抽象的GydF4y2Ba
呼吸道合胞病毒(RSV)在幼儿中引起毛细支气管炎,在成人中引起普通感冒。目前还没有获得许可的疫苗,使用帕利维珠单抗进行预防性治疗非常昂贵,而且仅限于高危婴儿。利巴韦林用于婴儿和免疫抑制患者的抗病毒治疗,由于副作用、对受者和工作人员的毒性以及临床疗效边缘证据,其使用受到限制。因此,我们研究了GydF4y2Ba在活的有机体内GydF4y2Ba动力学,以及RSV疾病治疗新候选者的抗病毒和保护性能。GydF4y2Ba
该药物是通过筛选用于在细胞感染模型中的RSV融合抑制性能的小分子(TMC353121)。在BALB / C小鼠中研究了TMC353121的药代动力学和通过在鼻内RSV感染后通过定量RT-PCR测试肺组织中的病毒载体和斑块测定确定的抗病毒效应。GydF4y2Ba
剂量为0.25-10 mg·kgGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba,TMC353121病毒载荷显着降低,感染后肺组织病理学变化的严重程度。如果在感染48小时内开始治疗仍然有效,但此后无效。GydF4y2Ba
因此,TMC353121是一种新型强效抗病毒药物,GydF4y2Ba在活的有机体内GydF4y2Ba减少RSV复制,抑制继发性肺部炎症,具有进一步临床开发的巨大潜力。GydF4y2Ba
呼吸合胞病毒(RSV)是成人中常见感冒的常见感冒的致病因子,并负责婴儿和幼儿的严重支气管炎和病毒性肺炎[GydF4y2Ba1GydF4y2Ba那GydF4y2Ba2GydF4y2Ba].病毒性支气管炎是1岁以下婴儿住院的主要原因之一GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba],并与儿童后期复发性喘息或哮喘的发展有关[GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba].过早出生的儿童以及患有慢性肺病或先天性心脏病的儿童,由于RSV而严重疾病和住院的风险最高。在老年人中,RSV感染与较低的呼吸道症状有关,当存在伴随条件时,导致并发症[GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba].呼吸道合流病毒感染在老年人和高危成人中的疾病负担与接种流感疫苗的高流行率人群中的非大流行性流感相似[GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba].GydF4y2Ba
目前,有三种药物被批准用于治疗RSV感染,但RSV疾病的治疗仍主要是对症治疗。利巴韦林用于患有严重毛细支气管炎的婴儿和免疫缺陷患者的严重呼吸道合胞病毒感染。然而,由于疗效和毒性风险差异很大,其使用受到限制[GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba].分别设计Respigam®(不再可用)和Synagis®(palivizumab),多克隆和单克隆抗体,用于预防,但是非常昂贵,因此使用金融考虑因素在许多环境中有限[GydF4y2Ba8.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba9.GydF4y2Ba].Motavizumab (Numax®)是一种改进的单克隆抗体,正在考虑上市批准,预计具有类似palivizumab的治疗适应症[GydF4y2Ba10.GydF4y2Ba].GydF4y2Ba
在此日期,开发安全有效的RSV疫苗的尝试已经不成功。福尔马林灭活疫苗没有防止自然感染,甚至导致增强疾病[GydF4y2Ba11.GydF4y2Ba].减毒活疫苗已被尝试,但成效有限。显然,需要一种有效、无毒、易于管理的药物来预防和治疗RSV感染。GydF4y2Ba
抗病毒药物的一个潜在治疗靶标是肺上皮细胞中的RSV进入过程。F(融合)蛋白在该过程中至关重要,因此在建立感染方面发挥着关键作用。已经确定了融合过程的几个小分子抑制剂[GydF4y2Ba12.GydF4y2Ba-GydF4y2Ba17.GydF4y2Ba]但大多数人因科学或战略原因而停止[GydF4y2Ba18.GydF4y2Ba].GydF4y2Ba
RSV融合抑制剂TMC353121已从前体分子JNJ-2408068开发[GydF4y2Ba17.GydF4y2Ba利用分子建模方法。它保持高活性(pECGydF4y2Ba50.GydF4y2Ba9.9),细胞毒性较低,但在肺内停留时间较短(肺GydF4y2BaT.GydF4y2Ba1/2GydF4y2Ba25小时)(GydF4y2Ba19.GydF4y2Ba].TMC353121的作用机制已在加法时确认GydF4y2Ba在体外GydF4y2Ba抗性突变选择研究。发现TMC353121通过导致RSV-F蛋白的自然六螺旋束构象的局部扰动来抑制病毒细胞融合和异种形成来抑制RSV [GydF4y2Ba20.GydF4y2Ba].GydF4y2Ba
在这篇文章中,我们表明TMC353121,无论是预防还是治疗,都具有有效的抗病毒特性GydF4y2Ba在活的有机体内GydF4y2Ba在BALB / C小鼠模型中,免受肺部感染和病毒诱导的炎症。GydF4y2Ba
材料和方法GydF4y2Ba
动物和药物管理局GydF4y2Ba
近期8至12周龄雌性Balb / C小鼠购自Harlan Olac Ltd(英国Bicester,英国),并保持在无病原体条件下。人RSV A2菌株斑块纯化并在HEP-2细胞中选择。该协议是在英国本办事处的许可下进行的。GydF4y2Ba
TMC353121 [GydF4y2Ba19.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba21.GydF4y2Ba]在0.25-10mg·kg的剂量下静脉内施用盐水GydF4y2Ba-1GydF4y2Ba,并在不同时间与呼吸道合胞病毒感染有关(GydF4y2Ba无花果。1AGydF4y2Ba).小鼠感染了2×10GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba纯化的人RSV A2株菌斑形成单位(PFU)(鼻内100 μL)。个体体重用于监测动物健康状况和对感染的反应,并每日记录。GydF4y2Ba
a)用于测试TMC353121的抗病毒性质的方案。“X”表示静脉注射TMC353121或用作阴性对照的载体。在不同的实验中,每组使用5至7只小鼠。感染和收获由†表示。b)呼吸合胞病毒(RSV)感染后的实体体重变化。数据显示为平均值±GydF4y2BaSD.GydF4y2Ba.对照组采用对照剂,其余各组采用TMC353121单剂(10 mg·kg)GydF4y2Ba-1GydF4y2Ba感染前60分钟注射)或多次注射(每日一次)。每组5只小鼠。*:第7天与对照组比较,p<0.05,基于单因素方差分析,Tukey比较检验。在第7天,治疗组之间没有观察到显著差异。GydF4y2Ba
肺RSV检测GydF4y2Ba
实时rt - pcrGydF4y2Ba
按照制造商的说明,使用RNeasy试剂盒(Qiagen, Crawley, UK)从均质肺组织中提取RNA。总RNA浓度由260 nm分光光度计测定,cDNA由随机引物(Promega, Southampton, UK)和Omniscript RT-kit (Qiagen)生成。GydF4y2Ba
病毒载量的测定采用RT-PCR,针对RSV l基因,使用TaqMan化学(Applied Biosystems, Life Technologies Ltd, Paisley, UK)和ABI Prism 7500 Fast-Real-Time PCR系统(Life Technologies Ltd)。PCR检测包括50°C 5 min和95°C 10 min,在此之前,在96°C 15 s和60°C 1 min的40个循环。定量探针PCR主混合(Qiagen), 900 nM正向引物(GAA CTC AGT GTA GGT AGA ATG TTT GCA), 300 nM反向引物(TTC AGC TAT CAT TTT CTC TGC CAA T)和100 nM探针(GydF4y2Ba6家GydF4y2Ba-tttgaacctgtctgaacattcccggtt.GydF4y2Ba-tamra.GydF4y2Ba)被使用。检测限为RSV-L基因的10份。从携带RSV L-Gene的片段的PCDNA3质粒的标准曲线进行定量。结果表示为RSV-L基因拷贝数并在日志中转换GydF4y2Ba10.GydF4y2Ba值。TMC353121的抗病毒作用以中位数对数减少表示GydF4y2Ba与GydF4y2Ba未经处理的控制(Δ日志GydF4y2Ba10.GydF4y2Ba).GydF4y2Ba
空斑实验GydF4y2Ba
病毒攻毒后4天取肺均质,700×离心4分钟GydF4y2BaGGydF4y2Ba并且在96孔板中滴定Hep-2细胞单层的稀释液中的上清液和上清液。24小时后,用甲醇固定细胞,并与生物素化的抗RSV抗体(生物发生,ABD Serotec,牛津,英国)孵育,然后是过氧化物酶 - 共轭抗生物素蛋白(Sigma,Dorset,UK)。加入DAB底物(SIGMA快速片)并通过光学显微镜枚举斑块。结果表达为每肺的PFU和抗病毒效果,表达为ΔLogGydF4y2Ba10.GydF4y2Ba与对照组相比。GydF4y2Ba
组织病理学GydF4y2Ba
在一些研究中,未经未洗的肺部福尔马林固定并嵌入石蜡中,切片,并用Haematyxylin-eosin(He)染色。评估肺部的炎性浸润,与PonnURAJ描述的分类类似GydF4y2Baet al。GydF4y2Ba[GydF4y2Ba22.GydF4y2Ba].该方法在本实验室得到了验证。根据间质、肺泡、周围气道及血管的炎症程度,随机分为上、中、下三个切片,进行盲法评分。每个位点的值分别为0(无)、1(最小)、2(轻微)、3(中度)或4(严重)。每只动物的这些评分的总和被用作总肺部炎症评分。由第二名观察员对随机载玻片进行评分,并在显示样本代码时对结果进行比较。GydF4y2Ba
支气管肺泡灌洗细胞计数GydF4y2Ba
通过在孔的含有2%牛血清白蛋白的耳乐平衡盐溶液中用2%利多卡因注入肺部来进行支气管肺泡灌洗(BAL)。使用光学显微镜,从在台盼蓝(0.4%)中稀释的样品计算总活性的BAL细胞。GydF4y2Ba
对于差分计数,将100μlBAL旋转到100×幻灯片上GydF4y2BaGGydF4y2Ba5分钟;将载玻片干燥,用甲醇固定并用他染色。从每个样品和巨噬细胞计算300个细胞,得分多晶型物(对嗜酸性粒细胞)和淋巴细胞进行淋巴细胞。GydF4y2Ba
TMC353121生物分析GydF4y2Ba
将用于TMC353121生物分析的冷冻管通过对1份样品加入3份无水乙醇来去除可能的RSV活病毒。采用合格的液相色谱-串联质谱方法分别对TMC353121的血清和组织样本进行分析。TMC353121检出限为1 ng·gGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba对于肺组织和0.8ng·mlGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba对于血清。GydF4y2Ba
luminex.GydF4y2Ba
采用多重免疫分析(MILLIPLEX MAP Kit;密理博,沃特福德,英国)根据制造商的说明。采用相应的细胞因子标准和对照物对BAL样本进行测定。重复样品中加入小珠子,在4°C孵育过夜。加入检测抗体,在摇床上孵育板,然后在每孔中加入链霉亲和素-藻红蛋白。洗涤后,加入鞘液(PBS 1X),在Luminex 100™(Luminex Corp., Austin, TX, USA)上运行底片。使用StarStation分析中值荧光强度,计算每个细胞因子的浓度。各细胞因子的检出限为3.2 pg·mLGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba.GydF4y2Ba
数据分析GydF4y2Ba
病毒载量表示为中值病毒载量。病毒载荷(ΔLog)的变化计算为未处理和处理组之间的中位数病毒原木之间的差异。GydF4y2Ba
GraphPad Prism软件(GraphPad Software Inc.,La Jolla,CA,USA)用于一种方式ANOVA或Kruskal-Wallis测试,以研究组之间的差异。使用Dunn或Tukey的测试进行治疗的比较。使用线性趋势测试评估剂量响应曲线的趋势。一般线性混合模型用于分析药代动力学数据和体重随时间变化。使用一种Anova分析细胞因子浓度。使用的统计测试在图中表示。GydF4y2Ba
实验设计GydF4y2Ba
在五项研究中分析了TMC353121的抗病毒活性。在RSV感染之前或之后施用该化合物,并且作为这种干预措施的结果测试的免疫参数。药物被送达GydF4y2Ba通过i.v.GydF4y2Ba每日一次慢速给药,可以单次给药,也可以连续多次给药。在一些研究中,在RSV病毒感染前,不同剂量的药物作为单一剂量使用。实验设计的细节见GydF4y2Ba图1AGydF4y2Ba.GydF4y2Ba
结果GydF4y2Ba
BALB / C小鼠TMC353121的药代动力学GydF4y2Ba
TMC353121注射一次,GydF4y2BaI.v.GydF4y2Ba在2.5 mg·kgGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba或0.25 mg·kgGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba.在肺组织,血清中测定药物水平(在线补充GydF4y2Ba图1GydF4y2Ba)、不同时间点BAL液(数据未显示)。TMC353121遵循多室药代动力学,在第一个小时内血清快速衰变GydF4y2BaI.v.GydF4y2Ba注射,然后缩短衰减。从血液中迅速消除药物,导致24小时后血液水平非常低。肺浓度远高于血清浓度,在喷射后8小时的血清浓度高于血清浓度,并且药物在注射后8小时(数据未显示)。在治疗后5天仍然可以在肺部(数据未显示)中仍然检测到非常低的药物水平。GydF4y2Ba
TMC353121可防止病毒引起的体重减轻GydF4y2Ba
鼻内接种2×10GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba第0天的RSV的PFU导致第6天和第7天的重量减肥(GydF4y2Ba图1 bGydF4y2Ba).感染前(第5天至0天)或感染后(第0天至+3天)每天给药TMC353121可显著消除RSV感染的体重减轻效应(GydF4y2Ba图1 bGydF4y2Ba).重要的是,单剂量的TMC353121能够完全防止体重减轻。第7天,对照组的体重显著低于治疗组,而治疗组之间没有显著差异。GydF4y2Ba
TMC353121减少治疗和预防施用中的病毒载量GydF4y2Ba
与未经治疗的对照组相比,给予TMC353121导致病毒载量降低。重复给药的病毒载量中位数降低为0.94±0.49log(第5天至0天)和1.49±1.88log(第0天至+3天),而单次给药的病毒载量中位数降低为0.4±0.42log (GydF4y2Ba表1GydF4y2Ba).GydF4y2Ba
第二项研究分析了TMC353121在不同治疗方案中的疗效。该化合物每天服用,但与RSV挑战有关(研究2;GydF4y2Ba表1GydF4y2Ba那GydF4y2Ba无花果。1AGydF4y2Ba).在本研究中,观察到较低水平的感染(对照组:5.67±0.5次GydF4y2Ba与GydF4y2Ba6.63±0.51次),与研究1相比;然而,当在RSV攻击后的延迟增加时给药时,观察到病毒载量的0.7-1次减少。GydF4y2Ba
TMC353121在BALB / C小鼠中具有显着的抗病毒活性。GydF4y2Ba
TMC353121的抗病毒疗效在预防性方案中的宽剂量范围内探讨,该药物作为单剂量给药;RSV挑战前60分钟(研究3和4;GydF4y2Ba表2GydF4y2Ba).GydF4y2Ba
在这两项研究中,未处理对照组的RSV病毒载量恢复了相似的滴度(5.67±0.5log)GydF4y2Ba与GydF4y2Ba5.55±0.17Log)。基于实时RT-PCR,TMC353121在剂量范围内给药0.25-10 mg·kgGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba导致0.5-1ΔLOG病毒载量减少与未处理的基团相比。这些差异对于研究3中的所有剂量都很重要,但在研究4中没有GydF4y2Ba表2GydF4y2Ba).然而,通过空斑实验,两项研究中所有分析剂量的TMC353121显示每个肺的PFU有统计学意义的降低。GydF4y2Ba
TMC353121减少肺炎GydF4y2Ba
在所有试验剂量中,TMC353121均可降低BAL细胞内流。细胞浸润减少主要归因于巨噬细胞和淋巴细胞(GydF4y2Ba图2一个GydF4y2Ba).对于剂量范围1-10 mg·kgGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba,与未感染rsv的小鼠相比,未感染rsv的小鼠的BAL细胞总量约为感染rsv小鼠的2倍(GydF4y2Ba图2一个GydF4y2Ba).GydF4y2Ba
a)支气管肺泡灌洗(BAL)细胞流入抑制在TMC353121处理的呼吸道合胞病毒(RSV) - 培养的动物中受到抑制。在使用台盼蓝排除的感染和活性的BAL细胞计算后第4天剔除小鼠,并且在氧毒素 - 嗜磷酸(HE)染色后进行差分计数。小鼠(每组五个)在含有TMC535121的RSV感染之前接受一个静脉注射1小时,或者在指定剂量,或载体对照。nm:无感染鼠标。数据显示为平均值±GydF4y2BaSE.GydF4y2Ba.*:总细胞数之间的P <0.05的显着差异。用Dunnett测试用一种方式进行多种比较。淋巴细胞积累的线性趋势GydF4y2Ba与GydF4y2Ba用单向ANOVA评估TMC353121剂量,具有线性趋势的测试。b)在TMC353121处理的RSV感染动物中显着降低了肺细胞浸润。他的代表性幻灯片染色肺部。B.GydF4y2Ba1GydF4y2Ba:未感染肺;B.GydF4y2Ba2GydF4y2Ba: RSV-infected肺;B.GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba: tmc353121处理(10 mg·kgGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba)和RSV感染的肺。感染后5天分析肺部。下面的数字表示特定视图是如何分级的。评分系统的细节在材料和方法部分中描述。c)代表性实验中的肺组织病理分数。用他染色肺部,以评估细胞浸润及其本地化。根据类似于Ponnuraj所描述的方案进行评分肺部GydF4y2Baet al。GydF4y2Ba[GydF4y2Ba22.GydF4y2Ba].在该实验中,每组由两只小鼠组成。每次肺评估三个肺切片(上部,培养基和下水平段)。nm:无感染,非生成的小鼠。显示了总组织病理学分数和组织特异性分数的中位数。使用kruskal-wallis与Dunn的测试进行多次比较。**:P <0.005的显着差异。p值10 mg·kgGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba组GydF4y2Ba与GydF4y2Ba0-mg·公斤GydF4y2Ba-1GydF4y2Ba组(生理盐水)显示。这样的评估在另外四项研究中进行,每组2-5只小鼠。中性粒细胞:多形核白细胞。GydF4y2Ba
肺切片染色,他染色,以评估细胞浸润的定位和程度。未处理小鼠的12分的总组织病理学分数表明临床上显着的RSV感染,导致支气管炎和肺泡空间中的炎性细胞积聚(GydF4y2Ba图2 cGydF4y2Ba).与未感染rsv的对照组相比,治疗组小鼠的总评分和各室(间质、肺泡、细支气管周围和血管周围)评分显著降低,与未感染对照组(GydF4y2Ba图2 cGydF4y2Ba).组织切片染色用于组织病理学评估的例子见GydF4y2Ba图2B.GydF4y2Ba.在未感染的对照组和感染的治疗组之间没有视觉差异。在另一项研究中证实,TMC353121治疗的肺组织病理学改善,剂量低于10 mg·kgGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba剂量(数据未显示)。GydF4y2Ba
TMC353121在BAL中显着降低了测试的趋化因子和细胞因子的水平(GydF4y2Ba无花果。3.GydF4y2Ba).在TMC353121处理和RSV感染的动物中,炎性细胞因子(例如肿瘤坏死因子(TNF)-α,白细胞介素(IL)-6和IL-1β)和趋化因子(干扰素-γ-诱导蛋白10(在24小时后观察到BAL中的IP-10),KC,巨噬细胞炎症蛋白(MIP)-1α和单核细胞趋化蛋白(MCP))。在4天后研究了相同的细胞因子/趋化因子,但没有更大的差异,一些细胞因子低于检测限(在线补充GydF4y2Ba图2GydF4y2Ba).IP-10和KC也存在于RSV感染24小时后的血清中,并且在接受TMC353121治疗的动物中显著降低(数据未显示)。GydF4y2Ba
在TMC353121处理的呼吸道合胞病毒(RSV) - 培养的动物中抑制了早期的趋化因子和细胞因子。通过在RSV感染后一天获得的小鼠获得的支气管肺泡灌洗细胞上清液,用于使用Luminex系统存在趋化因子和细胞因子。在这个实验中:在RSV组中,n = 4;在RSV + TMC353121组中,n = 5;在无感染的,非生成的(nm)组,n = 3.数据显示为平均值±GydF4y2BaSE.GydF4y2Ba.*:使用具有Tukey测试的单向ANOVA分析的P <0.05的显着差异。IL:白细胞介素;MIP:巨噬细胞炎症蛋白;IP-10:干扰素-γ诱导的蛋白10;MCP:单核细胞趋化蛋白;TNF:肿瘤坏死因子。GydF4y2Ba
讨论GydF4y2Ba
我们的结果证明了RSV感染鼠模型中融合抑制剂TMC353121的有效抗病毒活性。该药物耐受良好,并预防小鼠RSV感染的体重减轻特征[GydF4y2Ba23.GydF4y2Ba].在这些研究中,即使在单一药物管理后,也可以看到体重的最佳回收率(GydF4y2Ba图1 bGydF4y2Ba).GydF4y2Ba
药代动力学研究表明,在靶抑制浓度高于血清中存在TMC353121(7 ng·mLGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba)对于前24小时,对于2.5mg剂量而少0.25 mg·kgGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba剂量(在线补充GydF4y2Ba图1GydF4y2Ba).基于半最大有效浓度值为0.07pg·ml的半最大有效浓度值计算靶向血浆浓度GydF4y2Ba-1GydF4y2Ba获得的GydF4y2Ba在体外GydF4y2Ba测定[GydF4y2Ba24.GydF4y2Ba,假设是100%的蛋白质结合。这种化合物很快就会从体内排出;然而,它的高效力似乎平衡了快速消除。GydF4y2Ba
BALB/c小鼠模型对RSV是半允许的,在肺上皮细胞中病毒复制有限。在BALB/c小鼠中,RSV首先感染鼻腔上皮细胞[GydF4y2Ba25.GydF4y2Ba然后扩散到肺部,在感染后的第4天达到高峰。最理想的情况是,RSV融合抑制剂应该在感染时存在,以阻止病毒进入细胞。这里展示了TMC353121治疗方案的结果(研究2;GydF4y2Ba表1GydF4y2Ba)证明药物能够在RSV攻击后2天内施用时减少病毒复制,证实持续的病毒复制确实发生在该鼠模型中,并且甚至可以通过延迟药物施用来抑制。相比之下,当在鼠模型中的治疗过程中使用时,其他F蛋白质融合抑制剂如BMS-433771和RFI-641无效[GydF4y2Ba13.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba26.GydF4y2Ba]但是,虽然RFI-641在以这种方式施用时显示了非洲绿猴的疗效[GydF4y2Ba27.GydF4y2Ba].GydF4y2Ba
TMC353121可在0.25-10 mg·kg的大剂量范围内降低病毒载量GydF4y2Ba-1GydF4y2Ba,当由Taqman和斑块测定测量时。两种方法以不同方式量化RSV;Taqman RT-PCR测量RSV-L-Gene拷贝的数量(在传染性病毒和缺陷颗粒中存在),而斑块测定量化了完全功能性的传染病。该RT-PCR方法不区分用于挑战的病毒,并且新产生的病毒颗粒因此来自功能测定的附加信息在准确的数据解释中是关键的。GydF4y2Ba
在我们的研究中,与未治疗对照组相比,感染和治疗小鼠向BAL液的细胞内流减少,淋巴细胞数量呈剂量依赖性减少(p<0.05为线性趋势;GydF4y2Ba图2一个GydF4y2Ba).分析小鼠模型肺炎症最高时的肺组织病理学[GydF4y2Ba28.GydF4y2Ba]以肺炎为特征[GydF4y2Ba25.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba29.GydF4y2Ba]巨噬细胞和淋巴细胞渗透血管外和血浆Chiolar组织[GydF4y2Ba25.GydF4y2Ba].tmc353121处理小鼠的组织病理切片与正常小鼠相似(GydF4y2Ba图2 bGydF4y2Ba和c)。GydF4y2Ba
TMC353121对肺组织病病毒的保护作用与病毒复制的降低相关。虽然有人会考虑这种类型的相关性,但情况并非总是如此。值得注意的是,抗F蛋白单克隆抗体帕尔凡押可显着降低病毒载荷,但在棉大鼠RSV模型中没有改善肺组织病理学和肺炎[GydF4y2Ba30.GydF4y2Ba].在同一项研究中,Numax比palivizumab表现出更好的抗病毒活性和肺组织病理学改善。我们的结果与其他结果的差异可能是由于化合物的不同作用机制造成的。抗体与病毒形成的复合物必须被抗原提呈细胞清除,这一过程启动免疫途径,导致趋化因子的释放,吸引其他细胞(主要是淋巴细胞)到肺。这反映在组织病理学上,可见细胞浸润,被抗原/抗体复合物吸引。相反,TMC353121阻断了病毒与靶细胞的融合,这一过程与趋化因子的释放无关,因此其他细胞不会被吸引到肺部。GydF4y2Ba
正如我们在这里展示的,RSV感染导致,在数小时内,释放和生产趋化因子和炎症细胞因子(RSV感染和载体治疗GydF4y2Ba图3.GydF4y2Ba)导致巨噬细胞、淋巴细胞和中性粒细胞数量增加。在我们的模型中,TMC353121治疗小鼠的IP-10、IL-1β、KC、MIP-1α、MCP-1、IL-6和TNF-α水平降低(GydF4y2Ba无花果。3.GydF4y2Ba),同时BAL细胞数量减少,主要集中在巨噬细胞和淋巴细胞亚群(GydF4y2Ba图2一个GydF4y2Ba),暗示趋化因子在肺炎早期趋势下趋化因子的关键作用。这些调解员在非生物和药物治疗组的4天内恢复与正常动物中的水平不同(在线补充GydF4y2Ba图2GydF4y2Ba).GydF4y2Ba
新生儿免疫系统天生倾向于辅助t - 2型反应,生命早期RSV感染可能会进一步增强这些反应。呼吸道合胞病毒感染的理想干预措施是预防,但目前的选择有限。TMC353121具有显著的抗病毒活性,特别是在治疗方案中使用时,以及对肺部炎症的保护作用,使得TMC353121成为治疗细支气管炎和RSV感染引起的呼吸并发症的一个有希望的候选药物。为了更好地理解其保护机制,并验证该分子对RSV的治疗作用,还需要进一步的研究。GydF4y2Ba
致谢GydF4y2Ba
这项工作是由佛兰德社区IWT 070005项目赞助的。B. Wang和P. Openshaw得到了威康信托基金071381/Z/03/Z的资助。作者感谢F. Culley(伦敦帝国理工学院,伦敦,英国)对手稿的批判性阅读。GydF4y2Ba
脚注GydF4y2Ba
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