ubuntu结核/艾滋病毒诊所位于卡雅利沙,开普敦(南非)附近的一个城郊乡镇人口> 400000。卡雅利沙有一个异常高的艾滋病和结核病负担(1612每100000人口2005)12,∼67%的结核与艾滋病毒相关的。采用横断面研究设计,采样活动性结核病患者感染艾滋病毒和感染艾滋病毒的人没有证据显示活动性结核病的控制。
参与者
从所有参与者获得书面知情同意,批准的这项研究是开普敦大学研究伦理委员会(REC 012/2007;南非开普敦)。所有166名参与者抗逆转录病毒疗法(ART)天真的招聘。总共有85艾滋病毒感染结核培养阳性结核病患者招募从诊所开始抗结核化疗之前。这些患者呈现给诊所与结核病的症状和体征。共有81名感染艾滋病病毒的健康参与者与艾滋病毒诊所登记,使用症状无活动性结核病症状的屏幕(任何咳嗽、盗汗、体重和食欲不振的损失)。所有健康的参与者(non-TB组)诱导痰、涂片和结核病culture-negative和显示没有结核病的辐射特性。的人加入到这个组进行了测试使用2结核菌素单位Siebert的结核菌素纯蛋白衍生物RT23皮内注入前臂的手掌的方面。所有人的皮肤硬化直径≥5毫米了,开始对异烟肼预防性治疗(IPT)后全血收集干扰素释放。此前没有参与者收到IPT。 A history of previous TB within 3 months of recruitment was an exclusion criterion.
在招聘的时候,问卷完成和CD4计数和T-SPOT收集血液样本。结核病化验。人的CD4细胞计数< 200细胞·毫米−3被称为艺术治疗诊所开始按照国家指导方针。总结ESAT-6和CFP-10响应的比值计算CD4细胞计数,和接受者操作特征(ROC)曲线进行分析的结果。
外周血单核细胞的准备
外周血单核细胞(PBMCs)提取heparinised全血内4 h的集合。PBMCs从使用Ficoll-Paque的全血中分离了出来TM(通用电气医疗集团,都圣吉尔斯,英国)梯度技术和存储在批处理T-SPOT液氮。结核病分析。
ELISPOT试验
实验室工作人员对参与者的临床地位也不清楚。使用T-SPOT有关酶联免疫斑点试验的进行。结核病设备根据制造商的指示13。可行的PBMCs (2.5×105细胞·好−1无血清培养系统)被添加到预涂板和刺激提供了16 - 20 h抗原和控制在37°C下5%的二氧化碳。孵化后,盘子是发达国家和地方的数量计算使用ImmunoSpot 3.2读者(蜂窝技术,克利夫兰,哦,美国)和手动验证。积极响应定义,无论phytohaemagglutinin (PHA)积极控制反应,如> 6 spot-forming细胞(证监会)·−1负控制(如果以上负控制包含0 - 5证监会·−1)ESAT-6或CFP-10井,或者至少两倍的负控制位置数,负控制6 - 10证监会·−1。消极的反应被记录,如果未达到上述标准,和积极的控制是有效的。不确定的反应被记录在< 20证监会·−1在PHA ESAT-6 / CFP-10井不反应的时(< 6证监会·−1)或在存在负控制计数> 10证监会·−1。
结核病显微镜和文化
痰收集、显微镜和文化进行了在国家参考实验室作为国家结核病规划的一部分。non-TB参与者接受了一些具体痰收集和处理。
统计方法
样本容量为166,目的是检测阳性的比例增加了30% T.SPOT -结核病导致活动与non-TB集团95%的电力和5%水平的意义。预测疾病的状态被逻辑回归分析使用文化积极或消极作为响应变量。模型建立和手动使用分段法,和变量被认为是与活动性结核病,其中包括年龄、性别和以前的结核病史,都包括在内。混杂变量和边远影响力观察被确定和可能的影响评估。ROC分析进行确定敏感性和特异性T-SPOT截止值不同。结核病化验。T-SPOT ROC曲线。结核病试验和证监会比CD4细胞计数比较,评估等效曲线下的区域。事后分析通过比较痰涂片镜检结果定量的t细胞反应使用散点图和克鲁斯卡尔-沃利斯检验比较中位数。假定值都是两面α为0.05。所有数据分析使用占据10.0(美国StataCorp、大学城、TX)。
结果
研究对象的基线特征
表1总结了参与者的基线特征。166名参与者中,63%是女性。结核病患者更有可能与前一个老和男性结核病的历史。所有结核病患者结核培养阳性,34(40%)被涂阴(中位数时间文化积极17天)。CD4细胞计数的分层显示,有44%的结核病患者的CD4细胞计数< 200细胞·毫米−3涂阴相比,32%的患者的CD4细胞计数> 200细胞·毫米吗−3,尽管这是不重要的(p = 0.3)。
T-SPOT。结核病结果
在166名参与者中,T-SPOT。结核病分析总体上是积极的92年(55.4%)。香港证监会的平均数量的活跃(56证监会·106PBMCs−1;四分位范围(差)24 - 184年证监会·106PBMCs−1)与non-TB组(20证监会·106PBMCs−1;IQR 4-60证监会·106PBMCs−1)(p < 0.0001)。有一个更高比例的T-SPOT。结核病在活动性结核病阳性的结果与non-TB集团(68与分别为42%;p = 0.001)所示图1 a和b。有5%的不确定的结果率(平均154.5 CD4细胞计数细胞·毫米−3,差80.5 - -209.5细胞·毫米−3;n = 8),由于负控制现货数量> 10证监会,与那些无意义的趋势增加率< 200细胞的CD4计数·毫米−3(6.5与3.3%;p = 0.349)。涂阴培养阳性的结核病患者,71%是T-SPOT。结核病艾滋病患者。
散点图显示,b) T-SPOT。结核病定量数据,和c, d) spot-forming细胞(证监会)/ CD4比例:a, c)的非结核(non-TB)组;和b, d)活动性结核病组。值高于T-SPOT否决被认为是积极的。结核病分析和证监会/ CD4比率。在制造商的截止24证监会·106外周血单核细胞(PBMCs)−1(- - - - - - -),T-SPOT。结核病分析指出给一个高比例的积极成果相比,香港证监会/ CD4 non-TB组的比例。香港证监会/ CD4结果突出敏感性的增加在区分活动性疾病和潜伏性感染截止(——)是降低从1到0.12。e)接收机T-SPOT操作特征(ROC)曲线。结核病测定(○)和香港证监会/ CD4比率(•)(……:引用)。ROC曲线下的面积之比为0.790的证监会T-SPOT / CD4比率和0.697。结核病化验。
香港证监会/ CD4比率
使用T-SPOT。结核病化验,香港证监会/ CD4比率计算)除以证监会的总数超过负面的CD4细胞计数控制。总体值-78 - -0.48不等。中位数比活动性结核病组(0.42;差0.15 - -1.67)(p < 0.001)显著高于non-TB组(中位数0.079;差0.02 - -0.21),如所示图1 c和d。
ROC分析
ROC曲线分析结果进行的,包括那些不确定的值,使用结核病和non-TB武器比较器组。使用制造商的T-SPOT截止。结核病化验,活动性结核病的诊断的敏感性为76% (95% CI 70 - 83%),特异性为53% (95% CI 46 - 61%)和阳性似然比为1.63。使用截止证监会/ CD4比率为0.12,敏感性为80% (95% CI 74 - 86%),特异性62% (95% CI 56 - 73%)、似然比为2.1。降低了T-SPOT。结核病截止实现类似的敏感性导致较低的特异性(表2和3)。的可能性比香港证监会/ CD4比率和T-SPOT。结核病试验选择的截止值很低,尽管如此,在任何给定的敏感性和特异性,香港证监会/ CD4比率显示优越的可能性比率。,阳性预测值(PPV)是更大的使用比T-SPOT证监会/ CD4比率。结核病分析(70与63%)。重要的是,香港证监会的阴性预测值(NPV) / CD4比率也高于T-SPOT。结核病分析(75与67%)。曲线下的面积使用证监会/ CD4细胞比例明显大于T-SPOT。结核病化验(p = 0.001),如图所示图1 e。
活动性结核病的风险因素和T-SPOT。结核病积极性
在单变量分析,有一个积极的活动性结核病和老年人之间的联系,降低BMI,男性,CD4细胞计数低,积极T-SPOT结核病史。结核病结果,香港证监会/ CD4 > 0.12的比例。
在多变量分析,> 200细胞的CD4细胞计数·毫米−3(比值比(OR) 0.24;p = 0.001),身体质量指数(或0.85;p = 0.001),老年(或1.04;p = 0.021)和香港证监会/ CD4比率(或5.99;与活动性结核病(p < 0.0001)有关表4)。一个积极的T-SPOT的重要预测因子。结核病结果老年(相对危险度(RR) 2.2;p = 0.04),历史之前的结核病(RR 2.8;p = 0.033)和培养阳性结核病(RR 3.2;p = 0.024)。没有明显混淆或变量之间的相互作用。
t细胞反应和免疫抑制的程度
总的来说,没有明显相关性IFN-γ证监会反应和免疫抑制的程度,以CD4细胞计数(r年代=−0.022;p = 0.78)。然而,当结果被CD4类别和结核病分层状态,> 200细胞的CD4细胞计数·毫米−3被发现与积极T-SPOT相关联。结核病导致non-TB组(p = 0.029),这意味着先进的免疫抑制损害T-SPOT的性能。结核病测试在这一组。图2显示了T-SPOT的比例不断上升。结核病积极的结果与增加CD4细胞计数。有趣的是,这并非如此活跃的结核病组(p = 0.939),这意味着T-SPOT的敏感性。结核病测试是受先进non-TB组的免疫抑制,但在活动性结核病的影响较小。
![图2 -](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/36/3/594/F2.medium.gif)
直方图显示积极T-SPOT比例增加。结核病结果与非结核增加CD4细胞计数(non-TB;□)而非活动性结核病组(░)。
二次分析
杆状的负载和t细胞反应
一个事后分析,有关痰积极性的程度量化T-SPOT活动性结核病。结核病分析响应。重大协会与杆状的负载被发现,所估计的程度的积极性(痰涂片显微镜检查图3)。有阳性杆菌load-immune响应关系,显著增加定量的t细胞反应与涂片积极性增加(p = 0.0008;克鲁斯卡尔-沃利斯测试)。为了进一步探索这种关系,免疫反应之间的相关性和文化积极的天数是检查作为替代代理的标志杆状的负载。这显示一个无意义的证监会和天文化积极性之间的负相关(r年代= -0.12;p = 0.29),但值得注意的是,90%的标本,成为文化积极的11天的中位数显示项< 290证监会·106PBMCs−1(90th香港证监会的百分比),如所示图4。
散点图显示杆状的load-immune响应关系。数据点代表个人和单杠中位数。定量t细胞的反应显示增加与涂片积极性增加(p = 0.0008;克鲁斯卡尔-沃利斯测试)。证监会:spot-forming细胞;PBMC:外周血单核细胞。-:0抗酸的芽孢杆菌(AFB)·100油浸字段(oif)−1;+:10 - 99空军基地·100 oif−1;+ +:1 - 10空军基地·OIF−1;+ + +:> 10空军基地·OIF−1。
![图4 -](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/36/3/594/F4.medium.gif)
散点图显示spot-forming细胞的数量(证监会)和时间文化在活动性结核病患者(积极性……:中位数时间文化的积极性;- - - - - - -:证监会数的90)(r年代= -0.12;p = 0.29)。PBMC:外周血单核细胞。
讨论
小说比技术评估诊断活动性结核病的人口HIV-co-infected设置高结核病流行的有关T-SPOT证监会的总数。结核病CD4细胞计数分析。其他诊断研究评估的诊断活动性结核病进行使用QFT-GIT,非商业内部有关酶联免疫斑点试验化验和非商业主要阴性人群,或设置较低的结核病风土性[12、14到20]。T-SPOT。结核病分析自T-SPOT先前的研究报道。结核病化验显示灵敏度比QFT-GIT测试高患病率在感染艾滋病毒的人设置,比如现在10,11。
T-SPOT。结核病分析诊断活动性结核病病的敏感性为76%,特异性为53%。香港证监会/ CD4比诊断结核病与更大的敏感性比> 0.12,表明6倍多变量分析结核病的风险更高。香港证监会的敏感性/ CD4比率在诊断活动性结核病仍高先进的免疫抑制。因此,在实践中,在感染艾滋病毒的患者一个证监会/ CD4比> 0.12,活动性结核病应该强烈怀疑和调查,而积极的T-SPOT。结核病结果应该促使我们考虑LTBI治疗。在那些与证监会/ CD4比< 0.12,虽然活动性结核病不排除在外,他们应该考虑LTBI待遇。然而,我们承认75%的NPV意味着测试负活动性结核病例的25%使用这种方法使用T-SPOT (33%。结核病分析),可能限制了其在临床实践中使用。
涂阴培养阳性患者,文化积极的平均时间为17天。重要的是,时间诊断可能使用T-SPOT缩短了2周。结核病分析,与公众健康影响包括减少传染性传播率,以及潜在的降低发病率和死亡率。
non-TB组< 200细胞的CD4细胞计数·毫米−3与测试性能受损。一个可能的原因是有结核病相关的更高的杆状的负载驱动一个积极的结核病抗原反应无论为CD4细胞计数,导致相对较少的测试性能受损。相比之下,积极回应non-TB组不太强烈的由于低杆状的负载,使测试精度易受损害先进的免疫抑制。这个假说是由目前的数据,都存在强烈的杆菌load-immune反应协会和原始数据显示更高的活动性结核病组的反应。据我们所知,这是一个最为明显的杆菌load-immune响应关系证明在人类,使用估计杆菌痰涂片显微镜检查负载。结果显示免疫反应之间的负相关和天数文化的积极性,虽然没有发现统计学意义,值得进一步研究。
先前的研究已经表明,传染性负载与t细胞反应的大小有关。山et al。21有关酶联免疫斑点反应表明,定量反映的可能感染剂量结核分枝杆菌梯度测量的涂片和培养阳性结核病患者。里贝罗et al。22还提出,IFN-γ-producing t细胞可能与细菌负荷,确定使用代理疾病严重程度的标记低BMI和cavitatory疾病的存在。在这两项研究中,参与者主要免疫。和现在的,这些数据表明,t细胞的反应可以作为替代标记治疗反应,疾病复发或监测疾病进展从潜在的活跃。一个小的试验研究由Goletti在乌干达et al。23证明区域显示潜在效用的差异1 t细胞反应减少艾滋病/结核病患者后成功的治疗结核病。艾肯et al。24主要是免疫组取得了类似的结论。目前的结果表明,相同的感染艾滋病毒的人可能是真的。然而里贝罗et al。22发现高inter-patient变化定量结果,可能限制使用后处理免疫反应评估在实践中。
香港证监会/ CD4截止值低于目前的研究发现中使用类似的免疫学集团进行的试点研究实验室12。为了进一步研究这个,一个平行T-SPOT内部的比较分析。结核病进行了测定,发现内部分析了大比例积极与更多的香港证监会(数据没有显示)。这个因素导致比率的差异。
本研究有几个优势。控制non-TB组的定义,都是无症状的,给两个痰culture-negative结核病的结果,很健壮。在这个人口感染艾滋病毒的已知无症状的亚临床结核病患病率高,我们觉得non-TB人的定义必须积极寻求通过全面的检查。此外,这是最大的研究来评估T-SPOT的能力。结核病化验和证监会/ CD4比率来区分积极从潜伏结核感染艾滋病毒的人数设置高结核病流行。
限制
证监会的特异性CD4比相对较低,虽然高于T-SPOT。结核病化验,意味着它将更适合作为寻求统治的测试诊断活动性结核病比作为排除测试排除结核病。更高比例的活动性结核病患者的历史之前的结核,可能这个群体更偏向于更高的响应速度和比例相比non-TB组。然而,随着T-SPOT。结核病化验一夜之间是一个简短的分析,t细胞的反应被认为主要构成效应,而不是记忆,t细胞。因此,前一个结核病史,这将引起记忆t细胞,不能显著影响目前的结果。
活动性结核病患者明显长大,CD4细胞计数和bmi指数较低,以及一个更高比例的男性,比non-TB组。在多变量分析、年龄、体重指数和低CD4细胞计数活动性结核病的重要危险因素。这种差异在两组患者基线特征可能是偏见的一个潜在来源。
在涂片镜检结果t细胞反应有关,目前的分析事后,进行涂片镜检参考实验室按照编程指导方针和一些具体。因此,performer-related变化可能影响结果的有效性。尽管如此,这些发现很有意义,值得更多的控制条件下进一步调查。
此外,冷冻细胞被用来代替新鲜,按照制造商的建议,由于物流研究的约束。结果,直接比较的新鲜和冷冻细胞从11个患者(平均2.5天)冻结了,没有区别的比例所示nonresponders之间的新鲜和冷冻样本(数据未显示)。
总之,在当前设置高的结核病负担,70%的PPV和净现值的75%可能会限制比值的临床使用自检测呈阳性的患者中有30%使用比例将不必要的治疗,25%的测试-将结核病的诊断都错过了。结果,目前的发现更容易转化为实践在结核患病率较低的地区,在检测前LTBI概率低于当前的设置。尽管如此,这部小说的可能性比技术能够帮助开始结核病治疗的临床决策,特别是在先进的免疫抑制,结核病治疗,缩短时间,优点进一步评估。
脚注
支持声明
这项研究是来自欧盟赠款支持(比利时布鲁塞尔;欧盟健康121404 c / G /多)和美国国立卫生研究院(贝塞斯达,医学博士,美国;国家卫生研究院1 ro1hd058791-01)。R.J.威尔金森由威康信托基金会(英国伦敦;授予072070年、084323年和088316年)和医学研究理事会(英国伦敦)。m·门德尔松收到资金的支持总统防治艾滋病紧急救援计划(美国华盛顿特区)/美国国际开发署(美国华盛顿特区)。
感兴趣的语句
感兴趣的语句j·帕特尔和R.J.威尔金森和研究本身可以发现www.www.qdcxjkg.com/misc/statements.dtl
- 收到了2009年10月29日。
- 接受2010年1月6日。
- ©2010人队