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我们确定了两个躯体DICER1突变的两个成人肺胚细胞瘤,暗示DICER1在因果关系http://ow.ly/10aM9V
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一些罕见的肺肿瘤形态模仿胚结构发展中人类的肺。从历史上看,这些blastomatous肿瘤被描述的涵盖性术语下肺胚细胞瘤。随后,截然不同的实体是认可的,比如童年pleuropulmonary胚细胞瘤(磅)1)(国际疾病分类肿瘤(ICD-O-3)代码8973/3)。后来,成人肺胚细胞瘤是胎儿分为高分化腺癌(WDFA) (ICD 8333/3)和肺胚细胞瘤(ICD 8972/3) [2]。肺胚细胞瘤是一种两相的上皮和间叶细胞恶性肿瘤,而含量一直是纯粹的肉瘤的WDFA的特点是一个单相不成熟的上皮细胞。自1988年以来,PPB受到特别关注儿童由于其独特的发展进程,从相对懒惰neonatal-onset肺囊肿,积极cystic-solid和固体肉瘤72岁个月;十亿分之2)的地位预示着新承认家族性肿瘤易感性综合症和3)其强大的协会与细胞和体细胞DICER1十亿分之突变,不仅如此,而且对其他许多肿瘤的多效性的倾向综合症(现在称为DICER1综合症)。直到最近,无论是WDFA还是肺胚细胞瘤被观察到在家庭展现DICER1综合症(3]。然而,在2015年,我们确定了一个躯体DICER1核糖核酸酶希望具有突变(4WDFA),出现在一个16岁的细胞DICER1突变载体(5]。除了DICER1PPB WDFA,突变体CTNNB1突变(编码β-catenin)似乎描述WDFA和肺胚细胞瘤(6],PPB(不太频繁7,8]。相比之下,TP53突变被发现在两磅(8)和肺胚细胞瘤(9),但不是WDFA [9]。
鉴于WDFA的原始病理分组,磅和肺胚细胞瘤和互有重叠的分子异常的存在在这些病变,如前所述,我们质疑肺胚细胞瘤也可以的DICER1突变。因此,我们分析了DICER1状态在一个婴儿和两个成人肺胚细胞瘤Sanger测序和/或目标捕获下一代测序紧随其后。
机构审查委员会批准的这项研究是麦吉尔大学的医学院(A12-M117-11A)和执行充分告知患者或父母的同意。综述了肿瘤的病理学家所指的机构和中央参考病理学家(d . Bouron-Dal Soglio和摘要。Nguyen)。我们获得外周血DNA案件1(成人发病)和3(婴儿发病);formalin-fixed石蜡包埋(FFPE)从所有情况下肿瘤组织;FFPE non-tumourous肺组织从案例2(成人发病);从案例3和snap-frozen肿瘤组织。
桑格测序和/或Fluidigm访问基于数组的下一代测序(美国Fluidigm,旧金山,CA)被用来屏幕编码突变和变异exon-intron边界附近的肿瘤基因组DNA (gDNA),如前所述[10]。宪法的DNA也被用于确定确定突变的细胞或体细胞来源的PCR扩增的桑格测序紧随其后。DNA和RNA提取从FFPE样品如前所述11]。
我们PCR扩增外显子3的CTNNB1使用以下三对引物和一个前所述降落PCR计划(12]:CTNNB1_1_F:5′-ATGGAACCAGACAGAAAAGCG3′和CTNNB1_1_R:5′CAGGATTGCCTTTACCACTCA3′;CTNNB1_2_F:5′TTTGATGGAGTTGGACATGG3′和CTNNB1_2_R:5′CAGGACTTGGGAGGTATCCA3′;CTNNB1_3_F:5′TTTGATGGAGTTGGACATGG3′和CTNNB1_3_R:5′GAAGGACTGAGAAAATCCCTGTT3′。引物配对设计使用Primer3 (http://bioinfo.ut.ee/primer3-0.4.0/)和加州大学在网上PCR软件(http://genome.ucsc.edu/cgi-bin/hgPcr?command=start)被用来确保单个产品的产量。是由麦吉尔大学和基因组测序魁北克创新中心(MUGQIC)使用传统Sanger测序方法。序列分析视觉使用Lasergene版本10 (DNASTAR;麦迪逊,美国WI)。
免疫组织化学(包含IHC)β-catenin和执行DICER1 deparaffinised 4-μm组织部分使用Ventana自动滑动扫描(美国亚利桑那州图森市Ventana, Inc .),遵循制造商的指示。anti-DICER抗体ab14601(美国Abcam、剑桥、马)是用于1:50稀释和兔单克隆抗体anti-β-catenin(美国Epitomics,伯林盖姆,CA)是1:10 0稀释使用。
我们收购了3例肺胚细胞瘤(图1一个我):第一个是诊断后呼吸困难的历史在奥地利的29岁的女性,黎巴嫩,英语和犹太血统。总值病人接受手术切除,但在3周内,复发性疾病检测的计算机断层扫描(CT)右下前胸部,集中在胸腔的空间。8个周期与顺铂联合化疗,阿霉素和环磷酰胺是实现。尽管治疗,CT,胸前质量出现bi-lobar一个地区有规模减少,而另一个已经扩大。没有检测到转移性疾病的证据。在撰写本文时,额外的考虑手术切除。没有家族病史DICER1症状特征。第二个被诊断为肺胚细胞瘤来自加泰罗尼亚的25岁女子,西班牙,出现咳嗽、咯血(13]。治疗和随访信息描述了Bosch- barreraet al。(13]。第三个肺胚细胞瘤发生在三个孩子从西班牙的巴斯克地区,tachypnoea和轻微的呼吸窘迫。肿瘤完全切除的患者使用四个周期化疗卡铂和依托泊苷磷酸组成的组合,这是良好的。她的家庭历史是不起眼的。
整个编码区域DICER1在肿瘤gDNA突变筛查。我们发现了一个predicted-truncating体细胞DICER1突变(c.1668_1668delC;p.I557Sfs * 5)和一个典型的核糖核酸酶希望体细胞热点DICER1突变(c.5125G >;在案例1 p.D1709N) (图1 j- l)。同样,一个没有意义的体细胞突变(c。1232C>A, p.S411*) and a RNase IIIb somatic hotspot mutation (c.5425G>A; p.G1809R) were identified in case 2 (图1米- o)。筛选宪法DNA证实确定突变的体细胞来源。不可能致病DICER1突变被发现在第三(婴儿)肺胚细胞瘤。我们也筛选了三个病人的肿瘤外显子3CTNNB1在案例1突变和确定了体细胞突变(c。110 c > T, p.S37F)和案例2 (c。98 c > G, p.S33C) (图1 lo),根据这两个成人肿瘤表现出多病灶的核质β-catenin异常上皮积极性包含IHC染色(图1 g和h)。异常的间充质细胞的细胞质β-catenin积极性也观察到的案例1(数据没有显示)。
肺肉瘤样癌胚细胞瘤是一种罕见的亚型和展品恶性间质和上皮组成的两相的组织模式,它像胎儿肺(2]。的DICER1核糖核酸酶希望热点错义突变中确定每个成人肺胚细胞瘤是典型的体细胞突变确定在其他DICER1-associated肿瘤。两个热点突变已被证明DICER1干扰生产的5 p microrna顺向替代的关键金属离子结合氨基酸催化内核糖核酸酶希望域(对于p.D1709N),或靠近这种网站(p.G1809R而言)。此外,删除的存在DICER1突变加上核糖核酸酶希望达到tumourigenesis的支持二次打击模型中观察到其他DICER1-related病变。这些特征的识别DICER1突变2例强烈表明,成人肺胚细胞瘤与体细胞有关,但不是在生殖细胞突变DICER1。一些肺胚细胞瘤(WDFAs)包含morular结构组成的鳞状巢与剔透的核(图1 eS, g和h)。ekineet al。(6指出,这些morular形成与躯体的存在有关CTNNB1突变。符合这些观测之前,包含morules和例1和2CTNNB1突变。案例3缺乏两种现象。所确定的p。S37F和p.S33CCTNNB1突变之前报道发生在肺癌和导致替换的丝氨酸残基糖原合酶激酶(GSK) 3β磷酸化网站,这稳定β-catenin和既定WNT信号通路激活(6]。的相对重要性DICER1突变与wnt通路的激活肺胚细胞瘤是未知的因果关系。
这是第一次报告的DICER1突变肺胚细胞瘤。单个WDFA已经发现港口一个细胞DICER1突变(5加上一个体细胞核糖核酸酶希望热点突变(4]。十亿分之这项研究之前,肺胚细胞瘤和WDFA杰出在形态学、免疫组织化学和分子。我们的研究表明,尽管某些形态特征,这些疾病可能有一些重叠的分子资料支持老他们分组的病理评估准则。相似点和不同点应该进一步探索。新的分子数据显示,这三个肿瘤具有细胞或体细胞突变DICER1,这些变异可能是有害的和功能很重要。我们得出这样的结论:肺胚细胞瘤呈现在以后的生活中可以与躯体相关联DICER1突变。需要进一步的研究来确定我们的generalisability发现,但它似乎DICER1突变会发现重要的肺胚细胞瘤和WDFA司机,以及PPB。
确认
我们感谢塔里亚Boshari(戴维斯夫人研究所犹太总医院,蒙特利尔,QC,加拿大)帮助样本采集和相关的行政工作和Naciba Benlimame(乔治和奥尔加Minarik认为研究病理设施,犹太总医院,蒙特利尔,QC,加拿大)与包含IHC染色寻求帮助。我们还要感谢理查德挂(圣约瑟的健康中心,多伦多,加拿大)在案例1执行最初的病理学检查。
脚注
支持声明:本研究是可能由于Alex的柠檬水站基金会威廉·d·福克斯和琳恩•德•考克凡尼尔加拿大研究生奖学金。琼深色得益于西班牙医疗肿瘤学会给予。为这篇文章一直存放在资助信息FundRef。
利益冲突:披露可以找到与本文的在线版本www.qdcxjkg.com
- 收到了2016年1月22日。
- 接受2016年3月10日。
- 版权©2016人队