文摘gydF4y2Ba
各自的大量的循环内皮细胞和内皮祖细胞可能反映了血管损伤和修复的平衡。肺动脉高血压(多环芳烃)和慢性血栓栓塞肺动脉高压(CTEPH)肺改造可以共享的特性,我们推测,这两个障碍可能与不同类型的肺内皮功能障碍有关。gydF4y2Ba
我们研究了连续25个病人接受心导管疑似肺动脉高压。9名患者PAH,九CTEPH,七正常肺动脉压力和担任控制。循环内皮细胞分离与CD146-coated珠子。CD34gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞和内皮祖细胞数量分别由流式细胞术和细胞培养,在周围静脉和肺动脉血。等离子体水平的可溶性血管内皮生长因子(VEGF)、可溶性E-selectin和可溶性血管细胞粘附分子(sVCAM)由ELISA测定。gydF4y2Ba
没有发现差异祖计数或VEGF水平在三组。控制相比,循环内皮细胞的数量在多环芳烃而不是CTEPH显著增加,符合多环芳烃中的可溶性E-selectin和sVCAM水平升高。gydF4y2Ba
总之,多环芳烃,CTEPH相比,与血管损伤的标志(循环内皮细胞、可溶性E-selectin和sVCAM)但不标记的改造(内皮祖细胞,CD34gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞和VEGF)。gydF4y2Ba
血管重塑是观察在几个障碍的特点是增加了肺血管阻力和肺动脉高压。最近,4gydF4y2BathgydF4y2Ba世界肺动脉高压研讨会上提出了一个更新的临床分类gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,分组在一起针对不同疾病表现分享相似的病理生理机制、临床特征和治疗管理。肺动脉高压(PAH,组1)是一个复杂和快速进步的障碍:如果不治疗,右心衰和死亡发生在一个平均2.8年gydF4y2Ba2gydF4y2Ba。血管壁重塑和细胞增生的特点是严重的疾病gydF4y2Ba3gydF4y2Ba,gydF4y2Ba4gydF4y2Ba。丛状的病变多环芳烃是由于异常且混乱的扩散阻碍并最终使闭塞的单克隆内皮细胞血管腔gydF4y2Ba5gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba7gydF4y2Ba。慢性血栓栓塞肺动脉高压(CTEPH)的特点是管腔内的血栓组织纤维性狭窄,在某些情况下,完全消灭肺动脉gydF4y2Ba1gydF4y2Ba。肺部动脉内膜切除术是治疗的首选CTEPH和是唯一的潜在治疗选择。然而,进步的肺血管重塑的nonobstructed血管床被认为是CTEPH的主要病理生理机制gydF4y2Ba8gydF4y2Ba,gydF4y2Ba9gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
内皮细胞功能障碍是一个标志的多环芳烃和先天性心脏病肺动脉高压的二级gydF4y2Ba10gydF4y2Ba。人类最相关的数据与外科肺活检获得的材料,通过histomorphological研究和一代的血管结构细胞系。因为肺活检是高度侵袭性、细胞生物标志物的肺血管重塑和功能障碍可能是非常有用的诊断和/或预测。循环内皮细胞之间的比率(个cec上)和内皮祖细胞引起了相当大的兴趣作为一个标记的内皮损伤和再生之间的平衡,因此作为一种无创性血管功能障碍的标志gydF4y2Ba11gydF4y2Ba。cec无创性血管损伤的标记、改造和功能障碍gydF4y2Ba12gydF4y2Ba。cec在健康受试者出现在非常低的水平,被描述为系统性血管功能障碍的一个标志gydF4y2Ba11gydF4y2Ba。外围CEC数量是人类主要和次要肺动脉高压升高gydF4y2Ba13gydF4y2Ba,包括先天性心脏病肺动脉高压二次gydF4y2Ba14gydF4y2Ba。几个人群骨骨髓来源的细胞表达血管内皮标记neovascularisation迁移到网站gydF4y2Ba15gydF4y2Ba。山的方法计算内皮祖细胞现在可以商业套件的形式确定所谓的“CFU-EC”(内皮细胞克隆形成单位),即内皮细胞表达髓系标记gydF4y2Ba16gydF4y2Ba。患者外周血CFU-EC计数低心血管危险因素gydF4y2Ba16gydF4y2Ba。CFU-EC数字是减少慢性阻塞性肺疾病和疾病严重程度负相关gydF4y2Ba17gydF4y2Ba。血管生成基因疗法和内皮祖细胞移植最近被证明减弱肺动脉高压大鼠模型gydF4y2Ba18gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba,而王gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba21gydF4y2Ba发现,内皮祖细胞移植改善运动能力和肺血液动力学与特发性肺动脉高压病人。然而,报告内皮祖细胞在肺动脉高压是有争议的gydF4y2Ba22gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba24gydF4y2Ba内皮祖细胞的数量,但CEC和尚未相比,在相同的人口与肺动脉高压的成年人。gydF4y2Ba
内皮细胞表型是强烈修改在肺动脉高压,我们假定循环内皮细胞间,gydF4y2Ba即。gydF4y2BaCEC和CFU-EC调制在多环芳烃和CTEPH可能不同。因此,我们决定CEC, CD34gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞和CFU-EC数字周围静脉血和肺动脉血与多环芳烃和CTEPH科目。然后我们分析结果对临床和血液动力学的特征的两个障碍和可溶性生物标志物内皮损伤和再生。gydF4y2Ba
患者和方法gydF4y2Ba
研究人群gydF4y2Ba
内克尔伦理委员会批准的这项研究是(拉西德保护des法国人Ile II,巴黎,法国),并签署了知情同意是获得所有的病人和控制。我们选取25个病人接受心脏心导管在蓬皮杜欧洲医院(法国巴黎)在常规管理疑似肺动脉高压,符合当前的指导方针。右心房压力、肺动脉压力(gydF4y2BaPgydF4y2Ba巴勒斯坦权力机构gydF4y2Ba)、肺动脉楔压、心输出量和肺血管阻力(PVR)测定在catheterisation每个病人。肺动脉高压是定义为平均肺动脉压(gydF4y2BaP̄gydF4y2Ba巴勒斯坦权力机构gydF4y2Ba)> 25 mmHg静止和肺动脉楔压在心导管< 15毫米汞柱gydF4y2Ba25gydF4y2Ba。肺动脉高压是证实18例,排除了七个病人。更新后肺动脉高压的临床分类和当前的指导方针,这些18患者分为有多环芳烃(n = 9;特发性(n = 3),与结缔组织疾病(n = 3),门静脉高压(n = 2)或艾滋病毒感染(n = 1)),或CTEPH (n = 9)。七个病人catheterisation因为他们有超声心动图肺动脉高压,但其的迹象gydF4y2BaPgydF4y2Ba巴勒斯坦权力机构gydF4y2Ba被发现是正常的作为控制。所有患者接受了6分钟步行试验(6 mwt)。所有肺动脉高压患者有急性血管舒张药测试吸入一氧化氮(NO)为10分钟10 ppm,推荐最近的欧洲指南肺动脉高压的诊断和治疗gydF4y2Ba26gydF4y2Ba。只有一个PAH患者有急性反应,定义为减少gydF4y2BaP̄gydF4y2Ba巴勒斯坦权力机构gydF4y2Ba≥10毫米汞柱,达成绝对的gydF4y2BaP̄gydF4y2Ba巴勒斯坦权力机构gydF4y2Ba≤40毫米汞柱与心输出量增加或不变。的gydF4y2BaBMPR2gydF4y2Ba基因分析在只有一个特发性肺动脉高压患者,被发现是正常的。三PAH患者服用特定药物治疗时右心catheterisation:一个特发性PAH患者接受连续静脉内皮、西地那非和应用波生坦,而其他两个患者接受应用波生坦单方。两个操作CTEPH服用特定药物治疗患者的右心catheterisation,皮下treprostinil的组成的组合,应用波生坦和西地那非在一个案例中,应用波生坦单方在其他情况。三个病人两次评估(应用波生坦在诊断和3个月后,一线的血管舒张药疗法)。gydF4y2Ba
CEC隔离和计数gydF4y2Ba
周围静脉和肺动脉血液样本被收集在心导管EDTA。CEC量化和CFU-EC CD34gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba数,第一个毫升的血液被穿刺丢弃,避免收集内皮细胞脱落。个cec上被数由操作员不知道病人的临床状态。个cec上在全血immunocaptured与磁珠(4°C Dynabeads m - 450;Dynal®、表达载体- pontoise、法国)涂上S-Endo 1 (Biocytex®,马赛,法国),对内皮细胞抗原的单克隆抗体(mAb) CD146。为了避免非特异性白细胞绑定到珠子,细胞悬浮液通过吸管提示刷新大力在洗涤步骤,然后悬浮在吖啶橙(3μg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba在PBS;Sigma-Aldrich®, Saint-Quentin Fallavier、法国)在荧光显微镜下计数(λgydF4y2BaexcgydF4y2Ba490海里)。个cec上被认定为> 20-μm细胞直径轴承> 10个珠子,或作为细胞< 10珠但保存完好的和可识别的形态(明确定义良好的细胞质核,和大小兼容的内皮细胞)。细胞的数量聚集决心从细胞核的数量或球形玫瑰特性。内皮细胞的性质因此孤立的测量证实了凝集素gydF4y2BaUlex europaeusgydF4y2Ba凝集素(UEA) 1表达。gydF4y2Ba
流仪循环CD34的量化gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba祖细胞在肺动脉高压gydF4y2Ba
CD34gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞被量化EDTA-anticoagulated外周血和肺动脉血液通过双色流式细胞术在FACScalibur设备(正、Le Pont de Claix、法国)。短暂,100μL血孵化与10μL phycoerythrin-cyanin-5-conjugated反CD34马伯(beckman coulter, Villepinte,法国)和10μL藻红蛋白(PE)共轭anti-human-CD133马伯(Miltenyi研究,Bergisch-Gladbach,德国)。多发地马伯的同形像一样相同的制造商提供的免疫马伯,被用作控制。积极的外周血细胞的数量是由二维边撒荧光dot-plot分析浇注后淋巴细胞的数量。每个分析由30000事件。CD34的数量gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞每1×10正常化,并表示gydF4y2Ba5gydF4y2Ba循环淋巴细胞。gydF4y2Ba
Granulocyte-macrophage克隆形成单位量化gydF4y2Ba
单核细胞(4×10gydF4y2Ba5gydF4y2Ba每道菜)被播种在甲基纤维素板(茎α1 f;抑制α®,Saint-Genis l 'Argentiere,法国)与干细胞因子中补充,粒细胞集落刺激因子、集落刺激因子、红细胞生成素,白介素(IL) 3, IL - 6的分泌。Granulocyte-macrophage菌落(CFU-GM)计算后14天的文化,通过相差显微镜检查。gydF4y2Ba
流仪CD34的量化gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2BaKDRgydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞gydF4y2Ba
CD34gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2BaKDRgydF4y2Ba+gydF4y2Ba在EDTA-anticoagulated外周血细胞被量化BD-LSRII流式细胞术gydF4y2Ba®gydF4y2Ba流式细胞分析仪(正)。短暂,聚蔗糖梯度后,100μL单核细胞悬液与10μL孵化异硫氰酸荧光素(FITC)共轭反CD34马伯(beckman coulter), 10μL PE-conjugated anti-human-CD133马伯(Miltenyi研究)和10μL allophycocyanin (APC)共轭反KDR马伯(正)。多发地马伯的同形像一样相同的制造商提供的免疫马伯,被用作控制。gydF4y2Ba
CD34的排序gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞gydF4y2Ba
CD34gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞被BD-FACSAriaII排序gydF4y2Ba®gydF4y2Ba流式细胞分析仪(正)。短暂,聚蔗糖分离后,10μL FITC-conjugated反CD34马伯(beckman coulter)和10μL PE-conjugated anti-human-CD133马伯(Miltenyi研究)和2×10孵化gydF4y2Ba6gydF4y2Ba单核细胞。染色后,细胞在pbs resuspended - 0.5%牛血清白蛋白(BSA) 1×10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba每100μL细胞。暂停与细胞过滤器过滤BD管帽(正)在细胞排序。CD34gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞收集管与BSA涂层。gydF4y2Ba
量化的CFU-ECgydF4y2Ba
EDTA-anticoagulated血液与PBS稀释1:1,0.2 EDTA和覆盖histopaque - 1077 (Sigma-Aldrich)。细胞在100×离心机gydF4y2BaggydF4y2Ba20分钟。单核细胞(跨国公司)在PBS收集和清洗三次,0.2 EDTA。CFU-EC培养与EndoCult®液体介质套件(公元前干细胞技术,温哥华,加拿大)推荐的制造商。简单地说,跨国公司在完成resuspended EndoCult®中、播种在5×10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba细胞·好gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba在fibronectin-coated组织培养板(正)。镀后48 h,不依从细胞收集并在Endocult®缓冲10点gydF4y2Ba6gydF4y2Ba细胞·好gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba在24-well fibronectin-coated盘子,殖民地是算3天。gydF4y2Ba
测量可溶性血管内皮生物标志物gydF4y2Ba
外周静脉和肺动脉血液收集在心导管管包含0.105 M柠檬酸钠(1:9gydF4y2Bav / vgydF4y2Ba)。等离子体是通过双离心2300×gydF4y2BaggydF4y2Ba10分钟,并立刻被放置在-80°C到使用。血浆血管内皮生长因子(VEGF)水平的可溶性E-selectin和可溶性血管细胞粘附分子(sVCAM)与高度敏感的elisa测定推荐的制造商(研发系统,明尼阿波利斯,美国)。gydF4y2Ba
统计分析gydF4y2Ba
的非参数Mann-Whitney u测验是用来识别边缘标记差异两个病人组和控制。采用配对t检验来确定CEC和CD34之间的差异的重要性gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba在两种类型的血液样本。统计学意义是假定在p≤0.05。所有统计测试进行统计视图软件包(SAS、卡里、数控、美国)。gydF4y2Ba
结果gydF4y2Ba
研究人群gydF4y2Ba
病人的和控制的临床和血液动力学的特征总结gydF4y2Ba表1gydF4y2Ba。PAH患者和CTEPH可比的人口和血液动力学的参数(gydF4y2BaP̄gydF4y2Ba巴勒斯坦权力机构gydF4y2Ba,PVR和步行测试值:p = 0.54,分别为0.38和0.87)。gydF4y2Ba
CEC数量gydF4y2Ba
Immunomagnetically隔离个cec上观察染色后荧光探针acridin橙色或UEA1 (gydF4y2Ba图1 a和bgydF4y2Ba)。CEC数量无显著差异是指出之间的两种类型的血液样本的三组受试者(gydF4y2Ba表2gydF4y2Ba)。外围CEC数量是正常的(< 10 CEC /毫升在健康成年人,所定义的一致协议gydF4y2Ba12gydF4y2Ba在控制和CTEPH患者。相比之下,意味着CEC数高出6倍PAH患者比对照组(p = 0.01)和四倍高于CTEPH患者(p = 0.04) (gydF4y2Ba表2gydF4y2Ba和gydF4y2Ba图1 dgydF4y2Ba)。此外,我们没有发现CEC数量之间的相关性和纽约心脏协会分类或血液动力学的数据如下:gydF4y2BaP̄gydF4y2Ba巴勒斯坦权力机构gydF4y2Ba(-5.2×10gydF4y2Ba−19gydF4y2Ba;斯皮尔曼相关系数p = 0.99),gydF4y2BaPgydF4y2Bapa,收缩压gydF4y2Ba(0.139;p = 0.37),gydF4y2BaPgydF4y2Bapa,舒张压gydF4y2Ba(0.142;p = 0.58), 6 mwt (0.3571;p = 0.38)、心脏指数(0.4185;p = 0.27)或PVR (-0.2167;p = 0.58)。三个PAH患者3个月后可以重新评估的诊断和启动特定应用波生坦治疗(Tracleer;Actelion股价制药、法国巴黎),观察和显著减少CEC数量(gydF4y2Ba图1 egydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
循环内皮细胞(CEC)形态和数量外围肺动脉高压患者的静脉血。两者的识别CEC immunomagnetic分离和染色后在荧光显微镜gydF4y2BaUlex europaeusgydF4y2Ba凝集素1 (UEA1)或吖啶。箭头表示)染色后CEC UEA1;b) CEC与吖啶染色后;和c)和吖啶染色后淋巴细胞。酒吧= 30μm规模。d) CEC数量外周静脉的血肺动脉高血压(多环芳烃)和慢性血栓栓塞肺动脉高压(CTEPH)患者。在多环芳烃CEC数量显著增加。gydF4y2Ba#gydF4y2Ba:p = 0.01;gydF4y2Ba¶gydF4y2Ba:p = 0.04。e) CEC量化三个PAH患者(•)之前(♦)和之后三个月的一线应用波生坦治疗。gydF4y2Ba
循环CD34gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba祖细胞数量gydF4y2Ba
在CD34无显著差异gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba根据抽样数量被发现网站(gydF4y2Ba表2gydF4y2Ba),外围CD34gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba数量在三组之间没有显著性差异(控制、多环芳烃和CTEPH) (gydF4y2Ba图2一个gydF4y2Ba)。CD34gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞也被量化的另外两个对照组(48健康志愿者和30个病人没有心血管疾病的风险因素定于瓣膜手术),这些组之间没有差异观察和研究对照组(gydF4y2Ba图2一个gydF4y2Ba)。CD34gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞计数不修改具体治疗患者治疗三个多环芳烃(数据没有显示)。CD34的子集gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞(0.4%)表达VEGF受体2 (KDR),与CD34gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba人口中只有0.03%的细胞表达KDR (gydF4y2Ba图2 cgydF4y2Ba)。CD34gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba进一步分类细胞能够分化成CFU-GM单独分析,符合他们的祖细胞的其他特性(gydF4y2Ba图2 cgydF4y2Ba)。CFU-GM每组量化,符合CD34gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞计数,观察病人和控制没有区别(p = 0.91, p = 0.66,分别对多环芳烃和CTEPHgydF4y2Ba与gydF4y2Ba控制;和多环芳烃p = 0.68gydF4y2Ba与gydF4y2BaCTEPH) (gydF4y2Ba图2 bgydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
CD34gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba计数的外周静脉血肺动脉高血压(多环芳烃)和慢性血栓栓塞肺动脉高压(CTEPH)患者。一)CD34gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba被流式细胞术量化。病人从控制之间没有显著性差异。(p = 0.85, p = 0.17,分别对多环芳烃和CTEPHgydF4y2Ba与gydF4y2Ba控制和多环芳烃的p = 0.13gydF4y2Ba与gydF4y2BaCTEPH)。gydF4y2BansgydF4y2Ba:不重要的。b) Granulocyte-macrophage菌落(CFU-GM)与单独使用量化分析(甲基纤维素)。从控制病人没有显著差异(p = 0.91, p = 0.66,分别对多环芳烃和CTEPHgydF4y2Ba与gydF4y2Ba控制和多环芳烃的p = 0.68gydF4y2Ba与gydF4y2BaCTEPH)。跨国公司:单核细胞。c)。CD34的0.4%gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba是积极的血管内皮生长因子受体2 (KDR)。CD34gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞与BD-FACSAriaII排序gydF4y2Ba®gydF4y2Ba流式细胞分析仪(正、Le Pont de Claix、法国)能够分化成CFU-GM在单独使用系统(甲基纤维素)。SSC:侧散射;FITC:异硫氰酸荧光素;APC: allophycocyanin;体育:藻红蛋白。gydF4y2Ba
CFU-EC数字gydF4y2Ba
5天的文化,CFU-EC殖民地由细长的发芽细胞辐射从中央圆的核心细胞(gydF4y2Ba图3gydF4y2Ba)。这些细胞表达血管性血友病因子(gydF4y2Ba图3 bgydF4y2Ba)、KDR和CD31 (gydF4y2Ba图3 cgydF4y2Ba和d),能分泌大量的血管生成生长因子VEGF和基质衍生因子- 1 (gydF4y2Ba图3 dgydF4y2Ba)。没有发现CFU-EC数字差异之间的两个采样点的三组(gydF4y2Ba表2gydF4y2Ba)。外围CFU-EC计数在三组相似(中位数(范围):4(划分),6(0-37)和8 (0-23)CFU-EC / 10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba多环芳烃和CTEPH患者单核细胞和控制,分别;所有比较不重要的)(gydF4y2Ba表2gydF4y2Ba和gydF4y2Ba图3 egydF4y2Ba)。CFU-EC计数没有受到特定治疗的三个PAH患者有关。gydF4y2Ba
内皮细胞克隆形成单位(CFU-EC)量化在肺动脉高血压(多环芳烃)和慢性血栓栓塞肺动脉高压(CTEPH)。CFU-EC)代表。注意中央核心的圆形细胞纺锤状细胞通过外围发芽。b) CFU-EC immunohistological描述(血管性血友病因子;插图:同型的控制)。c)仪分析血管内皮生长因子受体2 (KDR)。d)实时定量PCR (gydF4y2BaCD31、VEGF、SDF-1gydF4y2Ba和gydF4y2BacxcrgydF4y2Ba)。e)。数字CFU-EC殖民地的多环芳烃,与Endocult数gydF4y2Ba®gydF4y2Ba公元前(干细胞技术、温哥华,加拿大)。结果是每10粘附细胞集群的数量gydF4y2Ba6gydF4y2Ba单核细胞(跨国公司)。结果均值±gydF4y2Ba扫描电镜gydF4y2Ba(p = 0.19, p = 0.48,分别对多环芳烃和CTEPHgydF4y2Ba与gydF4y2Ba控制和多环芳烃的p = 0.36gydF4y2Ba与gydF4y2BaCTEPH)。gydF4y2BansgydF4y2Ba:不重要的。gydF4y2Ba
VEGF、可溶性E-selectin和sVCAM等离子体水平gydF4y2Ba
三组VEGF水平相似(中位数(范围):20.7(12.6 - -115.2),33.4(33.3 - -52.6)和29.6 (13.9 - -71.2)pg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba分别在多环芳烃和CTEPH病人和控制;所有比较不重要的)(gydF4y2Ba图4gydF4y2Ba)。相比之下,可溶性E-selectin PAH患者水平明显高于CTEPH患者(p = 0.04)和控制(p = 0.03)(中位数(范围):45(32-57),33(19-53)和29日(14 - 71)ng·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba在多环芳烃和CTEPH病人和控制,分别)(gydF4y2Ba图4 bgydF4y2Ba)。可溶性E-selectin符合结果,sVCAM水平,另一个生物标志物内皮损伤和/或激活,PAH患者明显高于CTEPH患者(p = 0.02)和控制(p = 0.006)(中位数(范围):1167(455 - 3454),544(402 - 1347)和486.5 (279 - 1084)ng·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba在多环芳烃和CTEPH病人和控制,分别)(gydF4y2Ba图4摄氏度gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
血浆血管内皮生长因子(VEGF)水平的可溶性E-selectin (sE-selectin)和可溶性血管细胞粘附分子(sVCAM)肺动脉高血压(多环芳烃)和慢性血栓栓塞肺动脉高压(CTEPH)。等离子体)VEGF水平,b) sE-selectin和c) sVCAM用ELISA测定。sE-selectin和PAH sVCAM增加。gydF4y2BansgydF4y2Ba:不重要的。gydF4y2Ba#gydF4y2Ba:p = 0.03;gydF4y2Ba¶gydF4y2Ba:p = 0.04;gydF4y2Ba+gydF4y2Ba:p = 0.006;gydF4y2Ba§gydF4y2Ba:p = 0.02。gydF4y2Ba
讨论gydF4y2Ba
这是第一个研究量化循环内皮间的不同组件(CEC, CFU-EC和CD34gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba)和比较丰富的两种不同形式的肺动脉高压。在PAH, CTEPH相反,我们发现高CEC数量和高水平的可溶性E-selectin sVCAM,两者都是认可的标记血管损伤或激活,而内皮改造(CFU-EC, CD34标记gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba设置和VEGF)是正常的。gydF4y2Ba
这项研究的一个重要的结果是类似的数字CEC, CD34gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba和CFU-EC外围和肺血。当我们开始这项研究中,我们没有的知识从外周血CEC间隙,因此研究地方释放CEC肺动脉血液样本。我们惊奇地发现,外周血给了相同的结果。然而,在一项研究的儿童先天性心脏病肺动脉高压二次,我们也发现了类似的CEC数量在外周血和肺动脉血gydF4y2Ba14gydF4y2Ba。这表明外周血是一个可靠的代理中央室,尽管猜想后者将更适合检测标记内皮功能障碍的肺动脉高压。如果这是证实,进一步研究内皮细胞在肺动脉高压的地位仅需要微创抽样程序。gydF4y2Ba
cec小说内皮损伤的标志,它们的数量与其他标记的内皮功能,如血流介导扩张和血管性血友病因子和组织纤溶酶原激活物的水平gydF4y2Ba27gydF4y2Ba。在冠心病CEC数量增加,肾血管疾病gydF4y2Ba28gydF4y2Ba和移植gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba,生存和发展的一个标志,在急性冠状动脉疾病gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba。很少数据在肺动脉高压的CEC数量。牛gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba13gydF4y2Ba发现CEC数量增加与各种类型的成人肺动脉高压。我们最近表明,术前CEC数量区分两组患儿多环芳烃二次先天性心脏病,即那些在基线CEC数量显著增加,在人多环芳烃成为不可逆转的手术后,这些低CEC数量和可逆的多环芳烃gydF4y2Ba14gydF4y2Ba。后者研究建立CEC的生物标志物在此设置强有力的预后价值。为CEC量化在目前的研究中,应该注意的是,我们丢弃的第一个毫升的血,以避免被穿刺收集内皮细胞脱落。gydF4y2Ba
CEC数量增加与PAH患者和正常受试者CTEPH。此外,我们没有发现CEC数之间的相关性和血液动力学的参数(gydF4y2BaP̄gydF4y2Ba巴勒斯坦权力机构gydF4y2Ba、PVR和心脏指数)在病人组。同样重要的是要注意,比较两组的血流动力学和临床参数(gydF4y2Ba表1gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
综上所述,这些数据表明,高肺动脉压力不是从血管壁内皮细胞分离的主要触发及其随后的循环。相反,多环芳烃可能导致增加的额外个cec上观察到血管活化和/或改造。然而,从组织病理学角度来看两种疾病都与远端微血管改造,其中包括平滑肌细胞增殖和小动脉的muscularisation,纤维化,内皮细胞增生,内膜的增厚和gydF4y2Ba原位gydF4y2Ba血栓形成。丛状的病灶有相似的组织学方面特发性和次要的多环芳烃。积极增生内皮细胞也发现在这两种形式的疾病,没有证据表明细胞凋亡。不过,特发性多环芳烃的一个特定的特征可能是至关重要的,即在网状内皮细胞扩张病变性质:它是特发性PAH单克隆gydF4y2Ba6gydF4y2Ba,gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,而monoclonality从未在其他形式的多环芳烃。这反映了一个特定的能力是否从血管的内皮细胞脱落PAH还有待调查。此外,莫泽和布卢尔gydF4y2Ba9gydF4y2Ba进行了全面、系统的组织病理学分析小患者的肺动脉CTEPH和得出结论,这些病人显示全方位的远端组织病理学变化,表明先进的船舶改造,包括丛状的病灶,平滑肌细胞肥大和内膜的增生和纤维化。这些病变在肺动脉高血压还发现,无阻塞性血管特别是由于肺栓塞。我们发现,应用波生坦、内皮素受体拮抗剂与CEC数量减少三个病人的治疗3个月后我们可以研究。已经假定cec释放内皮细胞增殖失控或者激活在肺动脉高压。通过调节血管阻力,应用波生坦可能减少内皮细胞激活和,因此,CEC释放。gydF4y2Ba
个cec上的区别和CD34情况gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba我们用来量化个CEC上的方法,根据它们的大小和涂布珠子的数量,使我们能够区分CEC CD146-expressing CD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞。DelormegydF4y2Baet al。gydF4y2Ba31日gydF4y2Ba发现祖细胞coexpressing CD146和CD133抗原与不成熟有关,从成熟个cec上看明显不同,分化细胞的形态学特征和直径> 20μm。因此,不太可能我们数个cec上使用immunomagnetic分离方法包括祖细胞。gydF4y2Ba
内皮祖细胞参与愈合过程gydF4y2Ba15gydF4y2Ba,neoangiogenesis一直观察到PAH,我们怀疑内皮祖细胞的数量在此设置可能会升高。因为观察内皮细胞monoclonality,内皮祖细胞表现出单独的属性gydF4y2Ba32gydF4y2Ba,gydF4y2Ba33gydF4y2Ba,我们推测它们可能是内皮增殖中多环芳烃的部分原因。由于没有共识方法准确地量化内皮祖细胞在小样本,我们选择量化CD34传播gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba内皮祖细胞的祖细胞组成一个群,并被描述为来源的内皮祖细胞在文化gydF4y2Ba34gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba36gydF4y2Ba。低氧诱导实验模型的多环芳烃,内皮祖细胞参与肺血管重塑gydF4y2Ba37gydF4y2Ba。然而,人类的研究表明各种增加CD34gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba数字PAH患者gydF4y2Ba22gydF4y2Ba或多环芳烃和CD34之间没有相关性gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba24gydF4y2Ba。在另一项研究中,通过细胞培养内皮祖细胞的数量孤立在PAH升高gydF4y2Ba23gydF4y2Ba。在目前的研究中,CD34gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba和CFU-EC数量没有肺动脉高压与对照组之间的差异(gydF4y2Ba无花果2gydF4y2Ba和gydF4y2Ba3gydF4y2Ba)。还需要进一步的研究来确定观察到缺乏内皮祖细胞动员在肺动脉高压,基于评估不同类型的内皮祖细胞(CD34gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞表达KDR和/或CD146)和late-outgrowth内皮祖细胞获得的文化。然而,值得注意的是,虽然发现了血管生成和炎症标志物水平与CD34的丰度gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD133gydF4y2Ba+gydF4y2Ba和内皮祖细胞gydF4y2Ba38gydF4y2Ba,gydF4y2Ba39gydF4y2BaVEGF水平类似我们的病人组和控制,进一步支持缺乏CEC祖动员。VEGF水平在这里找到类似发现在健康男性和女性志愿者gydF4y2Ba40gydF4y2Ba。在目前的研究中,VEGF是量化在血浆和血清,以排除任何潜在的影响血小板VEGF颗粒内容发布。事实上,据报道,VEGF的血小板来源可能会干扰肺动脉高压的病理生理学gydF4y2Ba41gydF4y2Ba和血清中VEGF量化gydF4y2Ba42gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
来源的内皮细胞参与血管重塑与肺动脉高压有关尚不清楚。一种可能性是,血管祖细胞可能是从一个干细胞利基在肺内,而不是造成系统性祖动员。最后,可溶性E-selectin和sVCAM诱导内皮细胞粘附分子,也与内皮损伤和/或激活。最近,E-selectin被形容为一个关键分子对内皮祖细胞归巢gydF4y2Ba43gydF4y2Ba肺动脉高压,而sVCAM等离子体水平已被证明与内皮激活反映在内皮微粒检测gydF4y2Ba44gydF4y2Ba。可溶性E-selectin的血浆水平升高和sVCAM我们观察到的多环芳烃,连同个cec上的过剩,反映强烈的内皮细胞激活,这可能参与当地肺部祖细胞的招募;然而,这需要在更大规模的研究。gydF4y2Ba
总之,这项研究表明,循环内皮细胞激活的生物标志物水平显著不同PAH患者与患者之间CTEPH相当的严重性。CEC的价值作为生物标志物的临床结果和/或治疗反应的多环芳烃还有待确定。gydF4y2Ba
确认gydF4y2Ba
这项工作是由INSERM研究经费支持,Leducq跨大西洋的卓越壁血栓研究网络(格兰特04 cvd01)和Chancellerie des的大学(腿Poix)(法国巴黎)。gydF4y2Ba
脚注gydF4y2Ba
感兴趣的语句gydF4y2Ba
没有宣布。gydF4y2Ba
- 收到了gydF4y2Ba2009年8月18日。gydF4y2Ba
- 接受gydF4y2Ba2010年4月9日。gydF4y2Ba
- ©2010人队gydF4y2Ba
引用gydF4y2Ba
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