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我们在之前的一篇文章中报道了猴空泡病毒40 (SV40)样DNA和蛋白质在恶性间皮瘤中的可能关联原位使用SVrev和SV2for标记(PRINS)的方法,以及一般多瘤病毒引物PYVrev和使用抗体PAb280的免疫组化[1]。随着有关所使用方法的特异性提出了一些疑虑,我们觉得有必要提供一个解释性澄清说明,包括一些新的数字。
我们在原始实验中使用了几种SV40特异性引物,包括SVREV和SV2,以及一般的Polyomavirus引物PyVrev,以便排除寡核苷酸DNA引物的缺陷结合的潜在缺陷(图1)。PRINS信号仅在肿瘤间皮瘤细胞中观察到。基质细胞中未观察到PRINS信号[1]。恶性上皮间皮瘤与泛染色体引物PRINS反应阳性对照反应(图1插入)。
省略底漆的阴性对照(包括胎盘组织),包括阴性间皮瘤对照,显示任何反应性,确认反应的特异性(图2.)。此外,支气管癌的30个胸膜癌转移标本和30个反应性间皮标本没有显示任何核或细胞质原版信号与SV40引物[1]。
普林斯已用于临床医学遗传学[2,以及检测单拷贝基因[3.和病毒序列[4,5,证明这是一种可靠的技术。我们使用该技术在石蜡包埋的福尔马林固定组织中检测其他病毒,如HPV,并发现它是一种高度可靠的技术[5]。
我们对比利时恶性间皮瘤病例的SV40或SV40样DNA的存在的研究结果是通过D的研究结果证实的haeneet al。(6]。它们描述了具有经典PCR技术(SVFor3和SVREV引物)的SV40 DNA或SV40样DNA,并在28(46%)比利时间皮瘤病例中发现了SV40 PCR扩增子。细胞质,但没有核,免疫反应性染色在D 13例中的10例中发现了10例haeneet al。(6],使用PAB419和PAB101 SV40 LTAG抗体[6]。非常奇怪的是,仅仅两年之后,这项研究就受到了Hübner.和V.一个米arck(7]仅研究了12个中医瘤病例的谁只研究了12例,并且在12个调查的间皮瘤病例中的任何一个中没有发现SV40或SV40样DNA。
我们在我们的研究中用于单克隆抗体PAB280,其针对SV40小T抗原的特定表位。D.艾蒙和J.在(8]利用针对SV40大t抗原特异性表位的单克隆抗体PAb419和PAb210,描述了与细胞蛋白BAP37和prohibitin的交叉反应。他们补充说,其他抗sv40 t抗原单克隆抗体没有这种特征。我们使用的是单克隆抗体PAb280,它与D所使用的单克隆抗体PAb419和PAb210完全不同艾蒙和J.在(8]。我们使用的单克隆抗体是针对另一个SV40蛋白(小t抗原)的另一个表位[9]。d的结论艾蒙和J.在(8可能不会简单地延伸到我们研究中使用的PAb280抗体。
没有一种阴性对照,包括胎盘组织,也不是省略抗SV40 PAB280并被另一种与相同浓度的非相关抗体和相同同学替换的负门状瘤对照,显示出任何免疫反应性,证实反应的特异性。此外,支气管癌的30个胸膜癌转移标本和30个反应性间皮标本并未显示与PAB280单克隆抗体的任何核或细胞质免疫反应性。
用我们研究中使用的PAb280单克隆抗体观察核和胞浆的免疫反应性已在我们的论文中明确讨论和论述。超过60-120分钟的固定时间似乎会影响核蛋白(如c-myc蛋白)的亚细胞定位,从而导致核和细胞质的免疫反应[10]。如果观察到的免疫反应只是与细胞蛋白,如BAP37和抑制素(定位于细胞质)的交叉反应,那么我们只能期待细胞质免疫反应,而不是我们在研究中观察到的核免疫反应。在我们的研究中,固定时间从6到24小时不等,传统上大多数组织病理学实验室接受的固定时间为6到72小时。
因此,我们还必须考虑到我们正在研究石蜡嵌入式福尔马林固定组织,而不是新鲜的SV40病毒感染细胞系。感染细胞系体外它们表现为溶菌性感染,与体内甲醛固定的石蜡包埋的肿瘤间位瘤组织中的肿瘤间隙瘤细胞显示没有裂解特征[8]。
SV40病毒DNA或SV40病毒样DNA和人类肿瘤之间的可能关联仍然是一个有趣和有争议的问题,令人兴奋,有时是“信徒”和“非信徒”之间的情绪讨论。进一步的研究希望澄清这个谜团。
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