摘要GydF4y2Ba
呼吸道合胞病毒(RSV)感染的严重程度范围很广。局部免疫反应在多大程度上参与RSV疾病的发病机制,以及这种反应的哪些标志物对确定疾病的严重程度至关重要,仍然是一个有争议的问题。GydF4y2Ba
对呼吸道合胞病毒感染期间鼻咽分泌物(NPA)的局部免疫反应进行了研究。在家中患有轻度疾病的呼吸道合胞病毒感染婴儿(n=8)、住院婴儿(n=10)和需要机械通气的婴儿(n=7)的筛查队列中,分析了47种疾病严重程度的潜在标志物结果在因RSV感染而住院的婴儿队列(n=200)中得到证实。最后,在因RSV感染而住院的婴儿队列(n=465)和健康对照组(n=930)中研究了基因验证。GydF4y2Ba
住院婴儿npa中TIMP-1(金属蛋白酶组织抑制剂)的浓度高于在家婴儿npa (1199)GydF4y2Ba与GydF4y2Ba568 ng·毫升GydF4y2Ba-1GydF4y2Ba基质金属蛋白酶(MMP)-3(765)也有类似的结果GydF4y2Ba与GydF4y2Ba370 pg·毫升GydF4y2Ba-1GydF4y2BaMMP-3在一个较大的队列中被确认为疾病严重程度的标志物,并且GydF4y2BaMMP3GydF4y2Bars522616基因多态性与严重RSV感染相关(OR 0.82, p<0.05)。GydF4y2Ba
总之,细胞外基质蛋白酶在RSV毛细支气管炎的发病机制中起重要作用。GydF4y2Ba
呼吸合胞病毒(RSV)是幼儿急性呼吸道疾病住院的主要原因[GydF4y2Ba1GydF4y2Ba].RSV感染的严重程度可以从轻度上呼吸道感染(URTI)到严重的下呼吸道感染(LRTI)甚至死亡[GydF4y2Ba2GydF4y2Ba].大多数婴儿仅在门诊环境中发生荨麻疹并恢复;然而,1-3%的患者需要住院观察和支持性护理,以及∼10%的住院婴儿因严重RSV LRTI需要机械通气[GydF4y2Ba1GydF4y2Ba那GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba].需要机械通气的婴儿通常具有低的后截面时代[GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba]明确定义的RSV LRTI高危人群包括早产婴儿、早产儿慢性肺病、先天性心脏病、囊性纤维化、免疫缺陷障碍和唐氏综合征[GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba].严重疾病的其他危险因素包括年龄小于3个月、拥挤的生活条件、室内烟雾污染和男性[GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba].GydF4y2Ba
除了这些已知的危险因素外,对于以前健康的婴儿疾病严重程度差异很大的原因知之甚少。由于没有针对RSV感染的有效治疗方法或广泛可用的疫苗,因此未来的管理对描述这种复杂感染的确切机制至关重要不同的疾病严重程度可能是呼吸道局部免疫反应的差异。因此,我们假设原发性RSV感染期间局部炎症反应的变化可能与该呼吸道感染的严重程度有关。为了研究这一假设,我们比较了呼吸道合胞病毒感染严重程度不同的婴儿:在家中患有轻度呼吸道合胞病毒感染的婴儿、因呼吸道合胞病毒LRTI住院的婴儿和因严重呼吸道合胞病毒LRTI而机械通气的婴儿。随后在因严重呼吸道合胞病毒感染住院的较大婴儿队列中测量与疾病严重程度相关的标记物。最后,对遗传因素进行分析所选标记的多态性与疾病严重程度相关,因为识别在疾病易感性中起重要作用的基因可以加强对疾病发展的理解。GydF4y2Ba
材料和方法GydF4y2Ba
研究人群GydF4y2Ba
筛选队列GydF4y2Ba
三组患者因住院和机械通气的需求而引人注目。第一个组(n = 8)由婴儿组成,患有在家里恢复的温和RSV感染。这些婴儿参加了荷兰羊水(NAF)研究[GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba,一组在无并发症妊娠后足月出生的婴儿。第二组(n=10)包括因RSV LRTI住院的婴儿。第三组(n=7)为重症RSV LRTI患儿,入院于儿科重症监护病房(PICU),需要机械通气[GydF4y2Ba8.GydF4y2Ba].第二组和第三组的选择标准设计为入组年龄小于13个月、既往健康、首次RSV LRTI发作的儿童。LRTI的症状为严重咳嗽、喘息、声音嘶哑、喘鸣、呼吸急促、发绀和呼吸暂停。婴儿唐氏综合征,哮喘史,或心脏或肺病理排除。如前所述,2007年10月至2008年3月在荷兰同一地区收集了所有三组婴儿的未稀释鼻咽抽吸物(npa) [GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba-GydF4y2Ba9.GydF4y2Ba].所有国家行动纲领都采用统一的方法收集和处理,研究人员都以同样的方式接受培训。GydF4y2Ba
确认队列GydF4y2Ba
在RSV-NPA研究中涉及婴儿的NPA中另外研究与筛查队列中的RSV疾病严重程度相关的蛋白质标记,以确认差异不是由于小筛选队列中的杂散发现。本研究由235名婴儿住院治疗RSV感染。23所住院婴儿所需的机械通气,同时在这队列中,在家中恢复了温和的RSV疾病的婴儿存在。纳入RSV-NPA研究的纳入标准以前的健康儿童<13个月住院治疗,第一次RSV LRTI。通过来自NPA的上皮细胞中的正免疫荧光证实了RSV感染。婴儿唐氏综合征,哮喘史,或心脏或肺病理排除。与筛查队列中的相同技术用于获得2007年10月至2009年3月在荷兰的15个大型城市医院收集的婴儿的未稀释NPA。GydF4y2Ba
基因验证队列GydF4y2Ba
为进行遗传关联分析,将两个队列的严重RSV感染婴儿的数据进行合并。其中一个队列包括480例既往因RSV LRTI而住院的健康婴儿[GydF4y2Ba10GydF4y2Ba-GydF4y2Ba12GydF4y2Ba]以及上述RSV-NPA研究中的另一组235名婴儿。仅这两组中的荷兰婴儿(n=465)这些婴儿中有81名需要在PICU进行额外的机械通气。基因型分布与930名对照组的基因型分布进行了比较,这些对照组是从Regenboog研究中随机抽取的,这是一项大型荷兰人群健康检查调查[GydF4y2Ba13GydF4y2Ba],如前所述[GydF4y2Ba10GydF4y2Ba]。所有三项队列研究均由所有参与医院的伦理审查委员会批准。所有婴儿的父母在登记前均已书面知情同意。GydF4y2Ba
侦查GydF4y2Ba
收集后,将婴儿的npa保存在-80°C。在测量标记物之前,筛选队列的样本按前面所述称重、稀释、超声和离心[GydF4y2Ba9.GydF4y2Ba].冷冻样品被运送到Rules-Based Medicine (RBM, Austin, TX, USA),其中150 μL用于Luminex 100仪器(Luminex, Austin, TX, USA)中标记物浓度的测量。在human Multi-Analyte Profile 1.6 (Myriad RBM, Austin, TX, USA)中测量了90个标志物,以选择与疾病严重程度相关的蛋白标志物。然而,本试验是为测定血清标志物而开发的。在本研究中,本方法用于检测NPA中的标记物,对前三个NPA进行不同稀释度的测量,以选择哪些标记物在NPA中能够被准确检测。该分析还显示,NPA中10种标志物(降钙素、促红细胞生成素、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、免疫球蛋白(Ig)E、白细胞介素(IL)-2、IL-5、IL-12p40、IL-12p70、IL-13和IL-15)的水平过低,不能考虑进行统计学分析。总共有47种不同的标记物可以准确测量,在分析呼吸道合胞病毒感染婴儿的npa时具有临床相关性。GydF4y2Ba
从参与rsvp -NPA研究的200名婴儿中,可以获得足够量的NPA来证实筛查的结果。npa称重并在PBS(4°C)中稀释(Tritium Microbiology, Eindhoven,荷兰),在冰上超声15 s,输出控制在2,占空比50%,使用带微尖的250型Branson sonifier (VWR, Amsterdam, Netherlands),并在10,000×离心GydF4y2BaGGydF4y2Ba4°C保存5分钟。根据制造商说明书(R&D Systems, Abingdon, UK),使用商品化的ELISA试剂盒测定总基质金属蛋白酶(MMP)-3和组织金属蛋白酶抑制剂-1 (TIMP)的浓度。所有样品在同一天进行酶联免疫吸附测定(elisa),各组随机分布在各板上。GydF4y2Ba
基因分型GydF4y2Ba
如前所述分离出DNA [GydF4y2Ba14GydF4y2Ba].单核苷酸多态性(SNPS)RS522616和RS679620GydF4y2BaMMP3GydF4y2Ba, rs4898在GydF4y2BaTIMP1GydF4y2Ba由KBioscience (Hoddesdon, UK) SNP基因分型服务公司使用KASPar技术对所有参与rsvp - npa和rsvp - gene研究的465名荷兰婴儿和rsvp - gene研究的930名人群对照进行了基因分型。每个SNP的基因组DNA用量为1.5 μL, 7 ng·μLGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba.如果基因组DNA较少,则在KBioscience使用引物延伸预扩增和耐热DNA聚合酶进行全基因组扩增。1.1%的样本基因分型失败。用SNPviewer2 (Kbioscience, Hoddesdon, UK)将基因分型数据以散点图的形式显示出来。所有snp均处于Hardy-Weinberg平衡状态,并分析与严重RSV疾病的相关性。GydF4y2Ba
统计分析GydF4y2Ba
采用对数变换和单因素方差分析检验比较三组间标记水平。错误发现率为5%,根据BGydF4y2BaenjaminiGydF4y2Ba和HGydF4y2Ba奥伯格GydF4y2Ba[GydF4y2Ba15GydF4y2Ba用来纠正多种比较。只有在组中观察到显着差异,只有一个渔民GydF4y2Ba事后GydF4y2Ba使用Bonferroni调整检验来确定组间的确切差异。两组之间的标记水平用Mann-Whitney u检验进行分析。遗传分析采用2×2表格的卡方分布。两组住院时间比较采用Mann-Whitney u检验,三组采用Kruskal-Wallis检验。所有分析使用SPSS Statistics 17.0 (SPSS Inc, Chicago, IL, USA)和R软件(R Development Core Team 2011;统计计算基础,维也纳,奥地利)。所有假设检验都是双侧的,5%的阈值具有统计学意义。的GydF4y2BaTIMP1GydF4y2Ba基因位于X-染色体上;因此,单独分析雄性和女性。GydF4y2Ba
后果GydF4y2Ba
RSV严重程度标记物TIMP-1和MMP-3的选择GydF4y2Ba
筛查队列包括一组患有原发性呼吸道合胞病毒感染和轻度疾病(非住院)的婴儿、一组患有呼吸道合胞病毒感染的住院婴儿和一组患有严重呼吸道合胞病毒疾病的机械通气婴儿。在该队列中,大多数婴儿为男性(84%),足月出生(84%)。患有轻度疾病的婴儿在感染时比因严重呼吸道合胞病毒感染而入院的婴儿大(GydF4y2Ba表1GydF4y2Ba).三组婴儿的胎龄没有差异。GydF4y2Ba
在筛查队列的三组中,比较了在NPA中可以准确测量的47个标记物的水平(详情见材料和方法)。只有住院婴儿的五项标志物水平较高,而机械通气婴儿的五项标志物水平没有升高。因此,这些标记物(内皮素-1、趋化因子(C-C基序)配体(CCL)11、S100钙结合蛋白A12(S100A12)、IL-10和IgM)与疾病严重程度无关(GydF4y2Ba表2GydF4y2Ba).有三项指标与疾病严重程度相关,GydF4y2BaIE。GydF4y2Ba与在家轻微呼吸道合胞病毒感染的婴儿相比,住院和机械通气婴儿的呼吸道合胞病毒含量更高。住院和机械通气婴儿的npa水平均高于在家婴儿的npa (GydF4y2Ba表2GydF4y2Ba和在线补充图S1)。TIMP-1是MMPs的天然抑制剂,参与细胞外基质的降解。细胞外基质为细胞提供支持和支撑,分隔组织和调节细胞间的通讯。除npa中TIMP-1水平不同外,通气组婴幼儿npa中MMP-3浓度高于居家组(GydF4y2Ba表2GydF4y2Ba和在线补充图S1)。此外,因严重RSV LRTI住院或机械通气婴儿的npa水平高于呆在家里的婴儿的npa水平(GydF4y2Ba表2GydF4y2Ba和在线补充图S1)。GydF4y2Ba
MMP-3作为RSV疾病严重程度标志的确认GydF4y2Ba
为了证实TIMP-1和MMP-3与RSV疾病严重程度的相关性,在RSV-NPA研究中分析了TIMP-1和MMP-3的水平。对因RSV LRTI住院的婴儿和因严重RSV LRTI机械通气的婴儿组成的大型队列的NPA进行了分析。这些婴儿的一般特征如所示GydF4y2Ba表1GydF4y2Ba.其中男性多于女性。机械通气的婴儿在感染时比不使用机械通气的住院婴儿更年轻。GydF4y2Ba图1GydF4y2Ba结果表明,机械通气婴儿npa中MMP-3水平明显高于住院婴儿npa。两组间TIMP-1水平具有可对比性。为了评估年龄和性别可能造成的混淆,我们分析了这两个特征与TIMP-1和MMP-3浓度的关系。性别或年龄与TIMP-1和MMP-3水平之间没有统计学关联。GydF4y2Ba
确认队列:基质金属蛋白酶(MMP)-3与呼吸道合胞病毒感染婴儿鼻咽分泌物(NPA)中呼吸道合胞病毒(RSV)疾病的严重程度相关。分析因呼吸道合胞病毒下呼吸道感染(LRTI)住院的婴儿(n=186)或因呼吸道合胞病毒下呼吸道感染(n=14)在儿科重症监护病房机械通气的婴儿(n=14)的NPA中a)MMP-3和b)金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)1的水平分析组的中位数。GydF4y2Ba#GydF4y2Ba:P = 0.002通过Mann-Whitney U-Test。GydF4y2Ba
TIMP1和MMP3在RSV病发病机制中的遗传验证GydF4y2Ba
与疾病严重程度正相关的标记物可能参与确定疾病严重程度,也可能仅仅是病理程度的反映。相同基因的遗传关联有利于确定疾病严重程度。因此,在GydF4y2BaTIMP1GydF4y2Ba和两个单核苷酸多态性GydF4y2BaMMP3GydF4y2Ba对465名RSV LRTI住院婴儿和930名人群对照进行基因分型GydF4y2BaMMP3GydF4y2Ba基因与等位基因水平的RSV疾病严重程度有关(GydF4y2Ba表3GydF4y2Ba).该SNP的启动子区域的主要等位基因GydF4y2BaMMP3GydF4y2Ba与对照组相比,RSV LRTI患儿的发生率较低(OR 0.821, 95% CI 0.677-0.996)。单核苷酸多态性rs679620在GydF4y2BaMMP3GydF4y2Ba和rs4898GydF4y2BaTIMP1GydF4y2Ba当婴儿RSV LRTI与人口对照组比较时,两者之间没有关联。然而,当需要机械通气的男性亚组与男性对照组比较时,发现了呼吸道合流病毒感染的相关性GydF4y2BaTIMP1GydF4y2Ba.机械通气男孩RSV LRTI的rs4898 t等位基因频率较高(OR 2.168, 95% CI 1.161-4.049) (GydF4y2Ba表4GydF4y2Ba).在女性中,两种基因之间没有关联GydF4y2BaTIMP1GydF4y2Ba单核苷酸多态性与严重RSV LRTI。TIMP-1或MMP-3水平与相应的单核苷酸多态性之间未发现关联。GydF4y2Ba
另外,分析了疾病严重程度的二次结果。医院的住宿时间是在219名男性和166名女性婴儿中确定为RSV LRTI。SNP RS4898 in.GydF4y2BaTIMP1GydF4y2Ba与RSV感染男性住院时间相关,而与女性住院时间无关(GydF4y2Ba图2GydF4y2Ba).排除机械通气婴儿的亚组分析显示,相关性仍然显著。单核苷酸多态性在GydF4y2BaMMP3GydF4y2Ba与住院时间无关(数据未显示)。GydF4y2Ba
基因验证队列:呼吸道合胞病毒(RSV)感染男性组织金属蛋白酶抑制剂(TIMP)-1单核苷酸多态性(SNP) rs4898与住院时间相关SNP RS4898 in.GydF4y2BaTIMP1GydF4y2Ba与RSV感染的男性医院的逗留时间有关,但不在女性中。基因型和逗留时间是确定的a)219男性婴儿(P = 0.005通过Mann-Whitney U-Test)和B)166名女性婴儿住院治疗RSV降低呼吸道感染。GydF4y2Ba
讨论GydF4y2Ba
本研究表明MMP和金属蛋白酶抑制剂均影响RSV感染婴儿的疾病严重程度。呼吸道合胞病毒LRTI住院患儿npa中TIMP-1和MMP-3水平高于呼吸道合胞病毒感染患儿。有趣的是,MMP-3和TIMP-1在功能上密切相关,都参与了细胞外基质的动态变化,表明这一过程在确定疾病严重程度方面非常重要。在一大批患有RSV LRTI的住院和机械通气婴儿中,发现MMP-3与筛查队列中发现的严重RSV疾病相关。两组间TIMP-1水平具有可对比性。然而,这并不令人惊讶,因为在该确认队列中没有包括家中轻度疾病的婴儿,而且在我们的筛查队列中,住院和机械通气婴儿的TIMP-1升高到类似的程度。此外,在一个大队列中,这些标记的相应基因的SNPs与RSV疾病的严重程度相关,支持这些基因参与决定疾病严重程度的假设,较高的蛋白水平不仅仅是病理程度的反映。GydF4y2Ba
本研究中测试的一组标记物还包括另外三种参与细胞外基质形成的蛋白质,GydF4y2BaIE。GydF4y2BaMMP-2、MMP-9和S100A12。MMP-2显示出相关性的趋势;但是,在校正多次测试后,未发现任何差异(GydF4y2Ba表2GydF4y2Ba).S100A12是一种多功能促炎细胞外因子,通过螯合Zn抑制MMP-2、MMP-3和MMP-9GydF4y2Ba2+GydF4y2Ba离子(GydF4y2Ba16GydF4y2Ba那GydF4y2Ba17GydF4y2Ba].在住院婴儿的npa中观察到较高水平的S100A12,但在机械通气儿童中没有观察到。这些结果强调了在RSV疾病严重程度的细胞外基质动力学中涉及的蛋白质的重要性。相反,npa中MMP-9水平在不同RSV疾病严重程度的三组之间具有可比性。GydF4y2Ba
基质金属蛋白酶是锌GydF4y2Ba2+GydF4y2Ba-根据底物特异性分类的依赖性蛋白酶。25种已知的基质金属蛋白酶能够降解各种细胞外基质蛋白[GydF4y2Ba18GydF4y2Ba那GydF4y2Ba19GydF4y2Ba].它们也涉及一种非缺乏症的基质分子的功能调节,例如细胞因子和趋化因子(在[GydF4y2Ba19GydF4y2Ba-GydF4y2Ba22GydF4y2Ba])。Timps在组织重塑期间调节MMP活性,其中每个TIMP是特定MMPS的抑制剂[GydF4y2Ba23GydF4y2Ba那GydF4y2Ba24GydF4y2Ba].因此,例如,TIMP-1与MMP-9的比值经常被用作衡量MMP-9活性的指标。在本研究中,没有添加MMP-3与TIMP-1的比值,因为在两组确认队列中TIMP-1水平相似。因为TIMP-1也抑制除MMP-3之外的其他mmp,这个比例也无助于得出关于鼻吸液中MMP-3活性的结论。MMP活动与包括传染病在内的一系列疾病的严重程度有关。例如,与严重脓毒症幸存者相比,非幸存者的TIMP-1水平更高[GydF4y2Ba25GydF4y2Ba].此外,timp -1缺陷小鼠对肺部感染的抵抗力增强GydF4y2Ba假单胞菌铜绿假单胞菌GydF4y2Ba[GydF4y2Ba26GydF4y2Ba,表明MMP活性的抑制与清除感染的能力降低有关。相反,我GydF4y2Ba体外培养GydF4y2Ba研究表明TIMP-1抑制病毒复制和合胞体形成[GydF4y2Ba27GydF4y2Ba]这些数据似乎与我们的研究结果相矛盾;然而,在这样一个模型中,组织损伤和病毒清除之间的平衡与GydF4y2Ba在活的有机体内GydF4y2Ba的情况。而MMP活性可能有助于清除感染GydF4y2Ba在活的有机体内GydF4y2Ba,它也与增强组织损伤有关。在肺泡壁形成含有igg的免疫复合物后,缺乏MMP-3的小鼠比野生型小鼠的组织损伤更小[GydF4y2Ba28GydF4y2Ba].根据这一点,dGydF4y2Ba艾薇GydF4y2Ba等GydF4y2Ba.[GydF4y2Ba29GydF4y2Ba]研究表明,在早产儿慢性肺病患儿中MMP-9/TIMP-1复合物的水平高于呼吸窘迫综合征患儿,这表明MMP-9/TIMP-1复合物在持续的呼吸系统疾病中起着重要作用GydF4y2Ba利奥特GydF4y2Ba等GydF4y2Ba.[GydF4y2Ba18GydF4y2Ba]报道了呼吸道合胞病毒引起的缺氧性毛细支气管炎与轻度呼吸道合胞病毒病相比,TIMP-1蛋白含量更高有一定的相关性,但其数据没有达到统计学意义。GydF4y2Ba
综上所示,这些数据表明MMP活性在清除感染的同时促进组织损伤是必不可少的。因此,严重呼吸道合胞病毒感染的婴儿TIMP-1水平较高可能是试图限制严重疾病的伤害,这可能以减少对感染的清除为代价。因此,通过调节TIMP或MMP水平来严格控制MMP活性可能对治疗有好处。然而,在我们合理地将这些复杂酶视为治疗靶点之前,需要对它们的生物学特性有一个全面的了解[GydF4y2Ba19GydF4y2Ba].GydF4y2Ba
我们的研究证实了TGydF4y2Ba询问者GydF4y2Baet al。GydF4y2Ba[GydF4y2Ba30.GydF4y2Ba在血清中显示,在RSV LRTI急性期,需要机械通气的婴儿与住院、不通气的婴儿相比,血浆中生长激素水平更高。血浆中较高水平的生长激素可以解释本研究中发现的较高水平的npa。GydF4y2Ba
RSV感染婴儿肺部的细胞因子和趋化因子水平已被广泛研究,趋化因子水平与疾病严重程度有关[GydF4y2Ba31GydF4y2Ba]我们的结果显示,高水平的趋化因子(IL-8、CCL2、CCL3、CCL5和CCL11;GydF4y2Ba表2GydF4y2Ba)存在于患有严重呼吸道合胞病毒病的婴儿的npa中,与MGydF4y2BaCGydF4y2BaNGydF4y2Ba阿玛拉GydF4y2Baet al。GydF4y2Ba[GydF4y2Ba31GydF4y2Ba].然而,我们也观察到这些趋化因子在轻度呼吸道合胞病毒病婴儿中同样高水平。因此,趋化因子在决定RSV疾病严重程度中的作用可能是有限的。GydF4y2Ba
综上所述,结合这些免疫学和遗传学数据,提示细胞外基质降解相关蛋白可能在RSV毛细支气管炎发病机制中发挥重要作用,提供了新的潜在干预靶点。GydF4y2Ba
致谢GydF4y2Ba
我们感谢C. Tacke、B. Waalewijn、E. Schouten(均来自荷兰乌得勒支大学医学中心威廉敏娜儿童医院儿科学部)以及阿尔米尔Flevo医院所有儿科医生、护士和实验室技术人员对样本采集的帮助;阿默斯福特的梅德医疗中心;Gelre医院,阿;阿纳姆Rijnstate医院;埃德的Gelderse Vallei医院;Gorinchem的Rivas Beatrix医院;Jeroen Bosch医院的- hertogenbosch;Blaricum Tergooi医院;纽威根的圣安东尼斯医院;蒂尔堡的Twee Steden医院; Diakonessen Hospital, Utrecht; Mesos Medical Center, Utrecht; University Medical Center, Utrecht; Maxima Medical Center, Veldhoven; Zuwe Hofpoort Hospital, Woerden, all in the Netherlands. We are grateful to M. Belderbos (Dept of Pediatrics, Wilhelmina Children’s Hospital, University Medical Centre Utrecht) for her laboratory assistance.
脚注GydF4y2Ba
这篇文章的补充材料可从GydF4y2Bawww.www.qdcxjkg.com.GydF4y2Ba
利益陈述书GydF4y2Ba
没有人申报。GydF4y2Ba
- 收到GydF4y2Ba2011年1月22日。GydF4y2Ba
- 公认GydF4y2Ba2011年11月13日。GydF4y2Ba
- ©ERS 2012GydF4y2Ba
参考资料GydF4y2Ba
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